简介：无

简介：摘要目的基于重组酶介导的扩增技术(recombinase aided amplification，RAA)和CRISPR (clustered regularly interspaced short palindromic repeats)-Cas13a(CRISPR-associated protein 13a)检测，建立一种快速、灵敏且特异的重要境外输入性病毒检测方法。方法以流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus，JEV)、黄热病毒(Yellow fever virus，YEV)、西尼罗病毒(West Nile virus，WNV)、中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus，MERS-CoV)、埃博拉病毒(Ebola virus，EBOV)、登革病毒(Dengue virus，DENV)、裂谷热病毒(Rift Valley fever virus，RVFV)、寨卡病毒(Zika virus，ZIKV)为检测对象，设计特异性RAA扩增引物和CRISPR RNA(crRNA)，建立RAA扩增结合CRISPR-Cas13a蛋白检测反应，评价方法的灵敏度和特异性，使用登革热疑似临床样本进行检测，并与荧光RT-PCR技术进行比较，同时检测其余7种病毒临床模拟样本。结果RAA扩增结合CRISPR-Cas13a蛋白检测方法能在39 ℃条件下，40~52 min内检测出8种输入性传染病病原体，灵敏度达到1~10拷贝/μl，并且这8种病原体之间无交叉反应，临床样本均可100%检测出。结论建立的RAA扩增结合CRISPR-Cas13a蛋白检测方法能够灵敏、特异且快速地检测出8种境外输入性传染病病原体。

简介：摘要目的利用CRISPR/Cas9技术构建Crx-iCreERT2红色荧光报告人胚胎干细胞(ESCs)系及其3D视网膜类器官培养。方法对H9细胞系靶位点序列进行PCR扩增并测序验证后，利用CRISPR/Cas9技术设计多条sgRNA并对其进行活性检测，根据活性、特异性等因素选择最合适的sgRNA。经酶切鉴定和测序确认打靶载体构建完成后，将打靶载体电转H9细胞系，在hES-ZLM-001基因Exon4和3’-非翻译区之间终止密码子前插入P2A-tdTomato-P2A-iCreERT2，进行药物筛选、阳性克隆富集。设计引物对目标区域进行PCR扩增并测序，根据测序结果和测序峰图选出纯合去抗性敲进阳性细胞克隆。培养所得1-A07细胞系，通过流式细胞分析法检测OCT4阳性细胞比例，采用细胞爬片免疫荧光染色法观察干细胞标志物SOX2、NANOG和SSEA4表达情况。采用核型分析方法检测细胞核型。应用3D培养技术获得视网膜类器官，于分化后不同时间点行冰冻切片，免疫荧光染色法检测不同种类细胞分子标志物的表达分布情况。结果H9细胞系靶位点序列与Genebank和Ensembl所提供序列一致。根据H9细胞系靶位点序列共设计16条sgRNA，最终选择sgRNA8和sgRNA12作为sgRNA。电转后通过PCR筛选得到4个去抗性敲进阳性克隆，其中1-A07细胞系经流式细胞仪分析OCT4阳性细胞比例约为98.7%，所得细胞系外源性tdTomato-P2A-iCreERT2片段重组位置正确，正常表达干细胞标志物，核型分析结果正常。应用3D培养技术可定向诱导1-A07细胞系分化为表达tdTomato红色荧光的视网膜类器官。分化后30 d，出现BRN3A阳性神经节细胞、CALBINDIN阳性水平细胞、CHAT阳性无长突细胞，分化后45 d，出现RECOVERIN阳性光感受器细胞，分化后90 d出现PKCα阳性双极细胞。神经节细胞分布于视网膜类器官深层，水平细胞、无长突细胞、双极细胞分布于中深层，光感受器细胞主要分布于顶层。结论成功构建Crx-iCreERT2红色荧光报告人ESCs系，该细胞系可经3D培养诱导分化为表达tdTomato红色荧光的视网膜类器官。得到的视网膜类器官同人类正常视网膜的神经细胞组成一致，且发育的时间和空间顺序接近于正常的人类视网膜。该细胞系是一种强大的工具，可帮助实现人类视网膜发育和疾病产生的相关研究，并促进致盲疾病治疗方法的开发。

简介：AbstractGenome editing serves as a powerful approach to interrogate the functions of both coding and noncoding sequences. In particular, clustered regularly interspaced short palindromic repeat (CRISPR)/CRISPR associated protein 9 (Cas9) system-based editing tools have revolutionized the way we study genome function in mammalian cells, and are being widely used for interrogating critical genes and DNA elements essential for many biological processes. Here, we review CRISPR/Cas9-based genetic tools with an emphasis on CRISPR-mediated high throughput genetic screens in the mammalian genome.

