简介：摘要目的探讨组织蛋白酶G(CatG)提高T细胞治疗胶质瘤效果的机制。方法（1）收集胶质瘤数据库中397例胶质瘤患者的临床资料，采用Kaplan-Meier法进行生存分析，Pearson相关性分析胶质瘤组织中CTSG mRNA与β2微球蛋白(β2M) mRNA表达的相关性。(2）从胶质母细胞瘤中分离培养胶质瘤干细胞（GSC)387和GSC3565，分别分化培养获得胶质瘤分化细胞（DGC)387和DGC3565。取GSC387细胞，分为CatG组、CatG抑制物组，分别用0.1 μg/μL重组人类白细胞抗原(HLA)-A*02∶01和HLA-B*15∶01与4 ng/μL CatG、10 μmol/L CatG抑制物共培养10 min，应用托马斯亮蓝染色检测细胞HLA-A*02:01和HLA-B*15:01的表达，应用Western blotting检测细胞主要组织相容性复合体（MHC)-Ⅰ、MHC-DR蛋白的表达。(3）取GSC387、GSC3565细胞和DGC387、DGC3565细胞，分别分为4组（CatG组、CatG抑制组、空白抗体1组，空白抗体2组），分别加入4 ng/μL CatG、10 μmol/L CatG抑制物、空白抗体1、空白抗体2处理24 h，采用流式细胞仪检测细胞HLA-ABC的表达。(4）取GSC387、GSC3565细胞和DGC387、DGC3565细胞，分别分为CatG组和CatG抑制组，采用荧光素酶实验检测CatG对T、自然杀伤细胞杀伤作用的影响。结果(1)CTSG mRNA高表达组患者的生存率高于CTSG mRNA低表达组，β2M mRNA低表达组患者的生存率高于β2M mRNA高表达组，差异均有统计学意义(P<0.05)。相关性分析显示胶质瘤组织中CTSG mRNA与β2M mRNA的表达呈负相关关系(r=-9.160，P=0.000)。(2）托马斯亮蓝染色检测显示：与CatG抑制物组比较，CatG组细胞HLA-A*02∶01和HLA-B*15∶01的表达增加。Western blotting检测显示：与CatG抑制物组比较，CatG组细胞MHC-Ⅰ的表达增加，MHC-DR的α和β链降低。(3)流式细胞仪检测显示：CatG组GSC387、GSC3565细胞HLA-ABC的表达高于CatG抑制物组，差异有统计学意义(P<0.05)。(4）荧光素酶实验显示：与CatG抑制物组比较，CatG组T细胞对GSC细胞的杀伤比例增加，差异有统计学意义(P<0.05)。结论CatG可提高免疫治疗GSC的效果，其机制为提高细胞表面的MHC-Ⅰ的表达。

简介：摘要目的探讨微创肺表面活性物质治疗(LISA)及无创高频辅助通气(nHFOV)在极低及超低出生体质量儿呼吸窘迫综合征(NRDS)治疗中的应用与疗效。方法将2018年7月至2019年10月郑州大学第二附属医院新生儿重症监护病房(NICU)收治的85例胎龄27～32周患NRDS的极低及超低出生体质量儿，按出生胎龄(>27～29周、>29～30周、>30～31周、>31～32周)进行分层，采用信封随机法，分为LISA组(40例)和气管插管-使用肺表面活性物质-拔管组(INSURE组)(45例)。LISA组再采用信封随机法分为经鼻持续正压通气(CPAP)组(25例)及nHFOV组(15例)。INSURE组患儿在正压通气下，经气管插管注入肺表面活性物质(PS)，后拔出气管插管，予CPAP辅助通气。LISA组患儿在CPAP下，经胃管注入PS，后拔除胃管，CPAP组患儿继续予CPAP辅助通气；nHFOV组患儿予nHFOV辅助通气。如无创辅助通气失败，给予机械通气。观察LISA技术及nHFOV的可行性，比较各组不良反应、机械通气、吸氧时间、住院时间及NRDS并发症的发生情况。结果1．与INSURE组相比，LISA组机械通气率(5.0%比22.2%)、支气管肺发育不良(BPD)发生率(20.0%比42.2%)和脑室周围白质软化(PVL)发生率(12.5%比42.2%)较低，差异均有统计学意义(均P<0.05)；总吸氧时间、住院时间、脑室内出血(IVH)、早产儿视网膜病(ROP)、坏死性小肠结肠炎(NEC)差异均无统计学意义(均P>0.05)。2.LISA组与INSURE组置管操作的不良反应比较，LISA组中CPAP组及nHFOV组无创通气不良反应发生率比较，差异均无统计学意义(均P>0.05)。