简介:摘要目的探讨人眼葡萄膜黑素瘤细胞系M23转染miR-137后对细胞增殖和迁移能力的影响及其分子机制的初探。方法采用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将miR-137mimics转染M23细胞,应用CCK-8法检测转染后细胞增殖变化,划痕实验检测细胞迁移能力变化。Westernblot检测PTEN、总AKT和磷酸化AKT蛋白表达。结果转染miR-137后,实验组的细胞增殖较对照组明显减低(t=-18.754,P=0.000;);在36h和72h时间点,实验组细胞的划痕愈合程度均明显低于对照;实验组的PTEN蛋白表达增加,p-AKT蛋白减低,AKT蛋白表达无明显变化。结论miR-137通过上调PTEN蛋白表达和减低AKT磷酸化活性从而抑制人眼葡萄膜黑素瘤细胞的增殖和迁移能力。
简介:目的研究miR-539对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的调控作用。方法通过荧光定量PCR检测非小细胞肺癌细胞系(A549、NCI-H358、NCI-H1650、NCI-H1299、HCC827)和正常人支气管上皮细胞(16HBE)中miR-539表达的差异;通过转染miR-539-mimics在NCI-H358细胞中上调miR-539的表达,并通过MTT和TUNEL法检测miR-539对非小细胞肺癌细胞(NCI-H358)增殖和凋亡的影响。结果与正常人支气管上皮细胞相比,非小细胞肺癌细胞中miR-539的表达显著降低(P〈0.01);与空白对照组和阴性对照组相比,过表达miR-539能显著降低非小细胞肺癌NCI-H358细胞的增殖能力并增加其对地塞米松诱导凋亡的敏感性(P〈0.01,P〈0.05)。结论miR-539能够抑制非小细胞肺癌细胞增殖并促进其凋亡,可作为非小细胞肺癌基因治疗的靶点。
简介:MicroRNAs是否定地在post-transcriptional水平调制基因表示的短规章的RNA,并且深深地涉及癌症的几种类型的致病。调查特定的miRNAs和他们的目标基因是否参予喉的癌的分子的致病,oligonucleotidemicroarrays被用来与正常纸巾相比在喉的癌纸巾估计microRNAs和mRNAs的微分表示侧面。oncogenicmiRNA,microRNA-21(miR-21),被发现是在喉的癌纸巾的upregulated。由特定的antisenseoligonucleotides的miR-21击倒而miR-21的overexpression提高了细胞的生长活动,由殖民地形成试金检测了,禁止了HEp-2细胞的增长潜力。miR-21抑制引起的房间数字减小由于G1-S阶段转变的控制的损失,而不是apoptosis的显著增加。随后,miR-21的新目标基因,BTG2,被发现是在喉的癌纸巾的downregulated。BTG2被知道充当一个平底锅房间周期管理者和肿瘤suppressor。这些调查结果显示miR-21的那异常表情可以由维持BTG2的底层贡献喉的癌的恶意的显型。oncogenicmiR-21和它的目标基因的鉴定,BTG2,为癌症诊断和治疗在喉的癌是潜在地珍贵的。
简介:目的:研究miR-200a的表达与人成釉细胞瘤之间的相关性。方法:应用RNAhybrid和miRanda软件预测β-catenin基因可能的靶向miRNA;选择30例人成釉细胞瘤标本和5例正常牙胚标本,应用实时荧光定量PCR方法检测标本中miR-200a的表达情况。结果:RNAhybrid和miRanda软件分别在β-cateninmRNA第68~96碱基和第69~94碱基位置预测到一个miR-200a结合位点。与正常牙胚组织标本相比,miR-200a在人成釉细胞瘤组织标本中的表达存在明显的下调,差异显著(P〈0.05)。结论:miR-200a的表达改变与人成釉细胞瘤相关,miR-200a可能为β-catenin的靶基因之一。
