简介:摘要目的观察微小RNA(miRNA,miR)-22-3p靶向α-烯醇化酶(ENO1)对对神经胶质瘤细胞迁移和黏附的影响。方法选取2015年6月到2018年6月安阳市人民医院手术治疗的91例患者的神经胶质瘤组织和癌旁组织作为研究对象。采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析神经胶质瘤组织和癌旁组织中miR-22-3p表达水平。采用脂质体转染miR-22-3p模拟物和对照质粒于神经胶质瘤U251细胞,分别命名为miR-22-3p组和miRNA对照组。采用荧光定量PCR检测miR-22-3p组和miRNA对照组细胞中miR-22-3p表达水平。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)测定两组细胞增殖能力;采用基质胶黏附实验测定两组细胞黏附能力变化;采用Transwell检测两组细胞迁移能力。生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-22-3p的靶基因。采用蛋白质印迹法(Western blot)分析miR-22-3p靶基因蛋白质表达水平。组间数据比较采用t检验。结果与癌旁组织miR-22-3p表达水平(1.25±0.20)比较,神经胶质瘤组织中mRNA-22-3p表达水平(0.47±0.16)显著下降,差异有统计学意义(t=2.999,P<0.05)。转染48 h后,miR-22-3p组细胞miR-22-3p表达水平(2.47±0.17)较miRNA对照组(1.23±0.21)显著下降,差异有统计学意义(t=2.419,P<0.05)。miR-22-3p组细胞增殖能力(1.27±0.29)比miRNA对照组(2.07±0.23)显著下降,差异有统计学意义(t=1.940,P<0.05)。miR-22-3p组细胞黏附率[(0.19±0.09)%]比miRNA对照组细胞黏附率[(0.84±0.13)%]显著下降,差异有统计学意义(t=1.599,P<0.05)。miR-22-3p组细胞迁移数量[(174.08±10.98)个]比miRNA对照组细胞迁移数量[(69.48±7.01)个]显著增加,差异有统计学意义(t=2.011,P<0.05)。ENO1是miR-22-3p的靶基因。miR-22-3p组细胞ENO1蛋白表达水平(0.32±0.11)比miRNA对照组细胞(0.96±0.17)明显下降,差异有统计学意义(t=3.001,P<0.05)。结论miR-22-3p在脑胶质瘤发生发展过程中发挥重要作用,通过靶向ENO1蛋白调控着胶质瘤细胞增殖、黏附和迁移。
简介:摘要目的观察微小RNA(miRNA,miR)-193a-5p靶向调控Ras相关结构域家族蛋白2(RASSF2)表达抑制炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与白细胞介素(IL)-1β水平及其对心力衰竭模型大鼠心脏功能的影响。方法取60只12~16周龄的清洁级Wistar大鼠(30只雄鼠,30只雌鼠)。2.5%戊巴比妥钠(35mg/kg)麻醉大鼠,暴露大鼠心脏后,随机选择15只大鼠进行缝合(对照组),15只注射磷酸盐缓冲液(PBS)为PBS组,15只注射空白AAV质粒载体为AAV组,15只注射AAV-miR-193a-5p为miR-193a-5p组。PBS组、AAV组和miR-193a-5p组的大鼠冠状动脉左前降支行冠状动脉结扎构建心力衰竭模型。术后4周,彩色多普勒超声心动图检测舒张期和收缩期左心室后壁厚度(LVPWT)、室间隔厚度(IVST)、左心室舒张末期内径(LVEDd)、左心室收缩末期内径(LVESd)和左心室射血分数(LVEF)。应用双荧光素酶报告基因实验探索miR-193a-5p是否与RASSF2的3’非翻译区相互作用。结果术后4周,与对照组比较(4.79±0.33),PBS组(1.57±0.16)和AAV组(1.66±0.18) miR-193a-5p表达降低,而miR-193a-5p组(9.02±0.76) miR-193a-5p表达增高(P<0.05)。与对照组[IVST:(1.88±0.15) mm;LVPWT:(1.93±0.22) mm;LVEDd:(5.44±0.79) mm;LVEF:(52.72±4.98)%]和miR-193a-5p组[IVST:(1.97±0.16) mm;LVPWT:(2.09±0.21) mm;LVEDd:(5.98±0.81) mm;LVEF:(48.83±4.17)%]比较,PBS组[IVST:(2.69±0.28) mm;LVPWT:(2.74±0.36) mm;LVEDd:(6.87±0.84) mm;LVEF:(37.45±3.55)%]和AAV组[IVST:(2.63±0.25) mm;LVPWT:(2.68±0.34) mm;LVEDd:(6.93±0.90) mm;LVEF:(36.10±3.42)%]左心室IVST、LVPWT和LVEDd显著增高,LVEF显著降低(P<0.05),对照组与miR-193a-5p组间差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组[TNF-α:(2.01±0.18) μg/L;IL-1β:(8.76±1.48) ng/L;RASSF2:(1.23±0.21)]和miR-193a-5p组[TNF-α:(2.23±0.21) μg/L;IL-1β:(8.90±1.54) ng/L;RASSF2:(1.30±0.25)]比较,PBS组[TNF-α:(5.67±0.52) μg/L;IL-1β:(11.34±2.55) ng/L;RASSF2:(7.44±0.89)]和AAV组[TNF-α:(5.88±0.58) μg/L;IL-1β:(10.99±2.49) ng/L;RASSF2:(7.89±0.97)]血清TNF-α、IL-1β和RASSF2显著增高(P<0.05),而对照组与miR-193a-5p组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论通过上调心力衰竭模型大鼠miR-193a-5p表达可抑制RASSF2蛋白表达,并显著抑制炎性因子TNF-α与IL-1β水平,进而提高心力衰竭模型大鼠心脏功能。
