简介:摘要目的探讨肽/组氨酸转运蛋白溶质载体家族15成员4(SLC15A)在SLE患者的PBMCs中的表达及其临床意义。方法选取55例SLE患者,根据SLEDAI评分标准,分为活动期SLE组和稳定期SLE组,以13例健康志愿者作为健康对照组,采用蛋白质印迹法检测各组外周血PBMCs中SLC15A4的表达情况,并记录SLE患者的临床资料及实验室指标。3组间SLC15A4的表达量的比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA),SLC15A4表达水平与临床指标的相关性分析采用Pearson相关分析。结果活动期SLE组、稳定期SLE组、健康对照组中SLC15A4的表达水平分别为(0.96±0.19)、(0.88±0.14)、(0.78±0.24),活动期SLE组中SLC15A4的表达水平高于健康对照组(F=4.47,P=0.015);SLE患者PBMCs中SLC15A4表达水平与抗dsDNA抗体定量(r=0.29,P=0.031)、ESR(r=0.36,P=0.007)、SLEDAI评分(r=0.32,P=0.017)呈正相关,与尿蛋白定量(24 h)(r=0.45,P=0.127)和C3(r=0.20,P=0.133)无相关性。结论SLC15A4参与了SLE的发病,其在SLE患者PBMCs中的表达情况可作为临床评估SLE患者疾病活动程度的指标。
简介:摘要自新型冠状病毒肺炎疫情发生以来,科学家们似乎变得越来越分裂和政治化。但是,阿格尼斯·阿诺德·福斯特(Agnes Arnold-Forster)指出,与其说是一个充斥着愤怒情绪和不专业沟通的新文化时期,不如说这是一个不同寻常且史无前例的时期。
简介:摘要目的探讨阿托伐他汀和前列地尔脂微球载体(LipoPGE1)联合高压氧(HBO)治疗糖尿病下肢血管病变的临床效果及其机制。方法回顾性分析2016年10月至2019年10月龙口市人民医院血管外科收治的采取保守治疗的糖尿病下肢缺血性病变患者194例,根据治疗方法分为观察组(n=102)和对照组(n=92)。对照组患者在常规对症治疗的基础上予以阿托伐他汀和LipoPGE1治疗;观察组患者则在对照组治疗的基础上联合HBO治疗。2组患者治疗前后进行间歇性跛行评分和肢体疼痛评分。检测2组患者治疗前后皮温、经皮氧分压(TcPO2)和踝肱指数(ABI)。采用彩色多普勒超声诊断仪检测2组患者治疗前后腘动脉、胫前后动脉、足背动脉收缩期的最高流速(Vmax)、阻力指数(RI)。采用酶联免疫法检测血清炎性因子白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;采用荧光法检测C反应蛋白(CRP)水平。采用数字化无创血流动力学检测仪检测2组患者全血高、低、中切,血浆黏度及纤维蛋白原(Fib)水平。结果治疗3个疗程后,2组患者皮温、TcPO2、ABI显著高于治疗前,且观察组患者治疗后皮温、TcPO2、ABI显著高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);2组患者肢体疼痛评分和间歇性跛行评分显著低于治疗前,且观察组患者治疗后显著低于对照组(P<0.05),差异均有统计学意义;2组患者腘动脉、胫前后动脉及足背动脉Vmax显著高于治疗前,RI显著低于治疗前,且观察组患者治疗后Vmax显著高于对照组,RI显著低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);2组患者血清TNF-α、IL-6、CRP水平显著低于治疗前,且观察组患者治疗后TNF-α、IL-6、CRP水平显著低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);2组患者全血高、低、中切,血浆黏度及Fib水平均显著低于治疗前,且观察组患者治疗后上述指标显著低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论阿托伐他汀和LipoPGE1联合HBO治疗能显著改善糖尿病下肢血管病变患者的临床症状,恢复受损的神经血管功能,其主要通过降低患者的炎性因子和改善血液流变学水平实现。
简介:目的构建细胞外基质蛋白1基因(ECM1)的真核表达载体ECM1-pEGFP-N2,检测其在人乳腺癌细胞系MCF-7中表达。方法采用PCR方法,以ECMleDNA为模板,扩增出ECM1基因,用Bg1Ⅱ和KpnⅠ双酶切ECM1基因和pEGFP-N2载体,连接酶切目的片段,转化大肠杆菌DH5,筛选阳性克隆酶切、测序鉴定;利用脂质体介导的转染技术转染MCF-7细胞,荧光显微镜检测报告基因表达产物EGFP,免疫组化检测ECM1蛋白表达。结果利用PCR克隆出约1.6kb的ECM1基因;PCR鉴定、酶切鉴定及测序结果证实成功构建ECM1-pEGFP-N2真核表达载体;转染MCF-7细胞后,可在细胞内观察到报告基因产生的绿色荧光,用免疫组化方法可检测到ECM1蛋白。结论成功构建了ECM1-pEGFP-N2真核表达载体,并在MCF-7细胞中表达,为进一步研究ECM1的功能奠定了基础。
