简介：目的检测CD90在化学诱导C57BL／6J小鼠肝癌过程中各时期的动态变化。方法实验组通过化学法诱导50只C57BL／6J雄性小鼠肝癌，对照组为50只正常C57BL／6J雄性小鼠。观察小鼠成瘤情况和生长状态。对每4周定期处死的小鼠组织标本进行病理学观察，应用RT-PCR和荧光实时定量PCR（FQ—RT-PCR）、Western印迹法技术检测100只小鼠肝组织及相应阶段正常肝组织CD90mRNA及其蛋白表达情况。结果在化学诱癌第16周时，小鼠肝脏表面开始出现结节样变化，直径约2mm，呈灰白色，多发性。病理改变主要是肝细胞排列轻度紊乱，细胞轻度异型增生。第20周时肝癌结节直径在5-25mm之间，镜下为中、高分化的肝癌细胞；RT-PCR检测结果显示，实验组在16周以前CD90蛋白不表达。FQ-RT-PCR、Westernblot检测结果显示，CD90mRNA在化学诱癌16周以前，实验组与对照组比较差异无统计学意义（p〉0．05），但在诱癌16周以后，CD90表达呈显著性增加，实验组与对照组比较，差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论肝癌干细胞标志物CD90在肝癌的发生、发展过程中，其蛋白表达随着诱癌时间的延长而逐渐增加，认为CD90对肝癌的发生、发展有一定的调控作用。

简介：目的探讨阿霉素联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）对肝癌细胞HepG2和SMMC-7721增殖及TRAIL受体表达的影响。方法采用MTT法分别检测阿霉素、TRAIL及低浓度阿霉素联合TRAIL处理HepG2和SMMC-7721细胞的生长抑制率;RT-PCR和Westernblotting分别检测阿霉素作用前后HepG2和SMMC-7721细胞TRAIL受体DR4、DR5的mRNA和蛋白表达水平。结果3种浓度阿霉素（0.86、8.6、86μmol/L）作用24h后,对HepG2和SMMC-7721细胞的生长抑制率分别为（8.84±0.44）%和（8.67±1.22）%、（24.12±1.11）%和（25.39±2.26）%、（64.55±4.05）%和（66.2±3.74）%,呈浓度依赖性,不同浓度组之间差异均有统计学意义（P〈0.05）。4种浓度TRAIL（10、100、500、1000ng/ml）作用24h后,对HepG2和SMMC-7721细胞的生长抑制率分别为（5.83±0.25）%和（5.66±0.56）%、（9.60±1.38）%和（8.96±1.13）%、（11.87±1.43）%和（12.11±1.84）%、（15.12±3.84）%和（16.16±1.41）%,其他3种浓度分别与10ng/mlTRAIL比较,差异均有统计学意义（P〈0.01）。低浓度阿霉素联合TRAIL作用于HepG2和SMMC-7721细胞,低浓度阿霉素能够增加HepG2和SMMC-7721细胞对TRAIL治疗的敏感性,并且随着时间的延长和TRAIL浓度的增加,细胞抑制率逐渐增加,呈时间-效应和剂量-效应关系;无论在mRNA还是蛋白水平,阿霉素处理后HepG2细胞死亡受体DR4、DR5的表达水平较未处理组显著增加;在SMMC-7721细胞,阿霉素处理后,DR5的表达水平显著增加,而DR4的表达水平与阿霉素未处理组相似。结论低浓度阿霉素能够增加肝癌细胞对TRAIL治疗的敏感性,其机制可能是阿霉素增加死亡受体特别是DR5的表达水平,从而诱导细胞凋亡增加,TRAIL在肝癌治疗方面存在潜在的临床应用价值。

简介：垂体瘤发生率占颅内肿瘤的第3位，因其细胞增殖及内分泌特性而表现出各种的生物学行为。随着分子生物学的发展，对垂体瘤发病机制的认识已有了很大的提高。垂体瘤的发生、生长与细胞信号转导通路存在密切的相关性，对信号转导通路特殊靶点的干预可能为垂体瘤提供新的治疗机会。本文重点综述了细胞信号转导通路与垂体瘤发病机制相关性研究方面的进展。

