简介:[目的]全球转基因植物及其产品的数量和种类越来越多,迫切需要可同时精准高效检测多个转化载体的检测方法。[方法]针对RF1、MS8、Topas19/2、Oxy235和RF3等5个转基因油菜品系的侧翼序列及油菜内源基因cruciferinA(CruA)序列设计多重聚合酶链式反应特异性引物,通过对转基因油菜、转基因大豆、转基因玉米、转基因水稻、转基因棉花等不同作物进行PCR扩增来测试所选择的引物特异性,优化多重PCR反应引物的浓度,用所建立的检测体系对不同混合比例的转基因油菜进行多重PCR扩增来测试所建立的检测方法的灵敏度。[结果]通过测试,仅在含有目标样品中检测出阳性结果,灵敏度达0.05%,表明所建立的6重PCR检测方法可同时精准检测RF1、MS8、Topas19/2、Oxy235和RF3等5种转基因油菜转化载体。[结论]所建立的6重转基因油菜转化体特异性PCR检测方法通量高、特异性好、灵敏度高,符合有关转基因产品检测的要求,可作为转基因油菜检测的有效方法。
简介:AtthestartofournewJournalofBiosafety,IwaspromptedbymyCo-Editors-in-Chief,ProfessorWanandProfessorYou,toprovideregularreviewsorupdatesonbiosafetyforourreaders,giventhatImostlyresideoutsideChina,andhavemanyinternationalconnections.Thatisaverybigtask,andIwasnotsurethatIcoulddoitasthejournaldemands.However,Ihadthoughtthatinalighterway,IcouldattempttopresentmythoughtsonsomeissuesthatIfeelareofimportancetoday.Chinaisveryquicklyopeningtotheworld,economically,scientifically,andinmanyotherfields,andformanycolleaguesinsideandoutsideChina,thisisanewsituation.Duringmycareer,IhaveworkedinseveralcountriesofEurope,inNewZealand,andhadprojectsonothercontinents.Thisgavemeexperiencesindifferentpartsofourglobe,andIfeelthatallofus,ecologists,havetostartthinkingmorewidely,andbeawareofdevelopments,especiallyofhumanimpacts,onfarawayplaces.Somyviewwhenwritingtheseessayswilltrytobebothlocalandglobal.ThereforeIhavechosentheoveralltitleforthisseriesofessays'Thoughtsofatravellingecologist'.Belowyouwillbeabletoreadthefirstone-Ihopeyouwillenjoythem.Ifyoufeelliketoadd,orcommentonmyessays,pleasefeelfreetodoso.Anyfeedbackwillbemostwelcome.
简介:TheyeastHAL1genewasintroducedintoArabidopsisthalianabyAgrobacteriumtumefaciens-mediatedtransformationwithvacuuminfiltrationunderthecontrolofCaMV35Spromoter.Thirty-threeindividualkanamycinresistantplantswereobtainedfrom75,000seeds.SouthernblottinganalysisindicatedthatHAL1genehadbeenintegratedintoallofthetransgenicplants'genomes.ThecopynumberofHAL1geneintransgenicplantswasmostly1to3bySouthernanalysis.Phenotypesoftransgenicplantshavenodifferenceswithwildtypeplants.Severalsamplesoftransformantswereself-pollinated,andprogeniesfromtransformedandnon-transformedplants(controls)wereevaluatedforsalttoleranceandgeneexpression.MeasurementofconcentrationsofintracellularK+andNa+showedthattransgeniclineswereabletoretainlessNa+thanthatofthecontrolundersaltstress.ResultsfromdifferenttestsindicatedtheexpressionofHAL1genepromotesahigherlevelofsalttoleranceinvivointhetransgenicArabidopsisplants.
