简介:采用pGAPZαA为表达载体,SMD1168毕赤酵母为受体系统,构建分泌型的Brazzein毕赤酵母重组菌。按照毕赤酵母偏爱密码子设计Brazzein基因,共设计4对引物,采用SOE—PCR法合成Brazzein基因,构建克隆载体pUC57-Bra与酵母表达载体pGAPZαA—Bra。将重组质粒线性化,电转导人Pichia.pastorisSMD1168中,用高浓度的Zeocin筛选高拷贝转化子。将重组菌株接种于YPD培养基诱导表达,进行SDS—PAGE分析。成功构建了分泌型的Brazzein毕赤酵母重组菌,SDS—PAGE表明,目标蛋白的相对分子量与理论值一致,诱导72h后的目的蛋白表达量达0.12dE。
简介:多酚氧化酶(PPO)是酶促褐变的关键酶,与果蔬加工制品的色泽、抗氧化能力密切相关。以蜜梨果实为原料,邻苯二酚为底物,采用分光光度法研究蜜梨多酚氧化酶的酶学特性。结果表明:pH和温度对蜜梨PPO活性有明显的影响,其最适pH为4.5,最适温度为34℃。在加工过程中,可通过调节pH和温度来降低蜜梨PPO活性,减少褐变的发生:蜜梨PPO催化底物邻苯二酚的酶促反应动力学与米氏方程高度符合,R^2-0.9972,其动力学方程为专1/V=0.17371/[S]+0.4775,最大反应速率Vmax=2.09U·min^-1,米氏常数Km=0.36mol·L^-1;蜜梨PPO具有一定的热稳定性,随着温度的提高。完全抑制PPO活性所需要的时间逐渐减少。采用短时高温(90℃,1min)的热处理,不仅可有效降低蜜梨加工过程中的酶促褐变.而且可减少蜜梨汁营养成分的损失.较好地保持其固有色泽。
简介:五味子具有极高的营养价值,将五味子提取液与牛乳相结合制成的饮料在口感和组织状态上独具一格,并且可以达到很好的适口性,影响酸性乳饮料稳定性的主要因素是牛乳的脂肪上浮和蛋白沉淀,通过对不同稳定剂配比进行正交试验分析,配制出蛋白质含量1.0%以上,五味子提取液添加量12%的酸性乳饮料配方,并确定了稳定剂的种类及添加量。结果表明,采用全脂乳粉添加量4%和五味子提取液添加量12%的配比时,添加6%的白砂糖,0.035%的阿斯巴甜和0.30%的柠檬酸,pH值4.10时饮料的风味和口感最佳;当稳定剂添加量为CMC0.45%,黄原胶0.06%,螯合剂0.06%,乳化剂0.04%时,五味子酸性乳饮料的稳定性达到最好。