简介：目的构建耐5-FU的胃癌耐药细胞株,初步探讨细胞发生5-FU耐药的可能机制.方法通过药物耐药间歇冲击并浓度梯度递增法诱导建立胃癌耐药细胞株SGC-7901/5-FU.应用MTT法检测亲代细胞对4种化疗药物的IC50并计算耐药指数(RI).通过MTT法绘制细胞的生长曲线计算细胞倍增时间.流式细胞仪分析细胞周期分布.RT-PCR检测抑癌基因P53、癌基因Bcl-2、促凋亡基因半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(caspase-3)、死亡相关蛋白激酶(deathassociatedproteinkinase,DAPK)家族成员(DAPK-1、DAPK-2、DAPK-3)、多药耐药蛋白(multidrugresistanceproteins,MRP)亚家族中的MRP-6、多药耐药基因1(multidrugresistance1,MDR1)、切除交叉互补修复基因(excisionrepaircross-complementing1,ERCC-1)的表达.WesternBlot检测MDR1编码的P糖蛋白(P-gp)的表达水平.结果SGC-7901/5-FU对5-FU、顺铂、环磷酰胺的耐药指数分别为6.26、3.71、5.25.SGC-7901与SGC-7901/5-FU细胞倍增时间分别为(30.82±1.46)h和(46.01±4.15)h,SGC-7901/5-FU细胞增殖速率显著变缓(P＜0.05).与亲代细胞比较,耐药子株S期细胞显著减少,G0/G1期细胞则显著增高(P＜0.01),而G2/M期细胞无显著差异(P＞0.05).耐药子株SGC-7901/5-FU细胞MDR-1、MRP-6、DAPK-3和P-gp表达显著上调(P＜0.01),而ERCC-1、caspase-3、P53、DAPK-1、DAPK-2、Bcl-2的表达均无显著变化(P＞0.05).结论成功构建胃癌耐5-FU细胞株SGC-7901/5-FU,其对顺铂、环磷酰胺具有交叉耐药,耐药机制与细胞周期S期细胞比例减少、G0/G1期细胞比例升高有关,可能与MDR-1、MRP-6、DAPK-3基因及P-gp蛋白表达上调有关.

简介：目的利用组织芯片技术结合免疫组化方法探讨RASSFlA和Elf-1基因在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的蛋白表达及与临床病理学特征的关系。方法构建含有72例非小细胞肺癌及10例正常肺组织标本的组织芯片，以免疫组织化学PowerVisionTM-900（PV-9000）法检测RASSFlA和Eft-1在NSCLC与正常肺组织中的蛋白表达。结果RASSFIA和Elf-1在肺癌组织中均呈异质性表达。RASSFlA在NSCLC组织中的阳性率为47．22％（34／72），显著低于正常肺组织100％（10／10），两组间的蛋白表达差异具有统计学意义（P=0．002）；RASSF1A在有淋巴结转移组的表达强度显著低于无淋巴结转移组（x2=4．379，P=O．036）；RASSFlA的表达在不同的临床分期间差异有统计学意义（x2=17．979，P=0．000）。Elf-1在NSCLC及正常肺组织中的阳性表达率分别为73．61％（53/72）及20．00％（2／10），两组间的表达差异具有统计学意义（Jp：O．001），其表达强度与NSCLC的分化程度有关（x2=7．116，P=0．028）；有淋巴结转移组Elf-1的表达强度高于无淋巴结转移组（x。=5．304，P=0．021）；Elf-1的表达在不同的临床分期间亦有差异（x2=6．791，P=0．034）。NSCLC组织中RASSFlA和Elf-1蛋白的表达强度呈负相关（r=-0．433，P=0．000）。结论在NSCLC组织中RASSFlA表达下调和Elf-1过度表达可能与NSCLC的发生、发展及预后不良有关，RASSFlA及Elf-1基因表达的检测有望作为NSCLC早期诊断、评估其侵袭性及转移性的重要参考指标。