简介:摘要目的探讨miR-122与结直肠癌术后肝转移的关系。方法回顾性分析2008年1月至2014年1月中国人民解放军联勤保障部队第909医院收治的186例结直肠癌术后肝转移患者临床资料。患者均签署知情同意书,符合医学伦理学规定。其中男112例,女74例;年龄33~76岁,中位年龄52岁;左半结肠癌43例,右半结肠癌79例,直肠癌64例。采用qRT-PCR检测癌组织和癌旁组织中miR-122的相对表达量。两组miR-122相对表达量比较采用t检验。miR-122表达与术后肝转移时间关系采用线性相关分析。结果结直肠癌组织miR-122平均相对表达量为1.28±0.14,明显高于癌旁组织的0.83±0.09(t=124.00,P<0.05)。癌组织miR-122相对表达量与结直肠癌术后肝转移患者肿瘤直径、肿瘤分化、淋巴结转移相关(t=-7.17,4.16,-8.69;P<0.05)。结直肠癌术后肝转移时间为(23±9)个月。癌组织miR-122相对表达量与结直肠癌术后肝转移时间成负相关(r=-0.67,P<0.05)。结论结直肠癌组织miR-122高表达。miR-122表达量与术后肝转移时间成负相关,其表达量越高肝转移越早。
简介:摘要目的在胃癌组织中筛查参与调控EGFR和miR-7的lncRNA;探索lncRNA、miR-7和EGFR的调控网络作用机制;明确该信号网络在胃癌细胞侵袭转移中的调控作用。方法收集南华大学附属医院3年内经病理证实的胃癌标本200例,检测miR-7和EGFR表达水平改变;观察miR-7和EGFR表达水平与肿瘤分期、分化与侵袭转移的关系,两者之间表达的相关性;筛查参与调控miR-7和EGFR表达的lncRNA。结果观察组与对照组的EGFR蛋白表达阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。相比较对照组而言,观察组的miR-7表达阳性率缺失率均较高,组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结果显示,miR-7与EGFR在胃癌组织中的表达具有相关性,相关系数为0.587。结论lncRNA在恶性肿瘤组织中异常表达的特性,使其成为很好的肿瘤生物标志物,可在肿瘤早期诊断中发挥重要作用。
简介:摘要目的探讨血清miR-378与miR-335在2型糖尿病和糖尿病肾病患者中的表达差异及临床意义。方法选取2019年12月至2020年12月在本院收治的100例2型糖尿病(T2DM)患者,根据世界卫生组织T2DM和糖尿病肾病(DKD)的诊断标准将其分为T2DM组(42例)和DKD组(58例),同时选取同期30例健康体检者作为对照组。检测所有研究对象的血清miR-378与miR-335的表达水平。绘制出受试者工作特征(ROC)曲线评估miR-378与miR-335对T2DM和DKD的预测价值。结果与对照组比较,DKD组的舒张压(DBP)、收缩压(SBP)、空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、尿酸(UA)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、尿微量白蛋白(UMA)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)较高,而估算的肾小球滤过率(eGFR)、白蛋白(ALB)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)较低,T2DM组的FBG、HbA1c、UMA较高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与T2DM组比较,DKD组患者的SBP、Scr、BUN、UMA较高,而HbA1c、FBG、eGFR、ALB较低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。DKD组和T2DM组的血清miR-378、miR-335均低于对照组,DKD组的血清miR-378、miR-335均低于T2DM组(均P<0.05)。血清miR-378、miR-335水平与UMA呈负相关(r=-0.754、-0.736,P<0.001),miR-335水平与FBG负相关(r=-0.842,P<0.05)。logistic回归分析结果发现高UMA、低miR-378和miR-335水平是T2DM患者出现DKD的独立危险因素(P<0.05)。血清miR-378预测糖尿病患者出现DKD的ROC曲线下面积(AUC)为0.830(95%CI:0.741~0.969,P<0.05),灵敏度为75%,特异度为96%。miR-335预测糖尿病患者出现DKD的AUC为0.751(95%CI:0.668~0.847,P<0.05),灵敏度为77%,特异度为71%。miR-378、miR-335联合检测在预测糖尿病肾病患者出现DKD的AUC为0.932(95%CI:0.871~0.985,P<0.05),灵敏度为85%,特异度为97%。结论血清miR-378、miR-335有作为无创性诊断DKD新标志物的潜力。