简介:摘要目的探讨血浆微小核糖核酸-101-3p(miR-101-3p)及微小核糖核酸-141-3p(miR-141-3p)在脓毒症患儿中的表达及其临床意义。方法选择2016年1月至2019年10月三亚市人民医院收治的153例脓毒症患儿,根据其病情严重程度分为脓毒症非休克组(94例)和脓毒症休克组(59例);根据脓毒症患儿28 d的生存情况,将其分为存活组(107例)和死亡组(46例),另选取60例健康儿童作为健康对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测所有研究对象血浆miR-101-3p及miR-141-3p表达水平。应用受试者工作特征曲线(ROC)分析血浆miR-101-3p、miR-141-3p及降钙素原(PCT)水平对脓毒症诊断及预后评估的价值。采用Pearson相关分析脓毒症患儿血浆miR-101-3p及miR-141-3p表达水平与PCT、急性生理和慢性健康Ⅱ(APACHE Ⅱ)评分、序贯器官衰竭评分(SOFA评分)、白细胞计数及C反应蛋白水平的相关性。结果脓毒症休克组和脓毒症非休克组血浆miR-101-3p、miR-141-3p及PCT水平均高于健康对照组,差异均有统计学意义(均P<0.001),且脓毒症休克组血浆miR-101-3p(4.25±1.46比1.86±0.75)、miR-141-3p(3.17±1.08比1.20±0.52)及PCT[(20.75±9.36) μg/L比(5.80±2.40) μg/L]水平均明显高于脓毒症非休克组,差异均有统计学意义(均P<0.001)。死亡组和存活组血浆miR-101-3p、miR-141-3p及PCT水平均明显高于健康对照组,差异均有统计学意义(均P<0.001),且死亡组血浆miR-101-3p(4.83±1.62比1.40±0.58)、miR-141-3p(3.50±1.13比0.96±0.47)及PCT[(26.30±11.72) μg/L比(3.25±2.16) μg/L]水平均明显高于存活组,差异均有统计学意义(均P<0.001)。ROC曲线分析显示,miR-101-3p、miR-141-3p及PCT联合诊断脓毒症的曲线下面积(AUC)和95%可信区间(95%CI)明显高于miR-101-3p、miR-141-3p或PCT单独指标[0.908(0.850~0.970)比0.810(0.748~0.873)、0.784(0.723~0.844)、0.825(0.764~0.883),Z1=4.682、Z2=5.380、Z3=4.417,均P<0.05],其敏感度为92.5%,特异度为84.0%。miR-101-3p、miR-141-3p及PCT联合预测脓毒症患儿死亡的AUC和95%CI明显高于miR-101-3p、miR-141-3p或PCT单独指标[0.930(0.872~0.986)比0.848(0.786~0.907)、0.792(0.730~0.853)、0.820(0.762~0.878),Z1=4.537、Z2=5.728、Z3=5.106,均P<0.05],其敏感度为94.6%,特异度为87.0%。相关性分析显示,脓毒症患儿血浆miR-101-3p及miR-141-3p表达水平与PCT(r=0.804、0.773,均P<0.001)、APACHE Ⅱ评分(r=0.738、0.695,均P<0.001)及SOFA评分(r=0.752、0.764,均P<0.001)均呈正相关。结论脓毒症患儿血浆miR-101-3p及miR-141-3p表达水平明显升高,与脓毒症患儿的严重程度相关,miR-101-3p及miR-141-3p联合PCT对儿童脓毒症诊断及预后评估具有较高价值。
简介:摘要目的探讨微小RNA(miRNA,miR)-4699-3p在卵巢癌细胞株中的表达,观察其靶向调控线粒体核糖体蛋白S23(MRPS23)表达的能力及对卵巢癌细胞迁移和增殖的影响。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-4699-3p在卵巢癌细胞株(OVCAR-3、SKOV-3、HO-8910、OC3、A2780)和正常卵巢上皮细胞(IOSE80)中的表达。采用脂质体转染法分别将miR-4699-3p模拟物或阴性对照miR-NC转染至miR-4699-3p表达最低的细胞株,定义为实验组和对照组。qRT-PCR验证转染效率。生物信息学技术预测miR-4699-3p的候选靶基因,双荧光素酶报告基因实验鉴定其对靶基因的调控能力。qRT-PCR和Western blot检测MRPS23在mRNA和蛋白水平的表达变化。细胞计数法(CCK-8)和Transwell迁移实验分别检测miR-4699-3p对卵巢癌细胞增殖和迁移能力的影响。结果miR-4699-3p在卵巢癌细胞株中的表达明显低于正常卵巢上皮细胞(P<0.05),在OVCAR-3细胞中的表达最低(P<0.01)。转染miR-4699-3p后,实验组OVCAR-3细胞中miR-4699-3p表达量显著升高(P<0.01),证明转染成功。生物信息学软件预测,miR-4699-3p的候选靶基因可能是线粒体核糖体蛋白S23(MRPS23),双荧光素酶报告基因实验证实miR-4699-3p可直接靶定MRPS23基因mRNA的3′-非翻译区(UTR)(P<0.01)。与对照组OVCAR-3细胞相比,实验组过表达miR-4699-3p后,MRPS23基因在mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.01),细胞转移和细胞周期调控蛋白Twist、Slug、CDK6、Cyclin D3表达均降低(P<0.05),OVCAR-3细胞的增殖能力降低(P<0.05),OVCAR-3细胞迁移能力降低(P<0.01)。结论miR-4699-3p在卵巢癌细胞株中低表达,上调OVCAR-3细胞中的miR-4699-3p表达可通过干扰MRPS23基因表达,抑制卵巢癌细胞增殖和迁移能力。