简介:摘要目的使用preS1-tp融合蛋白作为新型的载体,介导针对乙型肝炎病毒(HBV)核心蛋白羧基端核定位信号(NLS)区的小干扰RNA(siRNA)进入感染HBV的肝细胞,从而抑制HBV复制和共价闭合环状DNA的形成。方法以慢病毒感染系统为基础,建立表达人牛磺胆酸钠共转运蛋白多肽的HepG2.2.15细胞;针对HBV NLS区设计合成siRNA;表达纯化preS1-tp融合蛋白,检测其进入细胞和与DNA结合的能力;以preS1-tp融合蛋白为载体,介导NLS siRNA递送至HepG2.2.15-牛磺胆酸钠共转运蛋白多肽细胞中,观察其对HBV复制和共价闭合环状DNA水平的影响。多组间比较采用方差分析,计量资料用t检验分析组间差异。结果成功构建HepG2.2.15-牛磺胆酸钠共转运蛋白多肽细胞株并合成筛选出显著抑制HBV复制的HBV NLS siRNA。纯化并大量表达preS1-tp融合蛋白,以该融合蛋白为载体靶向输送HBV NLS siRNA,结果显示,融合蛋白可以有效靶向输送siRNA至HepG2.2.15-牛磺胆酸钠共转运蛋白多肽细胞,不仅可有效抑制细胞中HBV mRNA,HBsAg和HBeAg表达,还能显著降低HBV DNA和共价闭合环状DNA的水平。结论preS1-tp融合蛋白利用preS1与肝细胞HBV受体结合,tp与核酸结合的双功能特点,将针对HBV NLS的siRNA靶向至感染HBV的靶细胞,靶向阻断rcDNA转运入细胞核,使siRNA发挥抑制HBV复制和共价闭合环状DNA合成的作用,为HBV感染所致慢性乙型肝炎治疗提供新策略,为彻底清除体内HBV提供新的研究视角。
简介:目的:构建miR-15a-5p和miR-16-5p的荧光素酶报告载体,利用此载体分析并验证miR-15a-5p和miR-16-5p与CCND1基因3'-UTR区域的确切结合位点,探讨miR-15a-5p和miR-16-5p与CCND1基因的相互作用关系。方法:通过Pubmed和miRBase数据库分别寻找到CCND1基因3'-UTR区域碱基序列和miR-15a-5p、miR-16-5p的碱基序列。找出理论结合位点后,构建荧光素酶报告载体,并用荧光素酶报告基因方法验证miR-15a-5p和miR-16-5p与CCND1基因之间的作用关系。结果:通过基因测序表明,本实验成功构建了CCND1a/Ma和CCND1b/Mb荧光素酶报告基因表达载体。将上述载体应用于荧光素酶报告基因实验,结果发现CCND1b组的荧光素酶表达强度显著降低,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论:miR-15a-5p和miR-16-5p与CCND1基因的3'-UTR区域存在结合位点,其具体结合位置在CCND1b区。这在理论上意味着miR-15a-5p和miR-16-5p可以抑制CCND1基因的表达。
简介:摘要目的探讨血红素氧合酶1(HO-1)和骨形态发生蛋白-2(BMP-2)在酒精作用下对成骨细胞凋亡的影响。方法利用腺病毒载体分别构建HO-1、HO-1+BMP-2过表达成骨细胞株H-FOB1-19、HB-FOB1-19及空载载体对照组NC-FOB1-19,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测成骨细胞中BMP-2和HO-1的表达水平;蛋白质印迹法(Western blot)检测H-FOB1-19、HB-FOB1-19 HO-1、NC-FOB1-19中HO-1及表达水平。90 mmol/L酒精分别处理上述3组成骨细胞,流式细胞术(FCM)检测酒精处理后各组成骨细胞的凋亡率。两组比较采用t检验。结果qRT-PCR表明H-FOB1-19、HB-FOB1-19组HO-1表达量高于NC-FOB1-19组(3.872±0.286、3.940±0.653比1.010±0.139,t=10.220、6.206,P<0.05)];HB-FOB1-19组中BMP-2的表达量明显高于NC-FOB1-19组(3.573±0.744比1.183±0.025,t=4.678,P<0.05);Western blot表明HO-1在HB-FOB1-19、H-FOB1-19中的表达量为NC-FOB1-19中表达量的(2.03±0.24)、(1.75±0.16)倍,BMP-2在HB-FOB1-19、H-FOB1-19中的表达量为NC-FOB1-19中表达量的(1.92±0.21)、(1.18±0.09)倍;流式细胞术检测90 mmol/L乙醇处理NC-FOB1-19、H-FOB1-19、HB-FOB1-19组成骨细胞,NC-FOB1-19组凋亡率明显高于H-FOB1-19、HB-FOB1-19组[(23.12±0.14)%比(18.17±0.19)%、(13.59±1.30)%,t=7.073、12.670,P<0.05] ,HB-FOB1-19组的凋亡率低于H-FOB1-19组[(18.17±0.19)%比(13.585±1.295)%,t=6.640,P<0.05]。结论成骨细胞中过表达HO-1可降低酒精作用后成骨细胞凋亡率,同时上调HO-1和BMP-2表达上述作用效果更明显。