简介:Brassinosteroids(BR)是植物激素的一个主要的组调整植物生长和开发。BRI1,对质膜局部性的蛋白质,当BR受体和它被建议了,工作它的kinase活动在调整BR的植物生长和开发有一个必要角色。这里,我们报导隔离和bri1的新等位基因的分子的描述,bri1-301,哪个表演中等词法显型和减少的回答到在正常生长条件下面的BR。顺序分析从GG识别了二底的改变到,导致到在BRI1kinase领域的989I的989G的变换在。kinase活动的试管内试金证明bri1-301不向BRI1底层TTL和BAK1举办可检测的autophosphorylation活动或磷酸化活动。而且,我们的结果建议甚至与极其损害的kinase活动,bri1-301仍然在调整植物生长和开发保留部分功能,它提出BRI1kinase活动是否在高等植物为调停BR的生长和开发是必要的问题。
简介:Galα(1,3)Gal(galepitope)isacarbohydrateepitopeandsynthesizedinlargeamountbyα(1,3)galactosyltransferase[α(1,3)GT]enzymeonthecellsoflowermammaliananimalssuchaspigsandmice.Humanhasnogalepitopeduetotheinactivationofα(1,3)GTgenebutproducesalargeamountofantibodies(anti-Gal)whichrecognizeGalα(1,3)Galstructuresspecifically.Inthisstudy,areplicationdeficientrecombinantadenoviralvectorAd5sGTcontainingpigα(1,3)GTcDNAwasconstructedandcharacterized.Adenoviralvector-mediatedtransferofpigα(1,3)GTgeneintohumantumorcellssuchasmalignantmelanomaA375,stomachcancerSGC-7901,andlungcancerSPC-A-1wasreportedforthefirsttime.ResultsshowedthatGalepitopedidnotincreasethesensitivityofhumantumorcellstohumancomplement-mediatedlysis,althoughhumancomplementactivationandthebindingofhumanIgGandIgMnaturalantibodiestohumantumorcellswereenhancedsignificantlyafterAd5sGTtransduction.AppearanceofgalepitopeonthehumantumorcellschangedtheexpressionofcellsurfacecarbohydratesreactingwithUlexeuropaeusI(UEAI)lectins,Viciavillosaagglutinin(VVA),Arachishypogaeaagglutinin(PNA),andGlycinemaxagglutinin(SBA)todifferentdegrees.Inaddition,noeffectofgalepitopeonthegrowthinvitroofhumantumorcellswasobservedinMTTassay.
简介:目的研究调控细胞程序性坏死(necroptosis)的关键分子———受体相互作用蛋白激酶3(receptorinteractingprotein3,RIP3)在甲型流感病毒H1N1PR8感染中的作用。方法用5.25×10^3半数组织细胞感染剂量(50%tissuecultureinfectivedose,TCID50)的流感病毒H1N1PR8通过滴鼻方式感染RIP3敲除(RIP3-/-)小鼠和野生型(WT)C57BL/6小鼠,连续14d每天称量小鼠体重,观察小鼠生存状态,并记录死亡情况。分别在感染后第3天(daypostinfection,d.p.i)和第7天处死解剖小鼠。取整个肺称重,左叶肺用4%多聚甲醛固定后进行HE染色,检测感染后肺组织的病理变化;通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测肺组织病毒载量;流式微珠阵列术(CBA)检测肺匀浆上清中部分炎症相关细胞因子。结果5.25×10^3TCID50流感病毒感染后,各组小鼠均出现一定程度临床症状:RIP3-/-组小鼠感染后死亡率(50%)较WT组小鼠(87.5%)显著降低(P<0.05)。分别对比每天两组小鼠体重,发现从第3天开始,WT组小鼠的体重降低比率大于RIP3-/-组,但两组小鼠体重总体改变趋势无统计学差异。病毒学方面,两组小鼠在相同时间点(3、7d.p.i)病毒载量差异均无显著性。炎症应答方面:两组小鼠肺指数(肺重与体重比值)差异无显著性。病理方面:肉眼观察大体病理及HE病理切片显示:RIP3-/-组小鼠肺组织损伤较轻,炎症浸润较少;小鼠肺部炎症细胞因子也较WT组相对减少。结论RIP3敲除的条件下,流感病毒H1N1PR8感染小鼠时因减弱了炎症应答导致肺部病理损伤减轻,提示RIP3可能在H1N1PR8流感病毒感染中发挥促炎症病理作用。