简介:摘要目的探讨微小RNA(miRNA,miR)-4699-3p在卵巢癌细胞株中的表达,观察其靶向调控线粒体核糖体蛋白S23(MRPS23)表达的能力及对卵巢癌细胞迁移和增殖的影响。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-4699-3p在卵巢癌细胞株(OVCAR-3、SKOV-3、HO-8910、OC3、A2780)和正常卵巢上皮细胞(IOSE80)中的表达。采用脂质体转染法分别将miR-4699-3p模拟物或阴性对照miR-NC转染至miR-4699-3p表达最低的细胞株,定义为实验组和对照组。qRT-PCR验证转染效率。生物信息学技术预测miR-4699-3p的候选靶基因,双荧光素酶报告基因实验鉴定其对靶基因的调控能力。qRT-PCR和Western blot检测MRPS23在mRNA和蛋白水平的表达变化。细胞计数法(CCK-8)和Transwell迁移实验分别检测miR-4699-3p对卵巢癌细胞增殖和迁移能力的影响。结果miR-4699-3p在卵巢癌细胞株中的表达明显低于正常卵巢上皮细胞(P<0.05),在OVCAR-3细胞中的表达最低(P<0.01)。转染miR-4699-3p后,实验组OVCAR-3细胞中miR-4699-3p表达量显著升高(P<0.01),证明转染成功。生物信息学软件预测,miR-4699-3p的候选靶基因可能是线粒体核糖体蛋白S23(MRPS23),双荧光素酶报告基因实验证实miR-4699-3p可直接靶定MRPS23基因mRNA的3′-非翻译区(UTR)(P<0.01)。与对照组OVCAR-3细胞相比,实验组过表达miR-4699-3p后,MRPS23基因在mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.01),细胞转移和细胞周期调控蛋白Twist、Slug、CDK6、Cyclin D3表达均降低(P<0.05),OVCAR-3细胞的增殖能力降低(P<0.05),OVCAR-3细胞迁移能力降低(P<0.01)。结论miR-4699-3p在卵巢癌细胞株中低表达,上调OVCAR-3细胞中的miR-4699-3p表达可通过干扰MRPS23基因表达,抑制卵巢癌细胞增殖和迁移能力。
简介:摘要目的探讨微小RNA-519d-3p(miR-519d-3p)在结直肠癌(CRC)中的表达及对增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法体外培养人结直肠癌细胞系和人正常结肠上皮细胞。将miR-519d-3p模拟物(mimic)分别转染于RKO及SW620,同时设置mimic阴性对照(mimic NC)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-519d-3p表达及DCAF4L2 mRNA表达水平。细胞计数试剂盒(CCK-8)和平板克隆实验检测细胞增殖活性。划痕愈合实验、Transwell迁移和侵袭实验检测细胞迁移及侵袭能力。蛋白质印迹法(Western blot)检测DCAF4L2蛋白表达水平。符合正态分布的计量资料以均数±标准差(±s)表示,采用两样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果miR-519d-3p在人结直肠癌细胞系中显著下降,其中RKO和SW620表达倍数明显低于NCM460[RKO:(0.311±0.165)倍比1.000倍,t=7.783,P<0.05;SW620:(0.354±0.079)倍比1.000倍,t=15.72,P<0.01],差异有统计学意义。成功转染mimic过表达miR-519d-3p,过表达组表达倍数高于对照组 [RKO:(2.913±0.602)倍比1.000倍,t=5.409,P<0.01;SW620:(3.194±0.427)倍比1.000倍,t=8.765,P<0.001],差异有统计学意义。通过生物学功能实验证实miR-519d-3p表达升高能显著抑制CRC细胞的增殖、迁移和侵袭能力。CCK-8检测结果示,过表达组24、48、72、96 h细胞吸光度值低于对照组(RKO:0.248±0.018比0.184±0.012、0.388±0.007比0.277±0.010、0.658±0.033比0.496±0.008、0.877±0.020比0.681±0.021,t=3.064,P<0.01;SW620:0.213±0.018比0.181±0.050、0.375±0.008比0.274±0.014、0.720±0.009比0.482±0.006、0.978±0.115比0.721±0.032,t=2.432,P<0.01),差异有统计学意义。过表达组平板克隆集落形成个数显著低于对照组[RKO:(262.300±11.320)个比(181.700±2.333)个,t=7.127,P<0.05;SW620:(448.000±33.260)个比(190.300±7.446)个,t=9.387,P<0.05],差异有统计学意义。过表达组划痕愈合率低于对照组[RKO:(39.040±0.812)%比(8.979±0.846)%,t=394.900,P<0.01;SW620:(28.840±0.848)%比(5.576±1.435)%,t=21.350,P<0.01],差异有统计学意义。Transwell迁移和侵袭实验中过表达组穿透微孔膜的细胞个数明显低于对照组,迁移实验[RKO:(196.700±6.360)个比(93.330±4.096)个,t=44.290,P<0.01;SW620:(198.300±4.485)个比(101.300±1.764)个,t=16.090,P<0.01],差异有统计学意义;侵袭实验[RKO:(274.700±3.844)个比(85.670±2.728)个,t=33.950,P<0.01;SW620:(263.300±6.566)个比(70.330±4.256)个,t=50.980,P<0.01],差异有统计学意义。在线预测软件(miRWalk、StarBase 2.0和TCGA)预测,并通过qRT-PCR及Western blot验证结果显示,DCAF4L2作为miR-519d-3p靶基因调控CRC,过表达组DCAF4L2的mRNA表达及蛋白表达倍数明显低于对照组,mRNA表达倍数[RKO:(0.170±0.050)倍比1.000倍,t=18.400,P<0.01; SW620:(0.256±0.069)倍比1.000倍,t=26.800,P<0.01],差异有统计学意义;蛋白倍数[RKO:(45.504±6.076)%比100.000%,t=15.540,P<0.01;SW620:(43.567±3.760)%比100.000%,t=26.000,P<0.01],差异有统计学意义。结论结直肠癌细胞中miR-519d-3p表达显著下降,并通过调控DCAF4L2表达抑制结直肠癌增殖、迁移及侵袭能力。