3.出生胎龄越小，NRDS并发症的发生率越高，同一胎龄LISA组并发症发生率较INSURE组低，但差异无统计学意义(P>0.05)。4.LISA组中CPAP组及nHFOV组机械通气率、BPD、IVH、PVL、ROP及NEC并发症发生率比较，差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论在胎龄27～32周极低及超低出生体质量儿NRDS的治疗中，LISA技术是一种安全有效的PS给药方法，在降低机械通气率、BPD及PVL的发生率方面有优势。nHFOV可作为极低及超低出生体质量NRDS患儿呼吸支持的初始模式。LISA联合nHFOV可用于NRDS的治疗。

简介：摘要目的初步探讨MMP-9抑制剂阻断RPE细胞表面CD73脱落，防治实验性自身免疫葡萄膜炎（EAU）的机制。方法体外培养分离自野生型C57BL/6小鼠及CD73基因敲除（CD73-/-）小鼠的RPE细胞，以脂多糖及TNF-α共同干预，诱导RPE表面CD73脱落。依据是否同时加入MMP-9抑制剂CTK8G1150（终浓度5.0 μmol/L ），将两种小鼠培养的RPE细胞分别设为MMP-9抑制剂干预组及无干预对照组。每组细胞给予溶媒、1 μmol/L单磷酸腺苷（AMP）、1 μmol/L AMP及3 μmol/L 5'-α,β-亚甲基-二磷酸腺苷（APCP）（AMP+ APCP）进行干预。氚化胸苷掺入法检测不同组别RPE细胞对CD4+ T细胞增生的刺激作用。分别以野生型B6小鼠及CD73-/-小鼠为受体，过继免疫诱发EAU。受体小鼠分别随机分为MMP-9抑制剂干预组及未干预对照组，于过继免疫后4、7、10 d视网膜下腔分别注射CTK8G1150或溶媒。实时定量PCR （RT-PCR）、Western blot法检测受体小鼠RPE细胞中CD73 mRNA及蛋白表达。组间比较采用单因素方差分析。结果刺激方式为AMP时，C57BL/6 MMP-9抑制剂干预组CD4+ T细胞的增生能力较无干预组显著下降，差异有统计学意义（F=13.28，P<0.01）；溶媒、AMP + APCP时，两组CD4+ T细胞增生能力比较，差异无统计学意义（F=7.78、6.58，P>0.05）。CD73-/-MMP-9抑制剂干预组、无干预组不同刺激方式CD4+ T细胞增生能力比较，差异均无统计学意义（F=5.24、6.12、7.04，P>0.05）。RT-PCR检测结果显示，B6受体小鼠MMP-9抑制剂组、无干预对照组RPE细胞中CD73 mRNA相对表达量比较，差异无统计学意义（F=6.54，P>0.05）。Western blot检测结果显示，B6受体小鼠MMP-9抑制剂组RPE细胞中CD73蛋白表达较未干预对照组显著增加，差异有统计学意义（F=15.24，P<0.01 ）。结论MMP-9抑制剂阻断RPE细胞表面CD73的脱落对EAU具有保护作用。

简介：摘要目的探讨神经生长因子(nerve growth factor，NGF)和第10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10，PTEN)双基因修饰的骨髓间充质干细胞促进周围神经再生。方法通过构建NGF稳定转染的骨髓间充质干细胞株，PTEN基因的siRNA瞬时转染NGF-BMSC稳转株，构建双基因修饰的BMSC。采用切断坐骨神经法构建周围神经损伤模型，BMSC移植治疗，随机分为空白对照组，普通细胞组和双基因修饰组。采用SFI测定实验和肌湿重恢复率测量实验检测损伤神经元的功能恢复情况，利用Nestin-1免疫组化染色，HE和LFB染色以及透射电镜下观察再生神经超微结构，检测损伤后的神经元的分化和再生能力。结果双基因修饰组BMSC治疗后神经功能恢复能力明显强于普通细胞治疗组(P<0.05)；双基因修饰的骨髓间充质干细胞在神经损伤局部能更好地存活，分布更广；双基因修饰组BMSC治疗后，神经分化能力更强，更能促进神经轴突和髓鞘再生。结论NGF基因的过表达和PTEN基因的沉默的双重修饰的BMSC，能够更好地促进周围神经损伤后神经元的分化和再生能力，达到更好的治疗效果。