简介：摘要近年来细菌的耐药问题日益严重，其形成生物膜后更是具有极强的耐药能力，治疗难度极大提高。除屏障作用、微环境改变等理化因素外，生物膜中部分基因调控也特异地提高细菌耐药性。细菌耐药与形成生物膜的能力之间可能存在共同的调控机制。Ⅰ型成簇的规律间隔短回文重复序列（CRISPR）系统能够调节细菌耐药基因的获得和传播，其作用因种属、进化过程、环境压力而异。新近有报道Ⅰ型CRISPR系统影响生物膜的形成，而且参与噬菌体和生物膜的相互作用，有可能成为研究噬菌体治疗的切入点。本文对近年来细菌耐药形势、生物膜耐药新进展，以及Ⅰ型CRISPR系统影响细菌生物膜的形成与耐药的生物学意义进行综述，为防治细菌感染提供新思路。

简介：摘要自CRISPR/Cas9问世以来，基因编辑技术愈发受到关注，尤其是核酸酶仅由单一蛋白组成的Ⅱ类系统，其功能蛋白包括Ⅱ型Cas9、Ⅴ型Cas12和Ⅵ型Cas13等，可以精准编辑基因组DNA或RNA。失活型CRISPR/Cas9突变体还能够将转录因子、表观遗传因子或碱基修饰酶等效应元件特异性地募集至目标基因位点发挥功能。此外，光遗传学技术能够从时间和空间水平精确地控制生物反应。结合CRISPR和光遗传学技术可实现细胞和动物体内的动态化时空特异性基因编辑，在生物学和医学领域发挥巨大的应用潜力。本文综述了光控CRISPR系统的研究进展，介绍其设计方法和应用策略，讨论其局限性，为这一新兴领域的发展提供参考。

简介：据BerteroA2016年12月1日[Development，2016，143（23）：4405—4418．]报道，英国韦尔科姆基金会桑格研究所和剑桥大学的研究人员构建出一种更加高效的和可控的CRISPR基因组编辑平台——80蹦K0或sOPTiKD。该优化单步骤系统能了解基因如何在体内每个细胞和每个发育步骤中发挥作用。该新方法将有助科学家们开展发育生物学、组织再生和癌症研究。

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简介：水通道蛋白是一组对水有高选择性的跨膜转运蛋白,广泛分布在机体各组织,在水的分泌吸收、细胞内外水平衡等过程中起着重要作用。水通道蛋白9（AQP9）是水通道蛋白家族成员之一,是1998年发现的一种新的水通道蛋白亚型,现就AQP9的基本特点,在消化道的分布、表达,

简介：摘要：目的：本研究旨在探讨CRISPR基因编辑技术在治疗特定遗传性疾病中的疗效与安全性。方法：于2023年2月至2024年2月期间，选取60例患有不同遗传性疾病的患者，采用CRISPR技术进行精准基因编辑。治疗过程中监测患者的生理指标变化，并记录不良反应情况。治疗后，对患者进行长期随访，评估治疗效果及生活质量改善情况。结果：经CRISPR技术治疗后，60例患者中有54例显示出明显的病情改善，有效率达90%。其中，部分患者实现了疾病的完全缓解。治疗过程中，少数患者出现轻微不良反应，但均在可控范围内。长期随访结果显示，患者生活质量得到显著提升。结论：CRISPR基因编辑技术在治疗遗传性疾病中展现出较高的疗效与安全性，为患者提供了新的治疗选择。未来，随着技术的不断优化，有望为更多遗传病患者带来福音。

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简介：摘要：随着社会经济的飞速发展，过度捕捞、环境污染、生态入侵、生境丧失等问题逐渐出现，给基因编辑CRISPR技术在海洋生物遗传育种带来了一定的威胁。海洋生态系统是人类赖以生存和发展的重要物质和文化基础。完善海洋生态系统养护和管理，才可以在潜移默化的历程中，实现基因编辑CRISPR技术在海洋生物遗传育种可持续保护和发展。基因编辑CRISPR技术在海洋生物遗传育种研究与保护是当前生物多样性领域的热点问题，概述基因编辑CRISPR技术在海洋生物遗传育种的研究进展，不仅可以探究问题趋势，还可以根据热点方向，指明今后基因编辑CRISPR技术在海洋生物遗传育种评价方向。