简介:摘要目的观察微小RNA(miR)-142-3p靶向CD133对肝癌细胞增殖、侵袭和干细胞特性的影响。方法选取郑州大学第二附属医院2017年6月至2019年12月手术切除的肝癌组织和对应的癌旁组织作为研究对象。采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析癌旁组织和肿瘤组织miR-142-3p表达水平。采用慢病毒在MHCC97H肝癌细胞建立miR-142-3p过表达和对照细胞系(miR-142-3p组和对照组),采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和EdU染色分析两组细胞增殖;采用Transwell分析两组细胞侵袭;采用软琼脂克隆形成实验分析两组细胞干细胞特性;生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-142-3p靶基因;采用蛋白质印迹法(Western blot)分析两组增殖、侵袭和干细胞标志物细胞核增殖抗原(Ki-67)、基质金属蛋白酶(MMP)-9、CD133和Nanog蛋白表达水平,组间比较采用t检验。结果miR-142-3p组细胞miR-142-3p表达水平(0.41±0.12)显著低于癌旁组织miR-142-3p表达水平(1.06±0.25),差异有统计学意义(t=3.081,P<0.05)。miR-142-3p组细胞吸光度(A)值(1.63±0.20)低于对照组细胞A值(2.13±0.22),差异有统计学意义(t=2.918,P<0.05)。miR-142-3p组细胞EdU染色阳性率[(30.48±5.12)%]低于对照组细胞EdU染色阳性率[(87.89±7.28)%],差异有统计学意义(t=3.409,P<0.05)。miR-142-3p组细胞Ki-67蛋白表达水平(0.50±0.13)低于对照组细胞Ki-67表达水平(1.15±0.14),差异有统计学意义(t=2.319,P<0.05)。miR-142-3p组细胞侵袭数量[(67.59±6.01)个]低于对照组细胞侵袭数量[(121.35±6.12)个],差异有统计学意义(t=3.409,P<0.05)。miR-142-3p组细胞MMP-9蛋白表达水平(0.48±0.18)低于对照组细胞MMP-9蛋白表达水平(1.57±0.15),差异有统计学意义(t=2.917,P<0.05)。miR-142-3p组细胞克隆形成率[(31.44±4.51)%]低于对照组细胞克隆形成率[(57.68±7.19)%],差异有统计学意义(t=5.103,P<0.05)。miR-142-3p组细胞Nanog蛋白表达水平(0.51±0.14)低于对照组细胞Nanog蛋白表达水平(1.36±0.17),差异有统计学意义(t=2.514,P<0.05)。生物信息学和双荧光素酶报告基因显示CD133是miR-142-3p的靶基因。miR-142-3p组细胞CD133蛋白表达水平(0.43±0.11)低于对照组细胞CD133蛋白表达水平(1.15±0.13),差异有统计学意义(t=2.514,P<0.05)。结论miR-142-3p通过靶向调控CD133表达水平调节着肝癌细胞增殖、迁移和干细胞特性。
简介:摘要目的探讨ST8SIA6-AS1靶向结合微小RNA(microRNA,miR)-142-3p,影响肝细胞癌的增殖和侵袭能力。方法用基因表达谱数据动态分析(GEPIA)验证ST8SIA6-AS1在肝细胞肝癌(HCC)和邻近正常组织中的差异表达。采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测ST8SIA6-AS1和miR-142-3p在组织水平和细胞水平的表达量。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和集落形成实验检测人肝癌细胞Hep3B的增殖情况;采用迁移侵袭实验(Transwell法)检测肝癌Hep3B细胞迁移和侵袭情况。生物信息学、双荧光素酶报告实验验证ST8SIA6-AS1与miR-142-3P的靶向关系。组间采用t检验,多组间采用单因素方差分析进行比较,相关性分析采用Spearman秩检验。结果GEPIA结果显示ST8SIA6-AS1在肝癌组织中的表达明显高于正常组织。RT-qPCR结果显示ST8SIA6-AS1在HCC中的表达明显高于癌旁组织(0.778±0.363比1.951±0.575,t=11.370,P<0.05),差异有统计学意义。miR-142-3p在肝癌组织的表达量显著低于癌旁组织(0.881±0.374比0.371±0.164,t=9.395,P<0.05),差异有统计学意义。ST8SIA6-AS1在4种人HCC细胞株(HepG2、SMMC-7721、HCCLM3和Hep3B)的表达(3.84±0.27、5.81±0.60、4.47±0.55、5.94±0.69)明显高于正常肝细胞株L02(1.00±0.09,t=17.280,t=13.730,t=10.780,t=12.300,P<0.05),差异有统计学意义,ST8SIA6-AS1在敲低ST8SIA6-AS1的Hep3B细胞中的相对表达量低于对照组(0.26±0.04比1.00±0.01,t=9.423,P<0.05),差异有统计学意义。集落形成实验结果显示,敲低ST8SIA6-AS1的Hep3B细胞集落个数显著低于对照组[(32.60±6.70)个比(100.00±10.00)个,t=10.040,P<0.05],差异有统计学意义;CCK-8实验中敲低ST8SIA6-AS1的Hep3B细胞72 h吸光度(A)值低于对照组[(0.71±0.06)%比(1.14±0.09)%,t=6.886,P<0.05],差异有统计学意义。Transwell实验结果显示敲低ST8SIA6-AS1的Hep3B细胞垂直迁移率明显低于对照组[(53.38±6.49)%比(100.00±13.00)%,t=5.641,P<0.05],差异有统计学意义。敲低ST8SIA6-AS1的Hep3B细胞的侵袭率低于对照组[(44.98±8.42)%比(100.00±10.00)%,t=7.485,P<0.05],差异有统计学意义。双荧光素酶报告实验证实miR-142-3p过表达组明显低于对照组ST8SIA6-AS1-野生型(WT)细胞的荧光活性,ST8SIA6-AS1负向调控miR-142-3p的表达(0.42±0.05比1.00±0.09,t=9.757,P<0.05)。干扰ST8SIA6-AS1的表达可对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭产生抑制作用,这种作用可通过沉默miR-142-3p发生逆转。结论ST8SIA6-AS1可通过竞争性结合miR-142-3p在肝癌中发挥致癌作用。