简介：摘要目的研究子痫前期胎盘中第10号染色体缺失性磷酸酶和张力蛋白同源物基因(phosphatase and tensin homologue-deleted chromosome ten gene，PTEN)、Syncytin-1与母体内皮损伤、滋养细胞损伤的相关性。方法选择2015年2月至2017年12月在南方医科大学附属小榄医院诊断为子痫前期并分娩的46例患者及同期正常分娩的的80名孕妇，分娩前留取母体外周血并测定内皮损伤标志物的含量，分娩后留取胎盘并测定PTEN、Syncytin-1、细胞凋亡基因的表达量以及氧化应激标志物的含量。结果子痫前期胎盘组织中PTEN的mRNA表达量显著高于正常胎盘组织(t＝32.797、P<0.000)，Syncytin-1的mRNA表达量显著低于正常胎盘组织(t＝28.506、P<0.000)；子痫前期患者母体血液循环中内皮素-1(endothelin-1，ET-1)、可溶性血管内皮生长因子受体-1(soluble fms-like tyrosine kinase receptor 1，sFlt-1)的含量显著高于正常妊娠孕妇(t值分别为39.884、40.243、P均<0.001)，且与胎盘组织中PTEN的mRNA表达量呈正相关(相关系数分别为0.674、0.596，P分别为0.004、0.007)，与Syncytin-1的mRNA表达量呈负相关(相关系数分别为－0.615、－0.637，P分别为0.009、0.008)，一氧化氮(nitric oxide ，NO)、前列腺素I 2(prostaglandin I2，PGI2)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor ，VEGF)、胎盘生长因子(Placental growth factor ，PLGF)的含量显著低于正常妊娠孕妇(t值分别为30.944、27.404、32.827、26.644、P均<0.001)，且与胎盘组织中PTEN的mRNA表达量呈负相关(相关系数分别为－0.648、－0.592、－0.537、－0.613，P分别为0.006、0.009、0.013、0.007)，与Syncytin-1的mRNA表达量呈正相关(相关系数分别为0.632、0.572、0.537、0.654，P值分别为0.010、0.013、0.015、0.009)；子痫前期胎盘组织中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate-reduced oxidase 4，NOX4)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)、8-羟基脱氧鸟苷酸(8-hydroxydeoxyguanosine，8-OHdG)的含量以及自杀相关因子(factors associated suicide ，Fas)、Fas配体(fas ligand，FasL)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein，Bax)、葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78 ，GRP78)、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein ，CHOP)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cysteine-containing aspartic acid proteolytic enzymes-3，Caspase-3)的mRNA表达量显著高于正常胎盘组织(t值分别为27.714、27.704、26.786、22.622、27.964、25.496、25.893、30.837、28.975、P均<0.001)，且与胎盘组织中PTEN的mRNA表达量呈正相关(相关系数分别为0.703、0.651、0.593、0.628、0.449、0.552、0.612、0.569、0.502，P值分别为0.003、0.007、0.004、0.006、0.016、0.010、0.006、0.012、0.018)，gn