简介：本刊已于2012年9月1日开通在线投稿系统，网址为：http：／／pfxbzlx．gdvdc．com。所有稿件全部采取在线投稿和审稿，请作者通过网站投稿。’在线投稿系统主要包括作者投稿与查询、专家在线审稿、远程编辑办公、主编审稿系统4部分。

简介：本刊已于2012年9月1日开通在线投稿系统，网址为：http：∥pfxbzlx．gdvdc．com。所有稿件全部采取在线投稿和审稿，请作者通过网站投稿。在线投稿系统主要包括作者投稿与查询、专家在线审稿、远程编辑办公、主编审稿系统4部分。作者可通过本刊网站投稿并查询稿件处理情况，审稿专家可实现网上审稿，读者可通过网站阅读本刊已发表论文的全文。

简介：一．传说国外女明星都用丝质枕头．可以防止皱纹？有道理！因为丝质枕头滑顺细致．不会摩擦肌肤，起床后脸也不会有枕头的挤压纹，的确对肌肤比较好。

简介：萝卜籽治好慈禧的病有一年，慈禧太后做寿时，因贪食佳肴而病倒，慈禧命令御医每日给予“独参汤”进补，开始疗效还可，后来非但不效，反而头胀、胸闷、食欲不佳，还经常发怒，流鼻血，众多御医束手无策，只好张榜招贤：“凡能医好太后之病者，必有重赏。”转眼3天，有位走方郎中对皇榜细加琢磨，悟出太后发病的机理，便将皇榜揭了下来。郎中从药箱内取出3钱莱菔子，

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简介：目的：探讨血清CEA和CAl9-9联合检测对胃癌根治术后复发及(或)转移诊断的实用价值。方法：57例胃癌患者，在根治术后a1～5规定的时间内分别做血CEA及CAl9-9、胃镜、腹部B超、胸片等相关检查；血清CEA及(或)CAl9-9阳性者即做胃镜及(或)肠镜、腹部B超、胸片等相关检查或胃镜及腹部B超等检查提示复发或转移者、有腹部不适、大便性状改变、食欲下降、体重减轻等症状即做血清CEA及CAl9-9检查。血清CEA、CAl9-9检测采用美国雅培快速酶免发光分析仪。结果：有34例被证明有复发及转移，其中CEA阳性率38．2％，CA19-9阳性率52．9％，CEA及CAl9-9合并阳性率为73．5％，单项检测阳性率与联合检测的阳性率比较有统计学意义(P<0．01)。结论：血清CEA和CAl9-9联合检测可将单项检测的阳性率从50％左右提高到73．5％，联合检测与单项检测比较，有统计学意义。因此血清CEA及CAl9-9联合检测对胃癌术后监控、及时治疗可起重要作用，有一定的实用价值。

简介：摘要目的探讨青藏高原鼠疫自然疫源地鼠疫菌规律间隔成簇短回文重复序列（CRISPR）的基因型及其地区分布。方法选取青海省地方病预防控制所保存的1954-2011年在不同地区宿主、媒介体内分离的1 004株鼠疫菌作为实验对象，采用传统的苯酚-氯仿混合抽提法提取鼠疫菌DNA。分别对3个CRISPR位点（YPa、YPb和YPc）进行PCR扩增、测序，将所测得CRISPR序列与文献最新报道的CRISPRDictionary数据库进行检索比对，以鉴定间区序列（spacer）；对CRISPR各位点新发现的spacer，在美国国家生物技术信息中心（NCBI）数据库进行Blast序列比对，推测基因序列来源。根据CRISPR spacer阵列的多态性对青藏高原鼠疫菌进行基因分型。结果1 004株鼠疫菌共发现53种spacer，其中新发现6种，分别为a105、a106、a107、b51、b52、c14；1 004株鼠疫菌被分成44个不同的CRISPR基因型，10大类群，新发现基因型15种，喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地鼠疫菌CRISPR基因型以G26-a1′、G7、G22、G24-a1′、G22-a1′、G9、G26-a1′a60型为主，青海田鼠鼠疫自然疫源地鼠疫菌CRISPR基因型为G37-a6′型。结论青藏高原鼠疫自然疫源地鼠疫菌CRISPR基因型具有高度多样性，且地区分布特征显著。

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