简介：目的建立CAR杆菌的PCR监测方法,筛查国内部分实验动物样本中CAR杆菌携带状况。方法利用CAR杆菌的特有16SrRNA基因序列片段267bp设计引物,通过从日本实验动物中央研究所获取的CAR标准株DNA,建立实验动物CAR杆菌16SrRNA基因PCR监测方法。结果利用建立的CAR杆菌16SrRNA基因PCR监测方法对国内455份实验动物样本进行筛查,未检出CAR杆菌感染。结论建立了敏感性好,特异性高的实验动物CAR杆菌PCR监测方法,未见动物携带CAR杆菌。

简介：介绍了一种简单、快速的利用毛细管分离竹黄单孢菌株的方法。用毛细管吸有孢子液一端的轻印在固体培养基表面的印迹固定显微视野，快速确定单孢，简易地分离了竹黄单孢菌株。该方法值得推广到其它种类真菌的单孢分离工作中。

简介：目的DNA是进行分子生物学研究的重要基础。在本研究中,我们建立了2种简单快速抽提基因组DNA的方法并可用作PCR扩增的模板。通过比较4种不同的DNA抽提方法以确定哪种更适合进行下一步的基因分析。方法这4种方法是：玻璃珠法,酶法,3%SDS法和氯化苄法。玻璃珠法是用玻璃珠在混漩器上剧烈振荡破碎细胞壁;3%SDS法是将细胞在含10mmol/LDTT的3%SDS溶液中加热,然后用5mmol/LKAc和异丙醇抽提,DNA的产量通过A260测定。结果3%SDS溶解法、经典酶法、玻璃珠法和氯化苄法的DNA产量分别为0.4154±0.0367、0.8484±0.0756、1.2636±0.2040、0.4070±0.0339（g/L×10^8CFU/mL）。结论玻璃珠法是最敏感、重复性好、简单、费用合理的抽提方法。

简介：【背景】转基因作物花粉在大气中扩散会引起基因漂流,从而可导致不可预知的环境风险,运用模型预测可评估其花粉扩散状况、定量确定可靠的安全扩散距离。为了应用高斯烟羽模型应用于模拟转基因作物花粉在大气中的扩散浓度,提出了一种如何将半径为R的圆形花粉源区划分成许多等面积小面元的方法。【方法】通过数学推导,首次提出了各等面积面元中心点坐标的计算公式。【结果】根据在中国东北地区吉林省公主岭玉米花粉扩散和基因漂流的试验观测资料,将该公式应用到高斯烟羽扩散模型中,模拟了玉米花粉扩散到源区外不同距离处的浓度,对比花粉扩散模拟值与实测值,两者具有较好的一致性,表明应用该公式模拟花粉扩散能取得令人满意的效果。【结论与意义】分析证明这种推导划分半径为R的圆形花粉源区各面元中心点坐标的计算公式是可靠的,该方法可为应用高斯烟羽模型计算花粉源区内不同位置点单个源强对源区外某一距离处的花粉浓度的贡献提供便利。

简介：目的：基于大肠杆菌质粒pMMB207,构建贝氏柯克斯体穿梭载体,建立贝氏柯克斯体转化系统。方法：利用PCR分别扩增eGFP基因、Kan~R抗性基因、贝氏柯克斯体组成型表达启动子P311和P1169等4段序列,然后用融合PCR技术将4段序列融合为P311-eGFP-P1169-Kan~R串联序列,经KpnⅠ和XhoⅠ酶切后,连接至经同样双酶切的pMMB207骨架上,构建穿梭载体p207-GK;将穿梭载体电转化至贝氏柯克斯体,用ACCM-2培养基进行传代培养或感染BGM细胞;利用倒置荧光显微镜观察eGFP基因的表达,传代至eGFP基因高表达时,用半固体平板培养法克隆分纯贝氏柯克斯体转化株。结果：构建了贝氏柯克斯体穿梭载体,获得了稳定表达eGFP的贝氏柯克斯体转化株,并完成了克隆分纯。结论：建立了完整的贝氏柯克斯体转化系统,为后续用遗传学方法研究贝氏柯克斯体奠定了基础。

简介：本文对仓储害虫谷斑皮蠹TrogodermagranariumEverts的形态特征、国内外分布情况、生物学和寄主等进行了描述。并根据半定量有害生物风险分析的方法,采用多指标综合评估方法来计算谷斑皮蠹的风险程度,评价出谷斑皮蠹属于高度危险的有害生物,并提出相应的风险管理对策。

