简介:摘要目的探讨坐骨神经损伤后长链非编码RNA(LncRNA)差异表达的基因,以及LncRNA MX1对大鼠雪旺细胞迁移、增殖能力的影响。方法选取10周龄无特定病原体级雄性SD大鼠24只,随机分为0 d(T0)、3 d(T1)、7 d(T2)和14 d(T3)4组,每组6只,建立坐骨神经损伤动物模型。分别于模型建立后第0、3、7、14天取相应组大鼠坐骨神经损伤处的残端组织提取RNA,制备RNA基因芯片进行Heatmap聚类分析,筛选出各个时间点发生差异表达的基因,并选择其中差异表达显著的基因LncRNA MX1。培养iCell-r030大鼠雪旺细胞,分为对照组、Control siRNA组(siRNA组)和LncRNA MX1 siRNA组(siRNA-MX1组),使用相应试剂进行转染。转染后采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测3组雪旺细胞的LncRNA MX1mRNA表达情况,采用Transwell小室检测雪旺细胞的迁移能力,采用5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EDU)实验检测雪旺细胞的增殖能力。结果各组大鼠均造模成功,实验过程中无大鼠死亡。大鼠损伤坐骨神经组织LncRNA差异基因Heatmap聚类分析的热图显示,与T0组比:T1组共3 066个LncRNA基因发生差异性表达,其中1 634个LncRNA基因表达上调,1 432个LncRNA基因表达下调;T2组共2 498个LncRNA基因发生差异性表达,其中1 634个LncRNA基因表达上调,864个LncRNA基因表达下调;T3组3 567个LncRNA基因发生差异性表达,其中有1 643个LncRNA基因表达上调,1 924个 LncRNA基因表达下调。各组差异表达的LncRNA基因中LncRNA MX1的差异倍数数值较大,差异表达显著。大鼠雪旺细胞qRT-PCR结果显示,转染LncRNA MX1 siRNA后,siRNA-MX1组LncRNA MX1的相对表达量为1.0±0.2,低于对照组的2.3±0.2和siRNA组的2.2±0.2,差异有统计学意义(F=78.47,P<0.001);而对照组和siRNA组组间差异无统计学意义(P>0.05)。迁移、增殖试验结果显示,siRNA-MX1组细胞迁移数量为(24.1±4.2)个、EDU阳性细胞与DAPI阳性细胞的比率为27.5%±2.8%,低于对照组的(50.3±7.8)个、44.1%±7.2%和siRNA组的(49.2±6.2)个、41.8%±7.0%,差异均有统计学意义(F=93.15、121.26,P值均<0.001);而对照组和siRNA组间差异均无统计学意义(P值均>0.05)。结论大鼠坐骨神经损伤后LncRNA MX1差异表达显著,下调LncRNA MX1在大鼠雪旺细胞中的表达可显著降低细胞的迁移、增殖能力。
简介:摘要外泌体(exosome)是包裹着核酸、蛋白质、脂类、氨基酸和代谢物的直径大约100 nm的膜性囊泡,大部分细胞都可分泌。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是长度大于200个核苷酸的非编码RNA,没有蛋白质的表达,但能在转录、转录后及表观遗传水平上调控基因的表达。外泌体lncRNA(exosomal lncRNA)是指由外泌体携带、运输和分泌的lncRNA,可以通过参与细胞间信号传导,引起细胞内基因表达改变,对肿瘤等疾病的发生发展产生重要影响。外泌体lncRNA有望成为一种新型的肿瘤生物标记物,可通过液体活检应用到肿瘤的诊断、治疗及预后判断中。本文就外泌体lncRNA在肿瘤中的作用以及在肿瘤诊断、治疗和预后判断方面的应用潜力进行综述。
简介:摘要分级诊疗制度是合理配置医疗资源,促进基本医疗服务均质化的重要举措。医疗联合体(以下简称医联体)是分级诊疗的重要服务模式和服务体系,其作用是实现上下联动,满足患者的就诊需求。信息化建设是推动医联体服务的重要抓手。为了解决"联不通"的问题,医联体需要一套完整的、互联互通的医院信息化平台作为支撑,建立区域性的转诊平台,实现医联体内各医疗机构一体化服务。上海交通大学医学院附属仁济医院针对分级诊疗的"十六字方针",构建了基于区块链的转诊系统,纳入S2B2C模式理念,利用区块链技术的可溯源、不可篡改和分布式记账的特性,实现了与下级医院的数据独立存储,形成信息实时共享和互联互通,为医联体管理提供了可行性方案。
