简介:生物发光标记以其可视化,便捷,快速,灵敏,可用于活体研究等诸多优点越来越多地应用于科学研究中。本研究通过CaCl2方法将实验室构建的带有青海弧菌荧光素酶基因luxAB的重组质粒导入大肠杆菌Top10中,利用酶切和核酸电泳检测荧光素酶基因的存在,利用SDS-PAGE检测荧光素酶表达的情况,然后对其表达条件进行优化。单因素试验结果表明:在培养基初始pH值6.0,癸醛体积分数1.25‰,接种量1%,IPTG浓度0.1mmol/L,装液量50mL/150mL,温度37℃条件下,重组菌的发光度最大,即表达量最高。正交试验结果表明:当pH6,IPTG浓度0.08mmol/L,接种量1.2%,温度36℃时重组大肠杆菌表达情况最好,发光度达1262.7。本研究中的重组大肠杆菌为在益生菌等食品微生物中的应用提供技术依据。
简介:目的:探讨菲律宾蛤仔酶解多肽的制备方法以及体外抗前列腺癌PC-3、DU-145细胞的活性。方法:以胰蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和中性蛋白酶4种蛋白酶为供选酶种,以酶解液中游离ANN含量和腥味值为测量指标,对酶种进行筛选,以获得最佳酶解工艺。选择分子质量3ku以下的酶解液分离纯化,所得多肽通过MTT法、AO/EB染色,做体外抗前列腺癌细胞试验。结果:胰蛋白酶酶解效果最佳,最佳酶解条件组合是pH8.0,温度50℃,酶解时间8h,加酶量1200u/g。分子质量3ku以下的酶解液能抑制PC-3、DU-145细胞生长,出现细胞凋亡的形态学改变。结论:由胰蛋白酶酶解所得多肽,在体外能抑制前列腺癌PC-3和DU-145细胞生长,诱导细胞凋亡。
简介:番茄红素是一种脂溶性的类胡萝卜素,具有很强的抗氧化活性,能够清除氧自由基,可防止脂蛋白和DNA氧化损伤,还具有抗衰老和降低肿瘤发生的作用,因此具有重要的研究价值。本文是以番茄皮渣为原料,乙酸乙酯为萃取剂,研究添加纤维素酶和果胶酶提取番茄红素的实验,分别考察了混和酶用量、酶解时间和酶解温度对番茄红素萃取效果的影响。结果表明,果胶酶对番茄红素的提取率起主要作用。最佳提取条件为A1B1C2,即混合酶用量为0.2mL/g,酶解时间为3h,酶解温度为35℃,得到的萃取液中番茄红素含量最高。C30-HPLC色谱图结果表明,经过酶处理的番茄红素有少部分反式异构体转变为顺式异构体,有助于番茄红素在人体内的吸收及协同效应,为番茄红素保健食品的开发提供试验依据。
简介:大豆秸秆是木聚糖含量较高的一种农业纤维废弃物,采用碱法考察了不同前处理条件(包括预煮温度,氢氧化钠浓度,料液比和浸提时间等)对大豆秸秆中不溶性木聚糖的提取率的影响。正交实验结果表明:当预煮温度80℃,碱液浓度15%,料液比1∶20,浸提时间4h时,大豆秸杆中不溶性木聚糖的提取率最高,为34.3%。低聚木糖是一种重要的功能性低聚糖,嗜热踝节菌木聚糖酶为低聚木糖水解用酶,通过单因素实验探究了在嗜热踝节菌木聚糖酶的催化作用下,大豆秸秆木聚糖水解的最佳条件,大豆秸秆在此方面研究尚属空白。实验结果显示:底物浓度为1.0%,酶添加量为30U/mL,温度设定为60℃,水解时间为240min的条件下低聚木糖的得率最高,为24.2%,在工业上具有较高的应用价值。