Syncytin-1的mRNA表达量呈负相关(相关系数分别为－0.615、－0.714、－0.577、－0.548、－0.512、－0.585、－0.619、－0.495、－0.662，P值分别为0.009、0.001、0.013、0.015、0.018、0.011、0.009、0.023、0.003)，Peroxiredoxin-Ⅱ蛋白(PrxⅡ)、PrxⅢ、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase ，SOD)的含量以及B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2，Bcl-2)的mRNA表达量显著低于正常胎盘组织(t值分别为26.115、23.502、21.439、17.194、P均<0.001)，且与胎盘组织中PTEN的mRNA表达量呈负相关(相关系数分别为－0.713、－0.657、－0.591、－0.642，P值分别为<0.001、0.006、0.009、0.007)，与Syncytin-1的mRNA表达量呈正相关(相关系数分别为0.562、0.711、0.682、0.608，P值分别为0.013、<0.001、0.002、0.008)。结论子痫前期胎盘中PTEN的高表达以及Syncytin-1的低表达能够加重母体内皮损伤以及胎盘滋养细胞损伤。

简介：　【摘要】勾漏双向四步教学法中指出，教师的教学要“立足于各自的学情”，四步教学法“哪步适合用哪步”，是对教师课堂教学的一个改革，从另一个角度阐明了数学练习课要“不拘一格”。长方体与正方体的表面积的学习,是学生学习几何知识由平面计算扩展到立体计算的开始，虽然学生对旧知识已经有了一定的积累，但空间思维还没有真正形成。为了使学生更好地建立表面积计算方法，我认为应加强动手操作，魔方是一种益智玩具，在这里，我创设了用魔方设计的练习课，把它当作了一种有效的教学用具，使学生的眼睛看过来，手指动起来，思维活起来，用实物代替枯燥的想象，直观有效，更重要的是学生学得轻松有趣，印象深刻，思维得到了训练。　

简介：摘要目的观察第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因(PTEN)和凋亡抑制蛋白生存素(Survivin)在直肠癌组织中的表达，探讨其对直肠癌新辅助放化疗(nCRT)后肿瘤退缩效果的预测价值及与预后相关性。方法收集华中科技大学同济医学院附属普爱医院2014年1月至2016年1月行nCRT＋全直肠系膜切除术(TME)＋辅助化疗(aCT)的直肠癌患者78例，应用免疫组织化学染色法检测直肠癌组织中PTEN、Survivin的表达，应用Spearman等级相关检验分析PTEN和Survivin表达的关系，应用美国肿瘤联合委员会(AJCC)-肿瘤病理评估(TRG)评分系统对放化疗后肿瘤退缩效果进行评价，分析PTEN和Survivin同肿瘤退缩效果之间的关系。采用Kaplan-Meier法分析PTEN、Survivin的表达与无病生存期(DFS)的相关性。结果免疫组织化学显示PTEN和Survivin的阳性表达率分别为56.4%(44/78)、66.7%(52/78)，且两者表达呈负相关(rs＝-0.512，P<0.01)。PTEN和Survivin的表达与组织学分型、T分期、淋巴结转移及肿瘤退缩明显相关(χ2＝11.031/12.326、8.045/6.205、6.617/5.246、11.204/8.357，P<0.05)，而与患者年龄、性别无明显相关(χ2＝0.018/0.632、0.143/0.696，P>0.05)。nCRT后肿瘤退缩总有效率为53.8%(42/78)，其中PTEN(＋)/Survivin(-)组有效率明显高于其他组(χ2＝15.031，P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示，PTEN阳性者的中位DFS(32.0个月)显著高于阴性者(25.0个月)(χ2＝4.144，P<0.05)。Survivin阳性者的中位DFS(24.0个月)显著低于阴性者(32.0个月)(χ2＝4.126，P<0.05)。结论PTEN和Survivin在直肠癌组织中的表达呈负相关，两者的表达状态有助于预测nCRT后肿瘤退缩效果和判断预后。