简介：目的以大鼠胆源性胰腺炎模型为对象，比较国外相关的评分标准，探讨这一实验模型合理，准确的病理学评定方法。方法48只SD大鼠分善宁（16只），对照（21只）和假手术（11只）不同处理组，胰胆管内注射牛磺胆酸的诱发大鼠急性坏死型胰腺炎，参照Schmidt等普通病理学评分标准并加以改进，结合电镜超微结构观察等，评定不同标准的病理组织学评分的准确性。结果急性坏死型胰腺炎大鼠解剖时见大量红色腹腔渗液，最多者达体重的6%；光镜下见胰腺组织明显出血，腺细胞坏死；小叶破坏，结构紊乱，小叶间隔大量红细胞；肝脏，心脏，肺和肾脏也出现组织充血，出血等，不同处理组的4项组织学评分标准显示Schmidt方法不能显示组间出血的严重程度，炎症，水肿，坏死3项过于繁冗。以高倍镜下间隔红细胞数平均值和分级评分比较，组间出血显示显著性差异。结论1）腹腔大量红色渗液，胰腺组织出血坏死，微血管内微血栓形成和胰外多器官损伤等是这一模型的特征；2）在简化Schmidt评分标准中水肿，坏死，炎症等3项和出血指标以及间隔红细胞数和分级统计的基础上，作者提出新的标准，以更为准确合理地评定大鼠急性坏死型胰腺炎的病理组织学特征。

简介：目的：比较并评价涂片抗酸染色法（涂片法）、L-J培养法和基因芯片法在分枝杆菌检测中的应用价值。方法：对241例需查抗酸杆菌的临床标本,采用涂片法、L-J培养法和基因芯片法检测分枝杆菌,3种方法检测结果存在分歧的标本再进行DNA测序,以培养鉴定结果阳性或DNA测序得到分枝杆菌序列为确诊标准。结果：241例标本,涂片法、L-J培养法和基因芯片法的检测阳性率依次为18.7%、12.0%、15.8%,经卡方检验三者阳性率的差异没有统计学意义（P〉0.05）;检测灵敏度依次为85.4%、70.7%、93.0%,经卡方检验三种方法的灵敏度总体来说有差别（χ2=7.24,P〈0.05）,涂片法与L-J培养法以及涂片法与基因芯片法的灵敏度差异没有统计学差异,基因芯片法的灵敏度高于涂片法（χ2=6.61,P〈0.05）;检测特异性依次为95.6%、100.0%、100.0%。38例基因芯片检测阳性患者中有28例为结核分枝杆菌,10例为非结核分枝杆菌。结论：与涂片法及培养法相比较,基因芯片法能够鉴别分枝杆菌菌种,同时具有快速、可靠、准确度高的特点,在分枝杆菌感染的早期诊断和抗菌治疗上具有重要的临床价值。

简介：目的探索一种新的真菌DNA提取方法,该方法操作简便,提取效率高,耗时较短,应用范围广.方法将酶消化和Chelex-100提取DNA方法联合起来,配制一种新的DNA提取试剂.通过真菌ITS4和ITS5通用引物进行PCR,对新的DNA提取试剂同市售的Takaralysisbuffer在DNA提取方面的效能进行评价,同时对DNA浓度和纯度进行测定.结果实验所用34株真菌,自配试剂成功提取出32株真菌DNA;Takaralysisbuffer成功提出27株真菌DNA.对于两种方法都没能提出DNA的2株真菌,经液氮研磨破壁后,自制试剂均成功提取;而Takaralysisbuffer仅成功提取DNA1株.结论同市售试剂Takaralysisbuffer比较,自配DNA提取液提取DNA质量相对较高,可用于临床常见感染真菌的PCR诊断.对于某些真菌,提取DNA之前先进行菌体破壁是必要的.

简介：目的以基因工程技术制备猴免疫缺陷病毒(SIV)的SIV30蛋白作为抗原诊断试剂,建立免疫梳方法(IC)用于特异性检测实验猴血清中抗SIV的抗体IgG。方法应用原核表达载体pGEX-4T-1构建SIVSIV30基因的重组表达质粒,并在感受态细胞BL21中表达,将该重组蛋白纯化后作为诊断抗原,建立免疫梳标准化检测程序,并应用于临床检测。结果最佳抗原包被量为0.02mg/mL;制备好的IC均能够特异性检测到相应的SIV阳性血清而不与其他病毒血清间发生交叉反应,表明该检测方法特异性强;敏感性分析结果表明,SIV30蛋白能够敏感地检测到1∶400倍稀释的SIV阳性血清;稳定性和重复性试验结果表明,同一样品重复检测3次,变异系数(CV)均小于10%;利用该检测方法在对10份可疑猴血清样品进行检测,IC与ELISA检测结果

简介：目的：建立一种便捷而经济的将DNA溶液填充至显微注射针的方法，以提高显微注射法转基因的效率。方法：将通常用于转移胚胎的口吸管稍加改进，吸取DNA溶液，从尾部直接注入显微注射针。结果：采用本方法填充显微注射针，可在2-5min完成DNA填充。结论：与传统方法相比，本法经济而高效，可加快显徽注射法制作转基因动物的实验进程。

简介：目的：调查和研究军团菌生物气溶胶的污染状况及其监测方法.方法：用微生物气溶胶浓缩器与标准生物气溶胶采样器联合采集取样,采集集中空调的冷却水作为水样,检测其中军团菌生物气溶胶的样品数量,并鉴定它们血清型.结果：在水样中可以检测到军团菌生物气溶胶阳性样品.结论：表明集中空调内存在大量的军团菌生物气溶胶.我们应该加强对集中空调内军团菌生物气溶胶的监测和处理,防止其危害人们的生命健康,导致人们换上呼吸道感染疾病.

