简介:本研究摸索一种简单、方便和高产量的人胎盘免疫球蛋白(placental-elutedgammaglobulin,PEGG)的制备方法,探讨其体外对T细胞功能的抑制作用和体内对移植物抗宿主病(GVHD)的预防作用.将胎盘组织残留血洗净,用酸性缓冲液洗脱得到PEGG.用BrdUELISA检测它对PHA诱导的淋巴细胞增殖和混合淋巴细胞反应(MLR)的影响,用流式细胞仪检测它对T细胞表面CD25,CD69表达的影响,用ELISA方法检测它对T细胞分泌IFN-γ和IL-4的影响.建立小鼠GVHD模型,观察PEGG对小鼠的GVHD临床和病理表现及生存期的作用.结果表明:SDS-PAGE显示PEGG的主要成分是IgG.体外PEGG能有效地抑制PHA诱导的T淋巴细胞的增殖作用和MLR,下调T细胞表面CD25和CD69的表达,抑制IFN-γ产生,促进IL-4的生成.小鼠模型中,PEGG治疗组小鼠生存期较对照组明显延长,且GVHD症状及病理表现较对照组小鼠明显减轻.结论:PEGG在体外能有效地抑制T细胞的增殖、活化,调节Th细胞更多地向Th2细胞方向分化,在体内能有效地预防小鼠GVHD,在治疗GVHD方面具有良好的应用前景.
简介:目的采用高效液相色谱法测定地塞米松磷酸钠的含量。方法以EclipseXDB-C18为色谱柱;以甲醇-0.34%磷酸二氢钾溶液(60:40)为流动相,以240m为检测波长,流速为1.0mi/min,柱温为20℃。结果地塞米松磷酸钠在0.4-1.6μg范围内线性关系良好,r=0.9996,平均回收率为99.2%,RSD为0.5%。结论该质量标准的研究有效控制了硫酸新霉素滴眼液的质量,方法简单、结果准确、灵敏度高。
简介:背景:最近,有一篇报道将单髁聚乙烯胫骨假体垫片的储存时间与假体加速疲劳磨损及迅迷失败联系起来。我们回顾性复习了另一种单髁膝关节置换系统的技术经验,以研究聚乙烯垫片的储存时间与临床效果之间的关系。方法:1990至1996年间进行了100例骨水泥固定的单髁膝关节置换手术。聚乙烯垫片的平均储存时间为1.7年。至回顾重温时,4例失访,16例死亡,19例进行了翻修。61例膝关节置换术后假体平均存活时间为(8±2)年。结果:以翻修为终点,Kaplan—Meier生存分析显示,若垫片储存时间未超过平均储存时间,假体的6年生存率达96%;但超过平均储存时间时,仅达71%。除2例储存时间低于1年并在3年内翻修的垫片外,其他所有被取出的垫片都有疲劳磨损现象。在4—6年的临床随访中,超过平均储存时间者膝关节评分及功能评分也低。结论:垫片的老化加速了经Y射线消毒的聚乙烯垫片的疲劳磨损,影响了单髁置换的中期效果。聚乙烯垫片的储存时间和临床表现之间的关系还有待研究。可信水平:治疗研究,Ⅲ=2级(回顾性定群研究)。进一步可信度参见作者介绍。
简介:目的探讨去甲基化酶5-氮-2'-脱氧胞苷对脾酪氨酸激酶(Syk)基因再表达的影响,以及Syk基因的再表达对胃癌肿瘤生成和发展的影响。方法分别用RT-PCR和MSP法检测SGC7901、MGC803、MKN28和MKN45细胞株中Syk基因表达及甲基化情况;用5-氮-2'-脱氧胞苷处理人胃癌细胞株5GC7901后,检测此细胞株中Syk基因的甲基化及再表达情况,并用此治疗过的细胞株和未经治疗的细胞株分别接种于裸鼠皮下,对比观察裸鼠的成瘤率。结果SGC7901和MKN45细胞株中没有检测到Syk基因的表达,但可检测到Syk基因的甲基化。检测用5-氮-2'-脱氧胞苷处理过的人胃癌SGC7901细胞株,Syk基因启动子没有甲基化,RT-PCR可检测到有Syk基因。用无Syk基因表达的SGC7901细胞株接种于10只对照组裸鼠皮下,8周后均有肿块生成;而用有Syk基因再表达的细胞株接种于另10只裸鼠(治疗组)皮下,8周后只有3只有肿块生成;对照组裸鼠的成瘤率显著高于治疗组(χ^2=7.91,P〈0.05)。结论5-氮-2'-脱氧胞苷通过去甲基化使SGC7901细胞株中Syk基因再表达,Syk基因的再表达抑制了胃癌的生成和发展。
简介:目的观察成骨诱导的兔骨髓基质干细胞(BMSCs)体内、外环境下成骨活性的表达及维持.方法观察BMSCs在体外成骨诱导培养条件下的成骨分化特性;构建兔BMSCs与活骨组织共培养模型模拟体内"成骨环境",将成骨诱导的MSCs置于共培养及普通传代培养条件下进行传代培养,观察经成骨诱导的BMSCs在体外及模拟体内的培养条件下细胞的表型维持情况.结果药物成骨诱导培养的BMSCs,其ALP活性及骨钙素均显著高于普通培养组(P<0.05);经过诱导培养的BMSCs,其Ⅰ型胶原、骨钙素免疫组化阳性.RT-PCR法半定量测定Ⅰ型胶原mRNA,成骨诱导培养的Ⅰ型胶原mRNA表达量明显高于普通传代培养对照组.药物成骨诱导后的细胞在体外普通传代培养传5代后,细胞碱性磷酸酶(ALP)活性、骨钙素水平及Ⅰ型胶原表达稳定维持在较高水平,保持其成骨细胞的表型;在共培养条件下,ALP活性、骨钙素水平Ⅰ型胶原表达保持在高水平,且ALP活性、骨钙素水平在大部分时间点均高于普通传代培养.结论药物成骨诱导培养呈现促BMSCs向成骨方向转化的特点,能使ALP、骨钙素及Ⅰ型胶原表达短期内达到高水平;经成骨诱导的BMSCs在体外或模拟的体内传代培养条件下,均能维持成骨表型,保持成骨活力.
