简介：

简介：摘要目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血中微小RNA(miR)-25表达水平与病灶内癌基因表达变化的相关性。方法选择海南省人民医院2018年3月至2020年12月期间NSCLC患者为NSCLC组，以同期健康志愿者作为对照组，测定外周血中miR-25的表达水平以及肺癌组织、癌旁组织中miR-25、抑癌基因、增殖侵袭基因的表达水平，应用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测肺癌细胞株和正常肺上皮细胞BEAS-2B中的miR-25表达水平。不同组间计量资料的分析采用独立样本t检验。相关分析采用Pearson检验。结果NSCLC组患者外周血中miR-25的表达水平高于对照组(1.88±0.24比1.03±0.14，t＝22.432，P<0.05)，肺癌病灶内miR-25的表达水平高于癌旁病灶(2.19±0.32比1.05±0.17，t＝21.797，P<0.05)且NSCLC组患者外周血中miR-25的表达水平与肺癌病灶内miR-25的表达水平呈正相关(r＝0.641、P<0.01)。miR-25在NSCLC细胞株中的表达量高于正常人肺上皮细胞(2.05±0.35比1.01±0.15，t＝15.237，P<0.05)；肺癌病灶内Krüppel样因子4(KLF4)、B细胞易位基因2(BTG2)、含F-框及WD重复域蛋白7(FBXW7)、Kazal基序逆向诱导半胱氨酸丰富蛋白(RECK)的mRNA表达量水平均低于癌旁病灶(分别0.44±0.08比1.04±0.17、0.64±0.07比1.01±0.15、0.59±0.08比0.98±0.13、0.48±0.06比1.02±0.14，t＝22.407、15.681、18.053、24.827，P<0.05)且与外周血中miR-25的表达水平呈负相关(r＝-0.574、-0.625、-0.512、-0.663，P<0.05)。肺癌病灶内细胞周期蛋白(Cyclin) D1、c-Myc、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9的mRNA表达量水平均高于癌旁病灶(分别2.33±0.32比0.97±0.14、1.93±0.24比1.04±0.18、2.08±0.28比0.99±0.11、2.27±0.31比1.02±0.15、2.55±0.38比1.03±0.17，t＝28.771、21.567、26.832、26.756、26.966，P<0.05)且与外周血中miR-25的表达水平呈正相关(r＝0.564、0.692、0.503、0.672、0.485，P<0.05)。结论NSCLC患者外周血中miR-25的高表达与抑癌基因表达下调、增殖侵袭基因表达上调密切相关，NSCLC细胞株中的miR-25的表达也高于正常肺上皮细胞。