简介:目的:对一例酪氨酸血症患儿进行临床表现和基因突变的分析。方法:采用血氨基酸液相色谱-串联质谱法和尿液有机酸气相色谱-质谱分析患儿血尿代谢情况,采用PCR和一代测序技术分别对患儿的FAH基因和HPD基因的外显子及其旁翼区进行序列分析。结果:检测出先证者血液中酪氨酸水平为404.6μM、甲硫氨酸(Met)水平为126.4μM、苯丙氨酸(Phe)水平为514.8μM,三者浓度均明显高于正常水平;尿液中检测出4-羟基苯乙酸(+)、4-羟基苯乳酸(+)和4-羟基苯丙酮酸(++);基因序列分析FAH基因未见异常,HPD基因上发现突变位点c.G97A(p.A33T)。结论:根据患儿的临床表现及血尿代谢检测结果,提示患儿为酪氨酸血症患者,进一步的基因检测结果提示患儿可能为罕见的Hawkinsinuria症。
简介:目的利用昆虫细胞,杆状病毒系统表达猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白,用于E2蛋白功能、开发CSF新型疫苗以及建立相关血清学诊断方法等研究。方法采用RT—PCR扩增CSFVE2基因,将PCR产物克隆到pGEM—T—Easy载体,将该基因插入到pFast—BacHTA载体中,构建重组转座载体后转化DH10Bac感受态细胞,获得重组Bacmid质粒后转染sf9昆虫细胞,传毒3代,对表达蛋白进行Western-blot及免疫组化鉴定。结果成功克隆CSFVE2基因,其核苷酸序列为1119bp。SDS-PAGE电泳结果显示表达E2蛋白相对分子质量约为43×10^3,Western-blot和免疫组化结果证实表达蛋白能够被CSFV标准阳性血清识别。结论在Bac-to-Bac杆状病毒系统中的成功表达了CSFVE2蛋白,与CSFV标准阳性血清具有较好的反应性。
简介:以落叶松转录组测序数据为基础,利用RT-PCR从落叶松中分离出一个1590bp的APETALA2-Like转录因子基因全长编码序列,命名为LaAP2L1。蛋白质特性分析显示LaAP2L1编码529个氨基酸,为亲水性蛋白,相对分子质量为58.327kD,等电点为6.45。二级结构主要由α-螺旋(alphahelix)、β-折叠(strand)和环肽链(loop)组成。多重序列比对和系统进化分析表明LaAP2L1所编码的氨基酸与黑松、云杉等亲缘关系最近。同时,通过构建植物表达载体,利用浸花法转化模式植物拟南芥的功能研究发现,与转空载体对照拟南芥相比,过量表达LaAP2L1的转基因拟南芥的叶片、茎、花和株高都显著增大、增高,表明落叶松LaAP2L1转录因子可能参与了植物器官发育的调节。
简介:[背景]西花蓟马于2003年入侵中国后,迅速传播扩散并在局部区域造成严重危害,对我国蔬菜、花卉及果树产业的健康发展构成了巨大威胁.[方法]以线粒体DNA标记技术,对采自我国13个省(市)不同地理区域西花蓟马种群的175条COⅠ基因进行序列变异及群体遗传结构分析.[结果]试验共检测到13个单倍型,各地理种群西花蓟马的单倍型多样性Hd较高,为0.691,而核苷酸多样性π较低,为0.00652.总体固定指数Fst为0.24359,基因流Nm为0.78;种群之间固定指数和基因交流分析表明,我国各地理种群间可能出现了一定分化.种群间AMOVA分析显示,我国西花蓟马的遗传变异主要来自种群内部.对国内外不同地理种群COⅠ基因序列的单倍型进行聚类分析表明,我国西花蓟马有2个品系,即温室品系和羽扇豆品系,其中羽扇豆品系来源于新西兰和荷兰,而广泛存在的温室品系存在多个入侵来源.[结论与意义]我国西花蓟马各地理种群的发生,既与国际贸易活动有关,又与国内蔬菜、花卉、水果等的调运以及观光旅游密不可分.研究结果对西花蓟马的有效阻截及其种群扩张趋势监测意义重大.
简介:研究在BEP2D细胞中,作为Smads蛋白家族的抑制分子,Smad7对胞外信号调节的蛋白激酶(ERK1/2或p44/42)磷酸化水平的调控。将Smad7真核表达载体或人工合成的Smad7-siRNA转染BEP2D细胞,TGF—β刺激,通过Western印迹检测Smad7对p44/42蛋白磷酸化的影响。结果在永生化BEP2D细胞中,TGF-β1刺激后5min开始,可以检测到磷酸化的p44/42;到60min达到高峰,之后逐渐降低。细胞转染Smad7,TGF-β作用60rain后,p44/42磷酸化水平明显增高;而转染Smad7-SiRNA,TGF-β作用60min后,p44/42磷酸化水平显著降低。p44/42蛋白水平基本上不受TGF—β1刺激及Smad7表达水平的影响。以上结果说明,在BEP2D细胞中,Smad7可参与TGF—β对ERK/MAPK通路的活化作用。