简介:摘要目的探讨微小RNA(miR)-454-3p在结直肠癌细胞增殖和侵袭中的作用及其可能分子学机制。方法选取2019年6月1日至2019年8月31日于郑州大学第一附属医院原发性结直肠癌的患者19例肿瘤组织及其对应的癌旁组织标本。应用应用荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)技术检测样本中miR-454-3p的表达水平。通过细胞计数试剂盒(CCK-8)和Transwell实验评估结直肠癌细胞系CW-2、SW620细胞增殖和迁移侵袭能力。双荧光素酶报告基因验证miR-454-3p对下游靶基因BUB1蛋白的调控作用。组间采用配对样本t检验。结果与邻近正常组织比较,肿瘤组织中miR-454-3p表达上调(P<0.01),通过CCK-8测定miR-454-3p-inhibitor细胞的增殖,发现其显著低于miR-454-3p-NC组细胞(P<0.05)。transwell实验表明,与对照细胞比较,转染miR-454-3p-inhibitor的CW-2、SW620细胞迁移更慢,侵袭性更小。双荧光素酶报告分析。结果显示,miR-454-3p模拟和BUB1-wt共转染组的荧光素酶活性相对低于BUB1-wt和NC共转染组,而BUB1-mut组没有观察到显著变化(P<0.01)。此外,RIP分析表明,与RIPIgG比较,转染miR-454-3p模拟物导致RIP-BUB1中BUB1的显著上调(P<0.01)。qRT-PCR实验表明结直肠组织中BUB1和miR-454-3p表达呈正相关(P<0.01)。结论miR-454-3p可通过靶向抑制BUB1基因的表达促进结直肠癌细胞的增殖和侵袭。
简介:摘要目的观察微小RNA(miRNA,miR)-22-3p与真核翻译起始因子4E(eIF4E)的靶向关系,分析其对增殖的调控作用。方法选择人正常成骨细胞株NHOst、骨肉瘤细胞株U20S(购自中国科学院上海细胞生物学研究所),应用实时荧光定量PCR(qPCR)检测细胞株中miR-22-3p的表达,采用双荧光素酶基因报告实验检测miR-22-3p与eIF4E结合情况。建立空白对照组、空载体转染组、miR-22-3p转染组、miR-22-3p和eIF4E共转染组,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞的活性,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞周期素D1(Cyclin D1)的表达。采用定量聚合酶链反应(qPCR)法检测miR-22-3p在23例骨肉瘤组织中的表达,采用免疫组织化学方法检测骨肉瘤组织中eIF4E、细胞核增殖抗原(Ki-67)的表达。组间定量资料的比较采用t检验、方差分析(SNK法进行两两比较),对数据行Spearman相关分析及K-M生存分析。结果骨肉瘤细胞株中miR-22-3p的表达明显低于正常成骨细胞株;双荧光素酶基因报告实验发现miR-22-3p能引起转染pGL3-eIF4E-WT的细胞中荧光素酶活性降低。与空白对照组及空载体转染组比较,miR-22-3p转染组细胞活性明显下降,PCNA和Cyclin D1的表达显著下降,miR-22-3p和eIF4E共转染组均能逆转上述表达水平。骨肉瘤组织中miR-22-3p表达范围是0.6~3.6,平均1.9±0.2,miR-22-3p与eIF4E、miR-22-3p与Ki-67均呈负相关(r=-0.510、-0.530,P<0.05),eIF4E与Ki-67呈正相关(r=0.500, P<0.05)。miR-22-3p在不同肿物最大径、病变分级的分组中差异有统计学意义(P<0.05),miR-22-3p与生存时间明显相关。结论miR-22-3p在骨肉瘤中低表达,靶向负调控eIF4E的表达,调节细胞的增殖。miR-22-3p可能是肿瘤进展及预后不良的危险因素。
简介:摘要目的探讨长链非编码RNA核仁小RNA宿主基因8(lncRNA SNHG8)对肾癌细胞增殖、侵袭、迁移和顺铂敏感性的影响及其分子机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测SNHG8和微小RNA(miR)-224-3p表达水平;蛋白质印迹(Western blot)法检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、细胞增殖核抗原Ki-67(Ki-67)、裂解半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)和多药耐药基因1(MDR1)蛋白表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞存活率和顺铂半数抑制浓度(IC50);Transwell检测细胞迁移和侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡;荧光素酶报告实验检测SNHG8和miR-224-3p的靶向关系。两组比较采用t检验。结果肾癌细胞系ACHN、786-O和A498中SNHG8高表达(1.05±0.09比4.58±0.47、6.19±0.52、5.37±0.48,t=22.130、29.219、26.538,P<0.05),miR-224-3p低表达(1.02±0.08比0.53±0.07、0.41±0.06、0.47±0.08,t=13.829、18.300、14.584,P<0.05)。