简介：摘要目的探讨蛋白激酶B1(Akt1)基因介导内质网类似激酶(PERK)/真核细胞翻译启始子2α(eIF2α)信号通路参与肺癌细胞增殖及细胞凋亡的机制。方法选择人肺腺癌细胞系A549按实验转染方案随机分组，分为空白(Blank)组、沉默Akt1(si-Akt1)阴性对照(NC)组、si-Akt1组、过表达Akt1(OE-Akt1) NC组、OE-Akt1组、CCT020312(PERK选择性激动剂)组和OE-Akt1+CCT020312组。应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测各组细胞中相关基因的mRNA和蛋白表达水平；同时分别应用噻唑蓝(MTT)法和流式细胞术检测各组细胞增殖和凋亡水平。两组间比较为t检验，多组间比较采用单因素方差分析。结果Si-Akt1组的Akt1的mRNA(0.99±0.05比0.45±0.03，t＝16.04，P<0.05)和蛋白表达(0.32±0.03比0.12±0.01，t＝10.95，P<0.05)低于si-Akt1 NC组。si-Akt1组PERK/p-PERK、eIF2α/p-eIF2α、GRP78和CHOP的mRNA(PERK：0.97±0.04比1.77±0.07，t＝17.190，P<0.05；eIF2α：1.01±0.06比1.53±0.06，t＝10.610，P<0.05；GRP78：1.06±0.03比1.98±0.08，t＝18.650，P<0.05；CHOP：0.94±0.04比1.63±0.06，t＝16.570，P<0.05)和蛋白表达(p-PERK：1.15±0.05比2.23±0.11，t＝15.480，P<0.05；p-eIF2α：1.69±0.07比3.12±0.19，t＝12.230，P<0.05；GRP78：0.84±0.05比2.87±0.15，t＝22.650，P<0.05；CHOP：1.46±0.07比2.65±0.13，t＝14.400，P<0.05)明显高于si-Akt1 NC组；细胞增殖能力明显低于si-Akt1 NC组(48 h：0.48±0.03比0.31±0.02，t＝8.167，P<0.05；72 h：0.78±0.04比0.60±0.03，t＝6.235，P<0.05)，细胞凋亡率明显高于si-Akt1 NC组(8.58±1.34比23.4±2.4，t＝9.250，P<0.05)。同时，CCT020312组PERK/p-PERK、eIF2α/p-eIF2α、GRP78和CHOP的mRNA(PERK：1.00±0.04比1.87±0.08，t＝26.940，P<0.05；eIF2α：1.00±0.05比1.57±0.07，t＝11.640，P<0.05；GRP78：1.00±0.03比2.02±0.10，t＝41.640，P<0.05；CHOP：1.00±0.06比1.66±0.07，t＝20.210，P<0.05)和蛋白表达(p-PERK：1.12±0.05比2.30±0.11，t＝16.910，P<0.05；p-eIF2α：1.65±0.05比3.20±0.18，t＝13.260，P<0.05；GRP78：0.80±0.04比2.74±0.15，t＝21.640，P<0.05；CHOP：1.44±0.06比2.61±0.13，t＝14.150，P<0.05)明显高于Blank组；细胞增殖能力明显低于Blank组(48 h：0.46±0.03比0.29±0.02，t＝8.167，P<0.05；72 h：0.80±0.04比0.57±0.03，t＝7.967，P<0.05)，细胞凋亡率明显高于Blank组和相应NC组(8.71±1.44比23.43±2.36，t＝9.222，P<0.05)。然而，OE-Akt1组的Akt1的mRNA(0.99±0.05比1.88±0.09，t＝14.970，P<0.05)和蛋白表达(0.31±0.03比0.87±0.04，t＝19.400，P<0.05)明显高于OE-Akt1 NC组，PERK/p-PERK、eIF2α/p-eIF2α、GRP78和CHOP的mRNA(PERK：0.98±0.05比0.65±0.05，t＝8.656，P<0.05；eIF2α：1.03±0.05比0.47±0.04，t＝12.970，P<0.05；GRP78：1.2±0.04比0.32±0.03，t＝30.210，P<0.05；CHOP：0.99±0.03比0.55±0.04，t＝11.940，P<0.05)和蛋白表达(p-PERK：1.16±0.05比0.99±0.05，t＝4.164，P<0.05；p-eIF2α：1.69±0.07比1.23±0.07，t＝8.642，P<0.05；GRP78：0.86±0.04比0.34±0.02，t＝20.140，P<0.05；CHOP：1.48±0.06比0.71±0.04，t＝19.880，P<0.05)明显低于OE-Akt1 NC组，细胞增殖能力(48 h：0.45±0.03比0.60±0.02，t＝7.206，P<0.05；72 h：0.76±0.04比0.97±0.05，t＝5.681，P<0.05)明显高于OE-Akt1 NC组，细胞凋亡率(8.62±1.32比4.36±0.75，t＝4.860，P<0.05)明显低于OE-Akt1 NC组(均值P<0.05)。结论沉默Akt1表达可通过促进PERK/eIF2α信号通路的激活，进而抑制肺癌细胞增殖，促进其凋亡。

简介：摘要目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)X染色体失活特异转录本(XIST)对胰腺癌PANC1细胞增殖和迁移能力的影响，明确lncRNA XIST与miR-101/zeste基因增强子同源物2(EZH2)的靶向关系。方法收集2010年7月至2018年9月间浙江省嘉兴市第一医院行手术切除并经病理学确诊的90例胰腺癌及其对应的癌旁正常组织；选取PANC1细胞将其分为sh-XIST组、sh-control组、miR-control组和miR-101组。采用荧光定量PCR法检测胰腺癌组织和各组PANC1细胞lncRNA XIST、miR-101的表达，分析lncRNA XIST和miR-101的表达与肿瘤临床病理参数的关系。采用CCK-8法和Transwell小室检测各组PANC1细胞的增殖和迁移能力，蛋白质免疫印迹法检测各组PANC1细胞的EZH2表达水平。将各组PANC1细胞以3×106个/100 μl密度分别接种于Balb/c裸鼠，检测种植瘤体积。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析lncRNA XIST与miR-101及其下游靶基因EZH2的关系。结果与癌旁组织比，胰腺癌组织lncRNA XIST表达量显著上调(2.89±0.42比1.12±0.22，P<0.05)，miR-101水平显著下调(0.32±0.12比1.25±0.22)，差异均有统计学意义(P值均<0.05)。胰腺癌的分化程度越高、TNM分期越高、淋巴结转移的癌组织lncRNA XIST水平显著升高，miR-101水平显著降低。sh-XIST组PANC1细胞lncRNA XIST表达水平较sh-control组显著下调(0.34±0.18比1.21±0.27)，miR-101组PANC1细胞miR-101表达水平较miR-control组显著上调(2.94±0.31比1.54±0.29)，差异均有统计学意义(P值均<0.05)。培养72 h的sh-control组、sh-XIST组、miR-control组和miR-101组450 nm处吸光度值(A450值)分别为1.98±0.24、1.21±0.20、1.87±0.21、1.11±0.17，穿膜细胞数分别为(74.25±6.79)、(29.11±5.17)、(61.27±5.19)、(20.47±4.58)个细胞/200倍视野，sh-XIST组较sh-control组、miR-101组较miR-control组细胞增殖活力和迁移能力均显著下降，种植瘤生长明显缓慢，差异均有统计学意义(P值均<0.05)。结论lncRNA XIST可靶向结合miR-101/EZH2调节胰腺癌PANC1细胞的增殖和迁移能力，促进胰腺癌的发生和发展。