简介：摘要目的探讨微RNA（miRNA）-181靶向磷酸酶张力蛋白基因（PTEN）调控磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶（PI3K/Akt）信号通路在高尿酸血症大鼠肾损伤中的作用。方法选择雄性Wistar大鼠40只，随机分为对照组10只、模型组10只、阴性对照组10只和miRNA-181抑制组10只，检测大鼠血清尿酸、肌酐、尿素氮；采用苏木精-伊红（HE）染色，光镜下观察各组大鼠肾脏组织病理形态学改变；实时荧光定量（qRT）-PCR检测各组大鼠肾组织miRNA-181和PTEN、PI3K、Akt mRNA表达水平；蛋白质印迹法检测各组大鼠肾组织PTEN、PI3K、Akt、磷酸化（p）-Akt蛋白表达水平；双荧光素酶报告基因实验验证miRNA-181与PTEN的靶向关系。多组间比较采用单因素方差分析，方差齐，进一步组间两两比较采用LSD-t检验；若方差不齐，进一步组间两两比较采用Tamhane′s T2检验；2组间比较采用独立样本t检验。结果与对照组尿酸（135±21）mmol/L、肌酐（27.8±2.1）μmol/L、尿素氮（6.8±0.5）μmol/L相比，模型组和阴性对照组大鼠尿酸[（213±28）mmol/L，（214±23）mmol/L；肌酐（49.2±2.3）μmol/L，（48.6±2.2）μmol/L；尿素氮（11.5±2.7）μmol/L，（11.7±2.5）μmol/L]含量显著升高（F尿酸=26.739，F肌酐=259.055，F尿素氮=12.921，均P<0.05）；与阴性对照组相比，miRNA-181抑制组大鼠尿酸（169±21）mmol/L、肌酐（33.7±1.8）μmol/L、尿素氮（9.1±1.7）μmol/L含量降低（LSD-t尿酸=4.356，LSD-t肌酐=15.773，LSD-t尿素氮=2.858，均P<0.05）。模型组和阴性对照组大鼠肾组织miRNA-181表达水平（1.88±0.16、1.84±0.18）显著高于对照组（0.53±0.08）（F=193.554，P<0.05），而PTEN蛋白（0.18±0.02、0.16±0.02）和mRNA表达水平（0.48±0.08、0.44±0.07）均低于对照组（1.27±0.06、1.27±0.16）（F蛋白表达水平=515.116，FmRNA表达水平=141.470，均P<0.05）；抑制miRNA-181后，大鼠肾组织肾组织miRNA-181表达水平（1.35±0.58）显著降低（LSD-t=10.341，P<0.05），PTEN蛋白（0.84±0.05）和mRNA表达水平（0.90±0.08）均升高（LSD-t蛋白表达水平=20.471，Tamhane′s T2 mRNA表达水平=13.881，均P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验分析结果显示，PTEN是miRNA-181的靶基因。与对照组（0.18±0.02、0.09±0.01、0.05±0.02、1.06±0.07、0.96±0.06）相比，模型组和阴性对照组大鼠肾组织PI3K（1.01±0.06、1.00±0.06）、Akt（0.90±0.05、0.95±0.04）、p-Akt蛋白表达水平（0.99±0.07、0.97±0.05）和PI3K（3.63±0.18、3.68±0.22）、Akt mRNA表达水平（2.38±0.05、2.34±0.12）均显著升高（FPI3K蛋白表达水平=169.979，FAkt蛋白表达水平=393.411，Fp-Akt蛋白表达水平=164.201，FPI3K mRNA表达水平=563.944，FAkt mRNA表达水平=141.470，均P<0.05）；抑制miRNA-181表达后，大鼠肾组织PI3K（0.69±0.06）、Akt（0.42±0.03）、p-Akt蛋白表达水平（0.50±0.05）和PI3K（2.40±0.09）、Akt mRNA表达水平（1.40±0.12）均降低（LSD-tPI3K蛋白表达水平=7.432，LSD-tAkt蛋白表达水平=18.291，LSD-tp-Akt蛋白表达水平=9.595，Tamhane′s T2PI3K mRNA表达水平=17.070，Tamhane′s T2Akt mRNA表达水平=17.357，均P<0.05）。结论抑制miRNA-181表达，可靶向PTEN抑制PI3K/Akt信号通路保护高尿酸血症大鼠肾损伤。