简介：目的探讨ERCC1、RRM1基因蛋门表达对Ⅰ～Ⅲa期非小细胞肺癌患者预后的影响。方法采用免疫组化法检测Ⅰ～Ⅲa期非小细胞肺癌患者ERCC1、RRM1蛋白表达情况；采用生存分析曲线分析其对生俘预后的影响。结果ERCCl、RRMl蛋白表达与患者性别、年龄、病珲类型和TNM分期等莘异均无统计学意义（P〉0．05）。在TNM分期中，Ⅰa期ERCCl、RRM1阳性表达组生存预后较好，提示两种基因蛋白的阳性表达在18期患者中是一种保护因素。存IhⅢa期患者中ERCC1表达阴性组可以从含铂化疗方案中获益，可获得生存优势；RRMI表达阴性组对化疗药物吉西他滨敏感，可获得较长的生存优势。在Ⅰ～Ⅲa期患者中ERCC1与RRM1的表达呈正相关，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论检测Ⅰ～Ⅲa期非小细胞肺癌ERCCI及RRM1蛋白表达可以预测患者的治疗疗效及预后，使患者从个体化治疗中获益。

简介：目的探讨MTA1对食管癌转移相关基因的影响。方法用RNA干扰的方法在食管癌细胞系KYSE150中沉默MTA1基因的表达，随后进行转移相关基因芯片分析。以两次芯片分析中均上调2倍以上（或下调1／2）为差异显著基因。通过DIVID生物信息学数据库进行geneontology的通路分析。结果在两次基因芯片分析中均有意义上调的基因共有7个，分别是LAMC1、MMP14、MMP15、MDM2、AP15、ODC1、PTGS2；而两次均显著下调的基因共有14个，它们是CSF1R、HGF、IGF2、ITGA6、MMP9、MMP11、MMP13、CASP8、CTSD、TMPRSS4、THBS2、TIMP1、ENPP2、SNCG。通过在DAVID生物信息学数据库中对上述表达差异显著的基因进行通路分析，结果提示差异基因主要富集在5条信号通路上，分别是肿瘤信号通路（MDM2、CASP8、CSF1R、HGF、ITGA6、LAMC1、MMP9、PTGS2）、ECM受体整合信号通路（LAMC1、THBS、ITGA6）、基质金属蛋白酶信号通路（TIMP1、MMP9）、小细胞肺癌信号通路（ITGA6、Cox2）和黏着斑信号通路（ITGA6、HGF、IGF2）。结论MTA1参与了转移相关的一系列分子改变事件，尚需进一步的分子生物学方法验证这些基因调控的信号途径。

简介：目的探讨组织间植入125I粒子与5-FU对H22肝癌细胞生长及病理变化。方法40只昆明小鼠皮下移植H22肝癌细胞建瘤模型，荷瘤小鼠随机分为4组，每组10只。A组为125I粒子联合5-Fu组；B组为125I粒子组；C组为5-Fu组；D组为空白对照组。连续观察28d小鼠存活情况，测量肿瘤体积大小，进行常规病理学及电镜检查。结果观察28d后，各治疗组和对照组小鼠的平均肿瘤体积分别为A组（1．38±0．11）cm3、B组（2．11±0．19）cm3、C组（2．79±0．23）cm3、D组（4．34±0．29）cm3，各组间肿瘤体积差异有统计学意义（P〈0．05）。A、B、C3个治疗组间荷瘤小鼠的体积抑瘤率分别为68．21％、51．38％和35．71％。镜下观察B、C两组分别可见散落的坏死癌细胞，周围组织有大量淋巴细胞浸润；A组以癌细胞坏死为特征；电镜下B、C两组的肝癌细胞核膜完整，核仁浓缩或碎裂，染色质密集，有多个细胞质突起，出现染色质溶解消失，凋亡小体形成，其间有较多凋亡的癌细胞，并有多个凋亡细胞聚集；而125I联合5-Fu组以坏死或不完全坏死的癌细胞为主，其间也有凋亡的癌细胞。结论肿瘤组织间植入125I粒子可促进H22肝癌细胞凋亡，125I粒子联合5-Fu组织间化疗可进一步促使肿瘤细胞变性、坏死和凋亡。两者联合应用具有协同、增效的作用，疗效确切，为治疗肝癌提供了新的诜择。