与si-con组相比,si-SNHG8组,肾癌细胞786-O中MMP-2、Ki-67、MDR1表达降低,cleaved Caspase-3表达升高,细胞存活率降低[(69.86±6.37)%比(96.42±9.26)%,t=7.089,P<0.05],迁移和侵袭数[(175.64±12.20)个比(292.70±20.45)个、(92.81±8.38)个比(147.24±15.93)个,t=14.748、9.072,P<0.05]降低,凋亡率升高[(19.48±2.28)%比(4.28±0.64)%,t=19.256,P<0.05],顺铂IC50值降低(1.47±0.14比7.81±0.22,t=19.454,P<0.05)。过表达miR-224-3p后,肾癌细胞786-O中MMP-2、Ki-67、MDR1表达降低,cleaved Caspase-3表达升高,细胞存活率降低[(67.36±8.65)%比(98.24±9.53)%,t=7.198,P<0.05],迁移和侵袭数[(155.81±16.67)个比(274.73±28.61)个、(72.96±8.35)个比(156.61±14.28)个,t=10.774、15.170,P<0.05]降低,凋亡率升高[(18.49±2.28)%比(4.67±0.63)%,t=17.527,P<0.05],顺铂IC50值降低(1.79±0.15比6.72±0.26,t=49.273,P<0.05)。结论沉默SNHG8可抑制肾癌细胞786-O增殖、迁移、侵袭,促进细胞凋亡,增强其对顺铂的敏感性;其机制可能与miR-224-3p有关。
简介:摘要目的探讨微小RNA(miRNA,miR)-598-3p靶向调控RNA聚合酶Ⅱ第五亚基调节蛋白(RMP)基因对人胃癌细胞SGC-7901恶性增殖和侵袭迁移的影响及其作用机制。方法筛选SGC-7901细胞株行后续实验,分别建立稳定过表达或敲减RMP和miR-598-3p的SGC-7901细胞株。采用溴脱氧尿苷(BrdU)、细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖活力,平板克隆形成实验检测细胞集落形成能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,双荧光素酶报告基因法分析miR-598-3p的结合靶点,蛋白质印迹法(Western blot)检测相关通路相关蛋白表达水平,两样本间比较使用t检验。结果稳定过表达和敲减RMP或miR-598-3p的SGC-7901细胞株建立成功。敲减RMP能显著降低SGC-7901的增殖能力,BrdU(8.867±1.159比26.030±3.630,t=7.704,P<0.01),CCK-8(0.560±0.052比1.020±0.107,t=6.708,P<0.01),迁移能力(336.000±21.070比252.700±36.120,t=3.452,P<0.05),侵袭能力(36.330±7.371比127.300±10.690,t=12.140,P<0.01)。过表达RMP能显著提高SGC-7901细胞的增殖能力,BrdU(56.400±6.560比24.800±4.423,t=6.918,P<0.01),CCK-8(2.105±0.142比1.028±0.110,t=10.350,P<0.01),迁移能力(131.300±20.110比257.000±29.140,t=6.148,P<0.01),侵袭能力(347.700±41.140比135.000±17.690,t=8.226,P<0.01)。生物信息学预测miR-598-3p与RMP的3’端非编码区(3’UTR)位点结合,并通过双荧光素报告系统验证。过表达或敲减miR-598-3p能分别降低和提高SGC-7901细胞株的增殖、迁移及侵袭能力,而RMP的回复表达能挽救miR-598-3p引起的细胞增殖、侵袭及迁移的抑制。miR-598-3p通过靶向RMP抑制p70核糖体蛋白S6激酶(p70s6k1)/凋亡蛋白(Bad)和核因子-κB(NF-κB)通路发挥功能。结论miR-598-3p靶向RMP基因抑制p70s6k1/Bad和NF-κB通路降低SGC-7901细胞的增殖、集落形成、迁移及侵袭能力。
简介:摘要目的观察长链非编码RNA(lncRNA)靶向微小RNA(miR)-130a-3p基因对骨关节炎(OA)软骨细胞增殖及炎性因子分泌的影响。方法将中南大学湘雅医学院附属海口医院从2018年1月至2020年1月收治的OA患者30例纳入研究。分别采集OA以及正常软骨细胞,通过实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同软骨细胞中的lncRNA同源基因转录反义RNA(HOTAIR)以及miR-130a-3p表达水平。此外,于OA软骨细胞中转染siRNA-lncRNA HOTAIR或LV-lncRNA HOTAIR,采用细胞增殖实验(CCK-8)法完成细胞增殖情况的检测,并以RT-PCR法检测炎性因子分泌情况。计数资料以%表示,采用χ2检验。符合正态分布的计量资料以均数±标准差(±s)表示,采用t检验。结果OA软骨细胞中的lncRNA HOTAIR mRNA相对表达量为3.01±0.42,明显高于正常软骨细胞(1.08±0.23),而miR-130a-3p mRNA相对表达量为0.48±0.11,明显低于正常软骨细胞(1.00±0.01),差异均有统计学意义(P值均<0.05)。转染si-lncRNA HOTAIR组OA软骨细胞的增殖能力相较于转染si-NC组明显增加,而转染LV-lncRNA HOTAIR组OA软骨细胞的增殖能力相较于转染LV-NC组显著下降,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。转染si-lncRNA HOTAIR组OA软骨细胞的miR-130a-3p表达水平显著升高,而转染LV-lncRNA HOTAIR组OA软骨细胞的miR-130a-3p表达水平显著下降,且经Pearson相关分析显示,在OA软骨细胞中,lncRNA HOTAIR和miR-130a-3p表达水平呈明显负相关关系,差异有统计学意义(r=-0.912,P<0.05)。转染si-lncRNA HOTAIR后的OA软骨细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ-干扰素(IFN-γ) mRNA相对表达量分别为0.47±0.10、0.52±0.13,均明显低于转染LV-lncRNA HOTAIR后(0.88±0.19、0.93±0.15),差异有统计学意义(P值均<0.05)。结论lncRNA HOTAIR通过靶向调控miR-130a-3p基因,继而影响OA软骨细胞的增殖,并具有一定的炎性反应调控作用。
