简介:摘要目的探讨人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞氧糖剥夺/恢复(OGD/R)模型中应激诱导蛋白Sestrin2基因过表达对线粒体分裂的调控作用及其机制。方法(1)将SH-SY5Y细胞分为正常对照组、OGD/R组、Sestrin2过表达组及空载体组,后2组细胞预先采用慢病毒感染方法分别构建Sestrin2过表达及空载体稳转细胞株,除正常对照组细胞外均给予氧糖剥夺4 h/恢复18 h造模处理。造模完成后采用细胞计数试剂-8(CCK-8)法检测各组细胞的存活率,采用Western blotting实验检测各组细胞中Sestrin2、线粒体动力相关蛋白1(Drp1)、线粒体分裂蛋白1(Fis1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胞浆Kelch样环氧氯丙胺相关蛋白1(Keap1)、胞核核因子E2相关因子2(Nrf2)的蛋白水平,采用透射电镜观察各组细胞中线粒体的超微结构,采用免疫荧光染色检测各组细胞中Nrf2的核移位情况。(2)将Sestrin2过表达稳转SH-SY5Y细胞株分为Sestrin2过表达组、鸦胆子苦醇+Sestrin2过表达组、二甲基亚砜(DMSO)+Sestrin2过表达组,后2组细胞在造模前分别给予Keap1/Nrf2通路抑制剂鸦胆子苦醇(终浓度100 nmol/L)或DMSO溶液(终体积分数0.1%)预处理4 h,然后各组细胞均给予氧糖剥夺4 h/恢复18 h造模处理。造模完成后采用Western blotting实验检测各组细胞中胞浆Keap1、胞核Nrf2、Drp1、Fis1的蛋白水平。结果(1)与OGD/R组相比,Sestrin2过表达组细胞的存活率明显升高(61.33%±1.15% vs. 81.00%±3.00%),Bcl-2/Bax值明显升高(0.467±0.006 vs. 0.880±0.010),Drp1、Fis1、胞浆Keap1蛋白水平明显降低(1.089±0.033 vs. 0.865±0.014;0.829±0.009 vs. 0.350±0.007;0.967±0.017 vs. 0.881±0.024),胞核Nrf2蛋白水平明显升高(0.627±0.025 vs. 0.957±0.015),差异均有统计学意义(P<0.05);并且,Sestrin2过表达组细胞的线粒体结构明显较OGD/R组更完整,Nrf2发生了明显的核移位。(2)与Sestrin2过表达组相比,鸦胆子苦醇+Sestrin2过表达组细胞胞核Nrf2的蛋白水平明显降低(0.920±0.013 vs. 0.627±0.035),Drp1、Fis1的蛋白水平明显升高(0.994±0.020 vs. 1.084±0.005;0.728±0.010 vs. 0.906±0.022),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 Sestrin2基因过表达可下调胞浆Keap1蛋白水平、促进Nrf2核移位而激活Keap1/Nrf2通路,从而抑制线粒体分裂,减少细胞凋亡,减轻SH-SY5Y细胞的OGD/R损伤。
简介:安第斯山脉的眼镜熊眼镜熊小档案学名:TremarctosornatUS特征:体长130至190厘米,尾少于10厘米,雄性体重约100至175公斤,雌性约60到80公斤。眼镜熊是南美洲仅存的熊,分布于安第斯山脉西北部海拔200到4700米的山区,包括委内瑞拉、哥伦比亚、厄瓜多尔、秘鲁(bilu)和玻利维亚等国,所以又名"安第斯熊"。高海拔森林和草原、低海拔森林和有刺灌(guan)木沙漠中都可能发现它们,但湿润的云雾带山地森林是它们最喜欢的栖息地。眼镜熊与猫熊亲缘(yuan)关系最近,除了全身为黑色或深褐色,在口吻部与眼睛周围常有白色斑纹,有时在下巴、颈部或胸部等其它部位也会有白毛。