简介：目的探讨利妥昔单抗联合CHOP方案对弥漫型大B细胞淋巴瘤（diffuselargeB-celllymphoma，DLBCL）的疗效，观察影响化疗疗效的相关因素。方法本组选择我院2006年1月至2011年1月收入的DLBCL患者17例，患者给予利妥昔单抗联合CHOP方案治疗。观察化疗后疗效及淋巴结亚群改变情况，收集患者的性别、年龄、PS评分、AnnArbor分期、结外浸润情况、LDH水平、体力状态（PS）评分、B症状、血红蛋白及T细胞浸润等相关情况，观察其对化疗的相关影响。结果本组所有17例患者完成治疗，治疗后疗效评估显示CR7例，PR6例，SD3例，PD1例，治疗有效率为76．4％（13／17）。影响化疗疗效相关因素分析中显示，血清LDH水平、PS评分、AnnArbor分期为影响患者化疗疗效的相关因素，P〈0．05。结论利妥昔单抗联合CHOP对弥漫型大B细胞淋巴瘤疗效显著，其中Ps评分低、AnnArbor分期低、血清LDH水平正常的患者化疗疗效相对较好。

简介：目的利用逆病毒表达载体快速构建梯度过表达人MTA1稳转单克隆细胞系。方法利用噬菌斑原位杂交筛选人肺噬菌体文库，以阳性克隆为模板，RT-PCR获得人MTA1完整CDS序列。以逆病毒表达载体pMX为基础，经过多次酶切连接，构建逆病毒表达载体pMX—MTA1-flag—IRES—EGFP。将构建好的逆病毒载体系统，转染293-gag／pol细胞，包装出含该表达载体的逆病毒颗粒。以含病毒上清多次感染HCT116细胞，获得稳定转染MTA1的HCT116多克隆细胞系。将该多克隆细胞系按合适比例稀释后接种至10cm大皿，获得大量单克隆细胞系，以GFP为筛选标志，筛选不同荧光强度的单细胞克隆进行扩增并分析MTA1与GFP表达水平的线性关系。结果测序结果显示成功克隆出人MTA1表达序列。免疫荧光、WesternBlot结果证实成功构建出梯度过表达MTA1的稳转细胞系。相关性验证结果显示构建的非融合载体MTA1与GFP的表达呈明显的线性相关，相关系数r=0．932，P〈0．01。结论利用逆病毒表达系统，快速成功构建并筛选出MTA1与GFP非融合梯度过表达稳转单克隆细胞系，为MTA1基因功能研究提供了良好模型。该逆转录病毒平台可用于快速建立其他基因的稳转单克隆细胞系。

简介：目的探讨乙肝病毒／黄曲霉毒素B1双暴露相关肝细胞性肝癌（HCC）中PTEN基因的突变特点及其mRNA的表达水平。方法108例HCC来自广西不同地区样本，按照乙肝病毒与黄曲霉毒素的暴露情况，分为4个亚组：A组：HBV（＋）／AFB1-DNA（＋），共48例；B组：HBV（＋）／AFB1-DNA（-），共27例；C组：HBV（-）／AFB1-DNA（＋），共19例；D组：HBV（-）／AFB1-DNA（-），共14例。采用PCR联合基因直接测序法，检测108例肝癌组织中PTEN基因第4、5、8外显子的突变情况。同时采用RT—PCR法检测其基因mRNA的表达状况。结果（1）PTEN基因第4、5、8外显子测序结果未发现发生在外显子上的突变。但在第4外显子与第4内含子交界处有61例发生大片段的缺失，缺失率为56.4％。②PTEN缺失率在A、B、C、D组中分别为60．4％、62．9％、47．3％和46．6％，其差异在4个亚组间均无统计学意义（P〉0．05）。@PTENmRNA在4个亚组中的表达半定量灰度值分别为：A组：0．54±0．13；B组：0．59±0．16；C组：0．97±0．16；D组：0．92±0．13。其中，A、B组分别与C、D组相比，其差异均具有统计学意义（PAC=0．002，PAD=0．032，PBC=0．000，PBC=0．011）。结论在广西乙型肝炎病毒／黄曲霉毒素B1的双暴露肝细胞癌中，PTENmRNA的表达下调是一个常见的分子生物学事件，PTENmRNA表达下调可能主要与HBV感染有关。AFB1对PTENmRNA的表达下调可能有协同作用。

简介：目的考察部分外阴鳞状细胞癌妇女患者行前哨淋巴结活检代替腹股沟股淋巴结清扫的安全性。患者和方法选取鳞状细胞癌浸润深度至少1mm，且肿瘤≥2cm并≤6cm的女性患者。原发瘤应局限于外阴部，且无腹股沟淋巴结转移临床提示。所有患者接受术中淋巴结定位、前哨淋巴结活检和腹股沟股淋巴清扫。标记病理超分期的前哨淋巴结。