简介:目的:构建miR-15a-5p和miR-16-5p的荧光素酶报告载体,利用此载体分析并验证miR-15a-5p和miR-16-5p与CCND1基因3'-UTR区域的确切结合位点,探讨miR-15a-5p和miR-16-5p与CCND1基因的相互作用关系。方法:通过Pubmed和miRBase数据库分别寻找到CCND1基因3'-UTR区域碱基序列和miR-15a-5p、miR-16-5p的碱基序列。找出理论结合位点后,构建荧光素酶报告载体,并用荧光素酶报告基因方法验证miR-15a-5p和miR-16-5p与CCND1基因之间的作用关系。结果:通过基因测序表明,本实验成功构建了CCND1a/Ma和CCND1b/Mb荧光素酶报告基因表达载体。将上述载体应用于荧光素酶报告基因实验,结果发现CCND1b组的荧光素酶表达强度显著降低,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论:miR-15a-5p和miR-16-5p与CCND1基因的3'-UTR区域存在结合位点,其具体结合位置在CCND1b区。这在理论上意味着miR-15a-5p和miR-16-5p可以抑制CCND1基因的表达。
简介:摘要目的筛选睑板腺癌(MGC)差异表达微小RNA(miRNA)并探究微小RNA-3907(miR-3907)对MGC增殖和迁移的影响及作用机制。方法实验研究。收集2011年7月至2019年1月于天津医科大学眼科医院经组织病理学确诊的MGC患者的癌组织样本及癌旁组织样本。应用miRNA芯片对其中5份MGC与癌旁组织差异表达的miRNA进行筛选。选取MGC中表达显著上调的miR-3907为观察对象,通过生物数据库和双荧光素酶实验预测并鉴定miR-3907靶基因。采用免疫组织化学染色法测定18份MGC组织及6份癌旁组织样本中靶基因的蛋白表达水平。在培养的MGC原代细胞中分别进行miR-3907过表达、miR-3907敲减、靶基因敲减、miR-3907敲减+靶基因敲减转染并分别设组,采用荧光定量PCR和Western印迹法检测转染后各基因mRNA和蛋白的表达水平,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和划痕实验评估转染后MGC细胞的增殖和迁移能力,并进行比较。统计学方法主要为Fisher确切概率检验、独立样本t检验、双因素重复测量方差分析。结果与癌旁组织样本相比,MGC样本共筛选出表达上调的miRNA 22个,表达下调的miRNA 5个,其中miR-3907表达显著上调。生信数据库与双荧光素酶报告显示血小板凝血蛋白酶1(THBS1)为miR-3907的下游靶基因。癌旁组织中THBS1蛋白阳性表达率(6/6)显著高于MGC组织(5/18),差异有统计学意义(P=0.003)。与对照组比较,miR-3907过表达组48、72 h细胞增殖能力显著增强(F=3.70、2.65);24 h后细胞迁移率显著增高(54.6%±3.4%与34.2%±0.6%比较;t=8.34);miR-3907敲减组24、48、72 h细胞增殖能力降低(F=3.10、2.17、3.09)、24 h细胞迁移率显著降低(40.8%±2.8%与69.7%±2.7%比较;t=10.42);THBS1敲减组24、48和72 h细胞增殖能力增强(F=3.84、3.79、2.24)、24 h后细胞迁移率显著增加(82.5%±1.9%与37.6%±5.1%比较;t=11.74);miR-3907敲减+THBS1敲减组24、48 h细胞增殖能力增强(F=3.97、3.31)、24 h细胞迁移率显著增高(56.9%±2.2%与41.9%±4.3%比较;t=3.53);差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论MGC与癌旁组织之间存在差异表达miRNA,其可能与MGC发生和发展有关;其中差异显著的miR-3907可以促进MGC增殖和迁移,并主要通过抑制THBS1表达发挥作用。