简介:摘要目的探索长链非编码RNA(lncRNA)068对黑素瘤细胞系A375迁移的影响及潜在机制。方法2015年12月至2020年11月在南通大学附属医院皮肤科门诊收集经病理确诊的皮肤黑素瘤患者21例,采用定量PCR(qPCR)检测其黑素瘤组织与相邻癌旁组织中lncRNA 068的表达。通过慢病毒转染在A375细胞中过表达或敲降lncRNA 068,过表达实验分为LV-GFP组和LV-lncRNA 068组,低表达实验分为LV-LacZ shRNA组和LV-lncRNA 068 shRNA组,其中LV-GFP组和LV-LacZ shRNA组均作为对照;Transwell实验及划痕实验检测过表达或敲降lncRNA 068对A375细胞迁移的影响,EdU细胞增殖实验和CCK8法分别检测各组增殖细胞比例及细胞活力,细胞免疫荧光染色检测过表达或敲降lncRNA 068对上皮-间质转化的影响。将各组慢病毒转染的A375细胞接种于BALB/c裸鼠腋窝,每3天测量并计算肿瘤体积,30 d后处死所有裸鼠,切除肿瘤组织并测量肿瘤体积和质量。将培养的B16F10细胞接种于BALB/c裸鼠背部和足部皮下构建B16F10移植瘤模型,2周后处死裸鼠,qPCR和Western印迹法分别检测B16F10移植瘤及癌旁组织中炎症因子mRNA的表达及IKK/P65信号通路相关蛋白的表达。两组间比较采用t检验,各组间不同时间点肿瘤体积及质量的比较采用重复测量方差分析。结果qPCR显示,人黑素瘤组织及裸鼠B16F10移植瘤组织中lncRNA 068相对表达量(0.414 ± 0.109、0.717 ± 0.041)均明显低于相应的癌旁组织(1.050 ± 0.103、1.011 ± 0.023,t = 19.48、10.83,均P < 0.001)。Transwell实验及划痕实验均显示,LV-lncRNA 068组细胞迁移能力显著低于LV-GFP组(均P < 0.01),而LV-lncRNA 068 shRNA组明显强于LV-LacZ shRNA组(均P < 0.05)。细胞免疫荧光实验显示,与LV-GFP组相比,LV-lncRNA 068组E钙黏蛋白荧光强度增强,而N钙黏蛋白荧光强度减弱(均P < 0.001);与LV-LacZ shRNA组相比,LV-lncRNA 068 shRNA组E钙黏蛋白荧光强度减弱,而N钙黏蛋白荧光强度增强(均P < 0.05)。体内裸鼠成瘤实验显示,过表达组与敲降组黑素瘤的体积、质量差异均无统计学意义(P > 0.05)。qPCR和Western印迹实验显示,LV-lncRNA 068组A375细胞中白细胞介素(IL)-10、紧密连接蛋白1 mRNA及蛋白的表达均显著高于LV-GFP组(均P < 0.05),而LV-lncRNA 068 shRNA组IL-10、紧密连接蛋白1 mRNA及蛋白表达均显著低于LV-LacZ shRNA组(均P < 0.05)。B16F10黑素瘤组织中IL-10 mRNA的表达量显著低于癌旁组织(P < 0.01),而IL-6、TNF- α mRNA表达及p-P65蛋白表达均显著高于癌旁组织(均P < 0.001),p-IKK蛋白表达量显著高于癌旁组织(P < 0.01)。结论LncRNA 068过表达可抑制黑素瘤细胞A375的迁移,并可能通过抑制IKK/P65信号通路影响炎症的发生,抑制上皮-间质转化过程。
简介:【摘要】目的:探究肺癌患者血浆肿瘤异常糖链蛋白(TAP)的表达及其临床分析。方法:纳入2019年6月-2020年6月时段内80例肺癌患者为研究组,纳入同期健康体检者80例为对照组,采集2组血液样本检测异常糖链蛋白(TAP)水平,分析TAP的表达及临床意义。结果:研究组TAP凝聚物面积、TAP阳性率较对照组更高(P<0.05);化疗后TAP凝聚物面积较化疗前明显缩小(P<0.05);分析可知,TAP阳性率与患者性别、年龄、临床分期无明显关系(P>0.05);与远处转移有关联(P<0.05)。结论:肺癌患者血浆TAP水平呈高表达状态,通过TAP水平检测对肺癌患者早期诊断、临床疗效监测、治疗效果及预后评估具有重要的意义。