简介:摘要自噬是降解细胞内蛋白质和受损细胞器的一个动态过程,维持着细胞内的环境稳定,并为细胞的存活提供良好条件。高氧性急性肺损伤(HALI)是临床氧疗的严重并发症之一。HALI的发病机制尚不明确,已有研究表明自噬参与了HALI的发生过程。调控自噬的通路机制众多,包括磷脂酰肌醇-3-激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路、丝裂素活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(MAPK/ERK)信号通路、磷酸腺苷依赖性蛋白激酶/unc-51类自噬激活激酶1(AMPK/ULK1)信号通路以及转化生长因子-β(TGF-β)、叉头转录因子O1(FoxO1)和Ras三磷酸腺苷酶超家族成员Rab11a参与的信号通路,上述信号通路相关基因作为微小RNA-21-5p(miR-21-5p)靶基因在众多疾病中具有调控自噬活性的作用。本文就miR-21-5p靶基因调控自噬的各信号通路进行综述,以期寻找到有关HALI中miR-21-5p靶基因调控自噬发挥肺保护作用机制的线索,也为后续基础研究提供相关理论依据。
简介:摘要目的探讨微小RNA-21-5p(miR-21-5p)是否具有抗人Ⅱ型肺泡上皮细胞(ATⅡ)凋亡的作用。方法体外培养人ATⅡ细胞,待细胞生长至光镜下可见层状体和微绒毛时用于实验。将细胞分为空白对照组(直接培养,不予任何处理)、过氧化氢(H2O2)损伤组(加入0.5 mmol/L H2O2)、miR-21-5p过表达组〔加入感染复数(MOI)为100的miR-21-5p慢病毒过表达载体与0.5 mmol/L H2O2共培养〕和空病毒对照组(加入miR-21-5p慢病毒空白载体与0.5 mmol/L H2O2共培养)。各组分别于细胞培养0、12、24、36、48 h采用细胞增殖及毒性检测试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖情况;于培养24 h采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果①细胞增殖活性检测结果:随着细胞培养时间的延长,空白对照组细胞增殖活性逐渐增强,而加入0.5 mmol/L H2O2处理后细胞增殖活性则逐渐下降;但miR-21-5p过表达组细胞增殖活性较H2O2损伤组和空病毒对照组下降缓慢,48 h时细胞增殖活性明显高于H2O2损伤组和miR-21-5p空病毒对照组〔吸光度(A)值:0.295±0.005比0.184±0.005、0.169±0.002,均P<0.05〕。说明H2O2及慢病毒均加快了细胞损伤,而miR-21-5p可抑制细胞凋亡。②细胞凋亡检测结果:与空白对照组比较,加入0.5 mmol/L H2O2处理后细胞凋亡率明显升高;而miR-21-5p过表达组细胞凋亡率较H2O2损伤组和空病毒对照组均明显降低〔早期细胞凋亡率:(14.31±0.12)%比(24.50±0.12)%、(23.41±0.13)%,晚期细胞凋亡率:(8.12±0.13)%比(9.71±0.11)%、(10.41±0.15)%,总体细胞凋亡率:(22.33±0.12)%比(34.21±0.10)%、(33.82±0.14)%,均P<0.05〕,进一步证明miR-21-5p具有抗细胞凋亡作用。结论miR-21-5p具有抗人ATⅡ凋亡的作用。
简介:摘要目的研究微小RNA-296-3p对舌鳞状细胞癌(简称舌鳞癌)细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其潜在机制。方法以正常口腔上皮黏膜角质细胞HOK为对照,实时定量聚合酶链反应法检测舌鳞癌细胞系CAL27、SCC15和SCC9中miR-296-3p和核蛋白1(NUPR1) mRNA的表达,蛋白印迹法检测NUPR1蛋白表达水平。CAL27细胞分为对照组(NC组)、miR-con组、miR-296-3p组、si-con组、si-NUPR1组、miR-296-3p+pcDNA组和miR-296-3p+pcDNA-NUPR1组,细胞计数试剂盒8(CCK8)法检测细胞活性,Transwell检测细胞迁移和侵袭,蛋白印迹法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证CAL27细胞中miR-296-3p与NUPR1的调控关系。结果与HOK细胞相比,在舌鳞癌细胞系CAL27、SCC15和SCC9中miR-296-3p的含量显著降低(0.54 ± 0.08、0.38 ± 0.05、0.59 ± 0.07比1.04 ± 0.12,t = 10.401、15.231、9.718,P均<0.05),NUPR1 mRNA (5.94 ± 0.40、4.48 ± 0.45、5.19 ± 0.48比0.94 ± 0.12,t = 35.918、22.803、25.769)和NUPR1蛋白(0.79 ± 0.09、0.54 ± 0.05、0.62 ± 0.08比0.28 ± 0.04,t = 15.535、12.182、11.404)表达量均显著升高(P均<0.05)。与NC组、miR-con组相比,miR-296-3p组CAL27细胞活性、迁移数、侵袭数及PCNA、MMP-2和MMP-9的蛋白表达均降低(P均<0.05)。与NC组、si-con组相比,si-NUPR1组CAL27细胞活性、迁移数、侵袭数及PCNA、MMP-2和MMP-9的蛋白表达均降低(P均<0.05)。miR-296-3p在CAL27细胞负调控NUPR1表达。与miR-296-3p+pcDNA组相比,miR-296-3p+pcDNA-NUPR1组CAL27细胞活性(138.34 ± 5.73比98.54 ± 5.89,t = 14.530)、迁移数(95.28 ± 7.56比67.92 ± 5.23,t = 8.929)、侵袭数(184.53 ± 17.57比101.26 ± 10.64,t = 12.162)及PCNA (0.68 ± 0.07比0.35 ± 0.06,t = 10.738)、MMP-2(0.43 ± 0.05比0.29 ± 0.04,t = 6.559)和MMP-9(0.58 ± 0.06比0.33 ± 0.08,t = 7.500)的蛋白表达均升高(P均<0.05)。结论miR-296-3p通过靶向负调控NUPR1表达抑制舌鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭。