简介:目的研制超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)锚定的膜表达热休克蛋白(HSP)70的肠癌细胞瘤苗,研究其抗肿瘤治疗作用。方法以先期实验制备的膜表达HSP70肠癌细胞株CT26。扩增后以本研究组早先研制的跨膜型SEA蛋白转染法锚定肠癌细胞,灭活并制备双重修饰的肠癌细胞瘤苗。观察瘤苗在体外对小鼠脾淋巴细胞的增殖刺激效应;在BALB/c小鼠结直肠癌移植模型中观察瘤苗的抗癌治疗作用:瘤体生长抑制和荷瘤鼠的生存时间;并同时检测实验鼠的自然杀伤细胞(NK)和细胞毒淋巴细胞(CTL)活性。结果激光共聚焦显微镜和流式细胞术均证明瘤苗细胞的双重修饰:SEA锚定,HSPT0表达并结合在瘤苗细胞膜表面。比较对照。SEA锚定或膜表达HSPT0的单一修饰瘤苗均显示出较高的鼠淋巴细胞增殖刺激效应;较强的瘤体生长抑制。并使荷瘤鼠的生存时间延长。而SEA锚定的膜表达HSP70的双重修饰瘤苗比单一修饰瘤苗,有着更高的淋巴增殖刺激效应,更强的瘤体生长抑制作用,并使荷瘤鼠的生存时间进一步延长。结论成功研制了超抗原SEA锚定的膜表达HSPT0的肠癌细胞瘤苗,此双重修饰瘤苗对结直肠癌荷瘤小鼠有更强的治疗作用。
简介:本研究探讨HLA新的等位基因HLA-B*4061的分子基础。采用盐析法抽提样本DNA,利用PCR方法扩增先证者HLA-B基因的第1-8外显子,PCR产物直接经TOPO克隆到质粒载体中得到单链,对所得克隆进行HLA-B基因第2、3、4外显子双向测序分析。应用PCR-SSP方法证实测序所发现的突变。结果表明:先证者样本克隆测序得到2个等位基因,其中1个等位基因为B+4601,另1个经blast验证其为新的等位基因,新的等位基因序列已递交GenBank(DQ089628,DQ089629,DQ089630)。与最接近的B*400101等位基因序列相比,新的等位基因仅在第2外显子上有1个核苷酸不同,即第272位C→A,导致第67位氨基酸Ser→Tyr。结论:HLA-B*4061等位基因为新的HLA-B等位基因,已荣获世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名。
简介:烧伤,尤其是大面积深度烧伤,仍然是一种未被完全征服的严重创伤。广袤而贫困落后的西部尚待开发,传统的重工业仍在大力发展,石化能源的需求不断增加;防灾、安全措施重视程度不够,宣传工作力度欠佳,恐怖主义未被彻底遏制,和平尚不能完全得到保障。因此,烧伤的发生率远未降低。我们从事烧伤治疗工作的医务工作者们担负着十分艰巨的使命,如何来解除烧伤患者的生命威胁、强烈的心理创伤和减轻他们的经济负担,如何来改善这些患者创伤愈合后的生活质量,恢复其工作能力并最终重返社会,是我们的责任所在!不言而喻,志愿终身与烧伤作斗争的医生应如何做好自我培养,才能恪尽其职为人民谋福,是值得着重提出的问题。
简介:目的:建立一种骨髓间充质干细胞(MesenchymalStemCells,MSCs)体外培养方法,研究其表面特征性标志(表面分子)。方法:用含10%小牛血清的低糖DMEM培养液,把细胞的接种浓度分成A组小于1×10^4g/ml与B组大于5×10^6g/ml两组进行体外培养,扩增。倒置显微镜观察其形态、增殖能力,流式细胞仪检测细胞的表而分子表达情况。结果:A组细胞生长缓慢,但形态、增殖能力及表面特征性标志与B组相同。MSCs同时表达CDW90、CD44、CD29及CD1a。结论:该方法可作为体外培养MSCs的一种方法,经济实用。MSCs不仅表达CDw90、CD44、CD29而且表达CD1a。
简介:目的探讨室间隔在心功能维持中的作用及扩血管药物治疗室间隔心肌梗死的不同效果。方法形成室间隔心肌梗死的动物模型,观察心肌梗死前后及小剂量多巴胺和硝普钠治疗前后心功能的改变。结果室间隔梗死后右室收缩功能及左右心室的舒张功能均明显降低,动脉携氧量减少。小剂量多巴胺能明显改善室间隔梗死后的心室收缩功能,降低体循环阻力(P〈0.01),增加动脉携氧量及氧运输量(P〈0.01;P〈0.05)。同时缩短二尖瓣E峰减速时间(DT)及左右心室等容舒张时间间期(IVRT)。硝普钠减低二尖瓣及三尖瓣A峰流速、增大E/A比值、缩短左右心室IVRT(P〈0.01,P〈0.05),但心室收缩功能改善不明显。结论心功能的维持有赖于室间隔的正常运动,血管扩张剂可以明显改善室间隔梗死后的心功能,其中硝普钠以改善心室舒张功能为主,而小量多巴胺不仅可以改善心室的收缩功能,同时可以部分改善心室的舒张功能。