简介:摘要目的研究增殖期与消退期婴儿血管瘤(IH)长链非编码RNA(lncRNA)与mRNA的差异表达情况。方法2019年1-3月在四川大学华西医院小儿外科收集行手术切除治疗的8例IH组织(增殖期与消退期各4例),运用基因芯片技术筛选差异表达(P < 0.05,差异倍数≥ 1.5)lncRNA和mRNA,并用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术对芯片结果进行验证。同时,应用生物信息学方法,对差异基因进行GO功能和KEGG通路分析,并构建lncRNA-mRNA共表达网络,预测差异lncRNA的顺式作用靶基因。结果通过基因芯片技术共筛选出405条差异lncRNA(108条下调,297条上调)与772条差异mRNA(107条下调,665条上调)。qRT-PCR验证4条lncRNA(n335248、ENST00000450864、n333319和n335185)与4条mRNA(EDNRA、IFI6、HK2与ITGA1)的表达,结果与基因芯片检测结果一致。GO与KEGG富集分析发现,差异mRNA主要参与血管凝固、轴突导向、血管生成和细胞黏附等生物过程,差异mRNA主要富集在代谢通路、细胞局部黏附、肌动蛋白细胞骨架调控、白细胞跨内皮迁移、磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶等信号通路。lncRNA-mRNA共表达网络由度值≥ 15的23条mRNA和58条lncRNA共同构建组成。结论增殖期与消退期IH组织中存在大量差异表达的lncRNA和mRNA,这些lncRNA可能通过调控相应的靶mRNA参与IH发生发展。
简介:摘要染色体胚系基因重排,产生的TCR和BCR(Ig)数量众多,它们是保证机体对种类繁多的抗原产生特异性应答的分子基础.了解TCRB链V(D)J基因重排的详细机制,对研究机体适应性免疫应答具有重要意义.近年来研究发现,V(D)J基因重排时遵循12/23规则即含有12对碱基间隔序列的RSS仅和含有23对碱基间隔序列的RSS发生重排.但是,在TCRB链中,我们发现一种超越了12/23规则的限制,被称为B12/23.本文就TCRB链基因重排中B12/23限制的相关研究进展予以综述.关键词TCRB链;V(D)J基因重排;B12/23规则;RSS;RAG-1;RAG-2中图分类号R733.1文献标识码B文章编号1008-6315(2015)10-0217-02
简介:载脂蛋白(APO)B主要分布在人体血液中的的低密度脂蛋白(LDL)和极低密度脂蛋白(VLDL)中,约占LDL蛋白质的95%~99%,其主要功能是参与脂质转运和被细胞膜上的LDL受体识别。研究证明,apoB与动脉粥样硬化(AS)的发生有着密切的关系。近年来,多数医院已开展了测定人体血液中apoB含量来判定AS的危险程度。而国内所用的试剂盒均为多克隆抗体,这给临床测定结果的准确性和特异性带来了一定的差异。为此国内许多研究单位拟想通过基因重组技术,将apoB单抗细胞株通过逆转录、构建使其表达apoB单链抗体。
简介:摘要目的观察肺腺癌合并肺栓塞患者中差异表达的长链非编码RNA(lncRNA),探讨肺腺癌合并肺栓塞发生的潜在分子机制。方法收集新疆医科大学附属肿瘤医院2019年1月至2019年12月肺腺癌合并肺栓塞、单纯肺腺癌、单纯肺栓塞和正常对照组人群外周血各4例,TRIzol® Reagent提取总RNA,利用Illumina高通量测序技术同时对肺腺癌合并肺栓塞、肺腺癌、肺栓塞以及正常人群(各4例)lncRNA表达谱测定,分别比较各组差异表达的lncRNA。lncRNA样本相关性采用StringTie软件和PrepDE.py进行相关性分析。结果13 897个已知lncRNA,经CPC、CNCI和HMMER软件进行编码能力预测发现12 900个新型lncRNA。肺腺癌合并肺栓塞与单纯肺腺癌组比较,检测到725个差异表达的lncRNA(其中326个上调,399个下调,P<0.05)。肺腺癌合并肺栓塞与单纯肺栓塞组比较,发现932个差异表达的lncRNA(其中452个上调,480个下调,P<0.05)。肺腺癌合并肺栓塞与正常对照组比较,1 190个差异表达的lncRNA(其中453个上调,737个下调,P<0.05),差异倍数最大的上调lncRNA为MERGE.31027.6,差异倍数最大的下调lncRNA为MERGE.30976.2。结论lncRNA-MERGE.31027.6、lncRNA-MERGE.30976.2可能参与肺腺癌合并肺栓塞的发生。