简介:摘要目的研究微小RNA-296-3p对舌鳞状细胞癌(简称舌鳞癌)细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其潜在机制。方法以正常口腔上皮黏膜角质细胞HOK为对照,实时定量聚合酶链反应法检测舌鳞癌细胞系CAL27、SCC15和SCC9中miR-296-3p和核蛋白1(NUPR1) mRNA的表达,蛋白印迹法检测NUPR1蛋白表达水平。CAL27细胞分为对照组(NC组)、miR-con组、miR-296-3p组、si-con组、si-NUPR1组、miR-296-3p+pcDNA组和miR-296-3p+pcDNA-NUPR1组,细胞计数试剂盒8(CCK8)法检测细胞活性,Transwell检测细胞迁移和侵袭,蛋白印迹法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证CAL27细胞中miR-296-3p与NUPR1的调控关系。结果与HOK细胞相比,在舌鳞癌细胞系CAL27、SCC15和SCC9中miR-296-3p的含量显著降低(0.54 ± 0.08、0.38 ± 0.05、0.59 ± 0.07比1.04 ± 0.12,t = 10.401、15.231、9.718,P均<0.05),NUPR1 mRNA (5.94 ± 0.40、4.48 ± 0.45、5.19 ± 0.48比0.94 ± 0.12,t = 35.918、22.803、25.769)和NUPR1蛋白(0.79 ± 0.09、0.54 ± 0.05、0.62 ± 0.08比0.28 ± 0.04,t = 15.535、12.182、11.404)表达量均显著升高(P均<0.05)。与NC组、miR-con组相比,miR-296-3p组CAL27细胞活性、迁移数、侵袭数及PCNA、MMP-2和MMP-9的蛋白表达均降低(P均<0.05)。与NC组、si-con组相比,si-NUPR1组CAL27细胞活性、迁移数、侵袭数及PCNA、MMP-2和MMP-9的蛋白表达均降低(P均<0.05)。miR-296-3p在CAL27细胞负调控NUPR1表达。与miR-296-3p+pcDNA组相比,miR-296-3p+pcDNA-NUPR1组CAL27细胞活性(138.34 ± 5.73比98.54 ± 5.89,t = 14.530)、迁移数(95.28 ± 7.56比67.92 ± 5.23,t = 8.929)、侵袭数(184.53 ± 17.57比101.26 ± 10.64,t = 12.162)及PCNA (0.68 ± 0.07比0.35 ± 0.06,t = 10.738)、MMP-2(0.43 ± 0.05比0.29 ± 0.04,t = 6.559)和MMP-9(0.58 ± 0.06比0.33 ± 0.08,t = 7.500)的蛋白表达均升高(P均<0.05)。结论miR-296-3p通过靶向负调控NUPR1表达抑制舌鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭。
简介:摘要目的研究微小RNA(miR)-513a-3p调控己糖激酶2(HK2)对结直肠癌细胞增殖和糖代谢的影响。方法2019年5月至2020年2月分别用miR-513a-3p模拟物、miR-513a-3p抑制物和miR对照物转染结直肠癌SW480细胞,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-513a-3p在结直肠癌SW480细胞、正常结直肠细胞及各结直肠癌SW480细胞转染后的表达水平;CCK-8法检测miR-513a-3p对细胞增殖的影响;Brd/PI掺入实验检测miR-513a-3p对糖代谢的影响;蛋白质印迹法检测HK2表达水平。结果结直肠癌SW480细胞miR-513a-3p表达水平明显低于正常结直肠细胞(0.43 ± 0.06比1.00 ± 0.02),差异有统计学意义(t = 7.024,P = 0.003)。结直肠癌SW480细胞转染miR-513a-3p模拟物后miR-513a-3p表达水平明显高于转染miR对照物和转染miR-513a-3p抑制物(1.18 ± 0.24比0.45 ± 0.04和0.22 ± 0.03),转染miR对照物后miR-513a-3p表达水平明显高于转染miR-513a-3p抑制物,差异均有统计学意义(P<0.05)。结直肠癌SW480细胞转染miR-513a-3p模拟物24、48、72和96 h细胞增殖能力明显低于转染miR对照物,转染miR-513a-3p抑制物24、48、72和96 h细胞增殖能力明显高于转染miR对照物,差异均有统计学意义(P<0.05)。结直肠癌SW480细胞转染miR-513a-3p模拟物后葡萄糖摄取量及乳酸和硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)表达水平明显低于转染miR对照物(1.02 ± 0.04比1.90 ± 0.06、0.88 ± 0.03比1.45 ± 0.04和0.16 ± 0.02比0.86 ± 0.06),转染miR-513a-3p抑制物后葡萄糖摄取量及乳酸和TXNIP表达水平明显高于转染miR对照物(2.35 ± 0.09比1.90 ± 0.06、1.67 ± 0.08比1.45 ± 0.04和2.01 ± 0.15比0.86 ± 0.06),差异均有统计学意义(P<0.05)。结直肠癌SW480细胞转染miR-513a-3p模拟物后HK2表达水平明显低于转染miR对照物(0.20 ± 0.01比1.02 ± 0.04),差异有统计学意义(t = 8.367,P<0.05);转染miR-513a-3p抑制物后HK2表达水平明显高于转染miR对照物(1.91 ± 0.07比1.02 ± 0.04),差异有统计学意义(t = 4.279,P<0.05)。结论miR-513a-3p对于结直肠癌细胞的增殖和糖代谢有明显的抑制作用,并且其调控机制与miR-513a-3p抑制细胞中HK2蛋白的表达有关。