简介：目的探讨全反式维甲酸(all-transretinoicacid,ATRA)提高人结肠癌细胞亚株SW480/M5对奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)敏感性的可能机制.方法MTT法筛选ATRA和L-OHP实验浓度.流式细胞仪检测ATRA对肿瘤细胞周期影响.分别用ATRA、L-OHP、ATRA联合L-OHP作用SW480/M5细胞,MTT法检测药物对肿瘤细胞抑制率,流式细胞仪检测肿瘤细胞周期及凋亡率,原子光谱吸收仪检测肿瘤细胞DNA含铂(Pt)量.结果L-OHP抑制SW480/M5细胞增殖的GI50为58.0mg/L,主要阻滞肿瘤细胞在S和G2/M期.ATRA8.0μmol/L作用24小时后,G1期细胞减少,S期细胞增多；作用72小时后,S期和G2/M期细胞增加并明显抑制肿瘤细胞增殖.8.0μmol/LATRA作用至48小时后联合L-OHP,两药联合由相加作用转变为协同作用；联合用药后S期和G2/M期细胞明显增多,细胞DNA含Pt量显著增加,呈时效依赖性.相对于单独用药,联合用药并不上调肿瘤细胞凋亡率.结论ATRA通过改变SW480/M5细胞周期和提高细胞DNA含Pt量,明显增加肿瘤细胞对L-OHP敏感性.

简介：目的探讨CDl09、高分子量细胞角蛋白（HMW—CK）、波形蛋白（Vimentin）、p63和雄激素受体（AR）在基底细胞样乳腺癌（BLBC）中的表达及其与临床病理特征的关系。方法将ER、HER-2均阴性，CK5／6和／或EGFR阳性表达者定义为BLBC，采用免疫组化SP法检测CDl09、HMW—CK、Vimentin、p63和AR在86例BLBC、57例管腔细胞型（Luminal）乳腺癌和33例HER-2过表达型乳腺癌中的表达情况。结果CDl09在BLBC、Luminal型乳腺癌和HER-2过表达型乳腺癌组织中的阳性表达率分别为61．6％，8．8％和9．1％，HMW．CK分别为90．7％、26．3％和33．3％，AR分别为31．4％、71．9％和42．4％，组间差异均有统计学意义（P〈0．05）；Vimentin的阳性表达率分别为57．O％、42．1％和51．5％，p63分别为31．4％、29．8％和24．2％，组间差异均无统计学意义（P〉0．05）。在BLBC中CDl09、HMW—CK、Vimentin和p63的表达与临床病理特征无关（P〉0．05），而AR的表达与组织学分级有关（P〈0．05）。结论CDl09和HMW—CK是诊断BLBC的特异性标记物，而Vimentin和p63无诊断意义，AR表达缺失与BLBC的侵袭和恶性表型有关。

简介：目的探讨微粒体环氧化物水解酶编码基因EPHX1多态性与肝细胞性肝癌（HCC）遗传易感性的关系。方法按照制定的检索策略，枪索相关数据库中的文献，获取有关EPHX1基因多态性与HCC易感性的病例一对照研究，提取相关数据进行Meta分析。以病例组和对照组基因型分布的比值比（OR）为效应指标，对纳入文献进行异质性检验，应用Statal2．0软件以不同合并模型对各研究原始数据进行Meta合并，计算合并效应量OR值及其95％可信f）（间（CI）。结果共纳入9篇文献，EPHX1337T〉C多态位点的共8个研究，累计病例584例，对照989例。等位基因比较模型（CYST）的OR值为1．47（95％CI=1．26～1．72，P〈0．001）；纯合子比较模型（CCvsTT）的OR值为1．88（95％CI=1．40～2．52，P〈0．001）；隐性模型（CCVvsCT/TT）的OR值为1．73（95％CI=1．36～2．21，P〈0．001）。EPHX1416A〉G多态位点共6项研究，累计病例432例，对照699例。等位基因比较模型（GVSA）的OR值为0．75（95％CI：0．59～0．95，P=0．018）。结论EPHX1337T〉C多态位点CC基因型与HCC易感性升高有关；416A〉G多态位点等位基凶G可能降低HCC易感性，为保护基因型。