简介:摘要目的实现APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(AD)小鼠的繁殖并采用多对引物同时进行的多重PCR对子代小鼠进行基因型鉴定。方法将阳性转基因雄鼠与野生型雌鼠一对一进行交配,利用多引物多重PCR鉴定子代小鼠的基因型。结果在合适的PCR条件下三引物体系可以准确有效鉴定出子代小鼠的基因型。结论正确饲养繁殖及利用多引物同时进行的多重PCR对子代小鼠进行基因鉴定可以快速有效获得APP/PSl双转基因小鼠,为后续研究提供有效的AD动物模型。
简介:摘要目的对采供血过程中出现的血型不一致情况进行调查分析以降低不一致比例。方法针对我血站2009年—2014年出现的血型不一致情况进行再次检测得出结果。结果2009年—2014年我站共有157例ABO血型不一致,其中59例初筛血型鉴定错误、51例电脑录入错误、5例标本错误和42例正反定型不一致引起。针对42例正反定型不一致标本进行进一步检测,其原因有红细胞抗原性降低(12例)、冷凝集素导致(11例)、抗体效价偏低(11例)、亚型(2例)人为判断错误(2例)和不规则抗体(5例)等。结论采供血机构应加强员工责任意识培训减少人为因素导致血型错误的发生,同时加强实验室能力建设提升实验室相关项目的检测能力。
简介:目的旨在研究来源于抗病毒基因HERC5的新型环状RNAhsa_circ_0001426的特征,并探索该环状RNA真核过表达载体的构建和鉴定。方法从反向剪切位点的验证、蛋白翻译的潜能、对RNaseR处理的抵抗性、在细胞内的胞质胞核分布情况四个方面来研究hsa_circ_0001426的特征。此外,还利用环状RNA克隆构建试剂盒来构建hsa_circ_0001426的过表达载体,并验证其表达效果。结果hsa_circ_0001426是由HERC5基因第18号外显子反向剪切至第12号外显子形成,其序列中包含一条可翻译318个氨基酸的开放阅读框,其抵抗RnaseR的处理,主要分布于细胞质。针对该环状RNA的过表达载体构建成功,其在转染HEK293T细胞后48h的表达量最高。结论首次成功分析了抗病毒基因HERC5的新型环状RNAhsa_circ_0001426的特征,并利用试剂盒首次成功构建了hsa_circ_0001426的真核过表达载体,并可在细胞中高效表达;为深入研究hsa_circ_0001426的特征和功能奠定基础,并进一步扩充了HERC5基因的相关研究。
简介:摘要 目的:探讨改良的新生乳鼠原代海马神经细胞体外培养方法,建立稳定方便的神经细胞体外培养方法,探索 KA在体外对海马神经细胞存活率的影响。方法:采用新生 24h以内的 SD乳鼠,分离海马后,不用机械剪碎组织块,直接用胰蛋白酶进行消化后,用含血清的 DMEM+B27培养液制成细胞悬液进行接种,接种 24h换用无血清 Neurobasal+B27持续培养。选用海马神经细胞特异抗体 MAP2通过免疫荧光法鉴定细胞纯度。用 MTT测相对存活率,研究 KA在体外对海马神经细胞的致死效果。结果:接种 24h后细胞完全贴壁,并长出突起,之后突起延长交错成网络, 7~8天神经细胞达到成熟顶峰,之后逐渐老化, 21天后老化已非常明显。海马神经细胞纯度达 96%以上。 KA在体外同样能有效诱导海马神经细胞死亡, 4、 8h时间对比效果明显, 2、 12、 24h差异不大。结论:改良的方法能稳定便捷地在体外培养神经细胞,细胞纯度好,可用于神经疾病体外研究。 KA受体在体外同样能被 KA激活,诱导细胞死亡,相关后续研究可进行体外实验,最佳研究时间在给药后 4~8h。