简介：2013年9月的NatureCommunications报告了可降低大鼠血压的一种干预方法的作用机制。这项研究表明。”颈动脉体去神经”可通过降低交感神经系统的活性达到这种降低血压的目的。通过进一步试验。这一方法有可能用作针对具有抗药性高血压的患者的一种疗法。

简介：目的筛选一种既提高精子转染外源DNA效率，又保持解冻后精子活力的山羊精液冷冻—解冻方法。方法应用正交设计L9（3^4），因素分别为稀释液种类、稀释比例、降温时间和解冻液，每个因素选择3个水平，检测和比较解冻后精子转染外源DNA效率和精子活力。结果所选冷冻—解冻各因素对精液转染效率影响不显著[F（8，18）=1．032，P=0．449]；平衡时间对冷冻—解冻活力影响极显著[F（2，24）=9．972，P=0．001]，平衡1h极显著小于平衡2h和4h的精液活力（P=0．003，P=0．000），以平衡4h最好。用筛选的冷冻—解冻方法处理精液，解冻后精子的活力极明显降低（P=0．002）；生存指数降低，GOT释放量增加，菌落数减少，与鲜精相比差异显著（P=0．018；P=0．016；P=0．018）；精子畸形率增加，顶体完整率降低，与鲜精相比差异不显著（P=0．494；P=0．084）。结论优化了提高精子转染外源DNA效率的山羊精液冷冻—解冻方法。

简介：目的建立一种简便、快捷、准确的检测方法用于近交系小鼠的遗传检测。方法根据近交系小鼠的H-2基因序列设计相应的探针，并标记生物素，利用微孔板Southern杂交技术，使探针与模板DNA杂交，再加入亲和素标记的辣根过氧化物酶进行酶显色反应，通过酶标仪检测杂交结果，以确定近交系小鼠的基因型。结果57BL／6和C57B：／10为H-2^b型；DBA／2和Scid为H-2^d型；615和C3H为H-2^k型；NCPC／2、TA1、TA2和T739均为H-2^b型。结论通过Southern杂交检测可以确定近交系小鼠的基因型。该检测方法简便、易行，检测结果客观，可以应用于近交系小鼠的遗传检测。

简介：建立了从肉骨粉中提取DNA的稳定、简便易操作的方法.根据牛、羊线粒体DNA基因片段设计特异性引物和TaqMan探针,建立了实时荧光PCR技术检测肉骨粉中牛、羊源性成分的快速、特异、敏感的方法.

简介：目的：川金丝猴（Rhinopithecusroxellana）是我国特有珍稀物种，其粪便作为一种非损伤性样品，为珍稀濒危动物的种群数量调查、遗传多样性评价、亲缘关系、系统进化等研究带来了很大便利，本研究试图建立高效、简便的粪便样品保存方法。方法：在现有珍稀濒危动物粪便样品保存方法的基础上，分别使用干燥法、冷冻法和干燥．冷冻法保存川金丝猴的粪便样品，比较了不同保存方法的DNA提取效果，以及对mtDNA控制区片段的PCR扩增成功率和微卫星基因的PCR扩增效率。结果：干燥法、冷冻法和干燥一冷冻法三种不同保存方法保存粪便1周时间后，提取的粪便DNA样本扩增mtDNA片段的成功率均为92％，微卫星基因的扩增成功率分别为79％、78％、80％；保存2个月后，mtDNA片段扩增成功率分别为80％、76％和80％，微卫星基因扩增成功率分别为65％、61％、67％；保存6个月后，mtDNA片段扩增成功率分别为56％、52％和64％，微卫星基因扩增成功率分别40％、34％、46％。因此，随着保存时间的增长，三种方法的保存效率都将明显降低，但干燥．冷冻法得到的DNA样本扩增成功率相对较高。结论：粪便样品能够为川金丝猴的遗传多样性评价等相关研究提供有效信息，干燥一冷冻法保存能够更为有效的保证DNA的提取和基因扩增效率。

简介：白念珠菌是人体常见的机会致病性真菌,可存在于正常人口腔、上呼吸道、肠道及阴道,易在义齿、人工插管如尿道插管、气管插管等植入性设备表面定植并进一步形成生物膜。生物膜的形成可保护菌体免受药物的杀伤和免疫系统的攻击。黏附是生物膜成膜的关键,也是白念珠菌致病的关键步骤[1]。本实验拟通过结晶紫法与XTT法观察中药厚朴对白念珠菌黏附的影响,并对两种检测方法进行评价。

简介：介绍了几种保存大型真菌分子生物学实验材料的方法,用这几种方法所保存的材料提取的基因组核糖体脱氧核糖核酸(DNA)质量适于系统生物学及其他分子生物学研究之用.

简介：念珠菌是最主要的致病性真菌之一。随着医学分子生物学的发展，有关对念珠菌的致病基因及其表达的研究越来越广泛，进行这些研究的一个关键步骤就是RNA的提取。主要由几丁质组成的真菌的细胞壁厚且坚韧，因此破壁是提取念珠菌RNA的关键。