简介:急性呼吸窘迫综合征(acuterespiratorydistresssyndrome,ARDS)起病急骤,发展迅猛,预后极差,病死率高达45%以上,现已成为临床危重病学研究的热点和难点。氧疗是临床治疗ARDS的主要措施,是纠正顽固性低氧血症的基本手段,然而,机体长时间接触高氧容易引起高氧性急性肺损伤(hyperoxia-inducedacutelunginjury,HALI)。导致病情进一步加重,严重威胁患者生命。前期研究表明肺泡Ⅱ型上皮细胞(typellalveola,epithelialcell,AEC-Ⅱ)凋亡与HAL1、ARDS、COPD等多种肺疾病相关,通过抑制AEC-Ⅱ可有效减轻肺疾病发病程度。目前抗细胞凋亡方法缺乏有效性及特异性。miRNAte:术为解决细胞凋亡提供新思路,研究表明在AEC-Ⅱ凋亡过程中miR-21—5p下调,上调AEC-Ⅱ细胞内表达,可明显降低AEC—Ⅱ凋亡率。因此,研究miR-21抗AEC—Ⅱ凋亡机制可为ARDS等肺疾病的临床防治提供理论依据及新策略。本文将就miR-21抗AEC—Ⅱ凋亡机制的研究现状作一综述。
简介:miRNA-183family,innormalbiology,isexpressedinaharmoniousandstablemannerintheneurosensoryorgansandcells.StudieshavealsoshownthatmiRNA-183family,indifferentpathways,affectstheneurosensorydevelopment,maintenance,survivalandfunction.Inaddition,ithaspotentialneuroprotectiveeffectsinresponsetoneurosensorydestructivestimulations.miRNA-96mutationcauseshereditarydeafnessinhumansandmice,andthereforeaffectstheinnerearactivityanditsmaintenance.CertainroleshavebeenidentifiedformiR-96inthemaintenanceandfunctionoftheinnerear.Thecomparisonofthetargetgenesoffamily-183intranscriptomesofnewbornandadulthaircellsshowsthathundredsoftargetgenesinthisfamilymayaffectdevelopmentandmaintenanceoftheears.IdentifyingthegenesthatareregulatedbymiRNA-183familyprovidesresearcherswithimportantinformationaboutthecomplexdevelopmentandenvironmentalregulationoftheinnerear,andcanoffernewapproachestothemaintenanceandregenerationofhaircellsandauditorynerve.
简介:摘要目的探讨胆管癌患者中microRNA(miR)-181b的表达和临床意义。方法回顾性分析2008年1月至2013年1月中国人民解放军联勤保障部队第九OO医院收治的100例胆管癌患者临床资料(胆管癌组),同时选取100例健康志愿者作为对照组。患者均签署知情同意书,符合医学伦理学规定。其中胆管癌组男61例,女39例;年龄33~80岁,中位年龄56岁。对照组男66例,女34例;年龄30~80岁,中位年龄54岁。采用RT-PCR检测血清和组织样本中miR-181b的表达量,分析miR-181b与患者临床病理特征间的关系及其在诊断和预后中价值。根据胆管癌组癌组织中miR-181b表达量的平均值,将胆管癌组分为miR-181b高表达组和miR-181b低表达组。两组miR-181b比较采用t检验。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,生存分析采用Log-rank检验。结果胆管癌组患者血清miR-181b表达量1.24±0.24,明显高于对照组的0.61±0.13(t=66.59,P<0.05)。胆管癌组癌组织miR-181b的表达量2.31±0.14,明显高于癌旁组织的1.17±0.11(t=34.53,P<0.05)。miR-181b表达与肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移相关(t=-2.10,-2.61,-4.86;P<0.05)。miR-181b低表达组和高表达组3年生存率分别为37.50%、11.76%,差异有统计学意义(χ2=9.007,P<0.05)。结论miR-181b在胆管癌患者中呈高表达,且与分期、预后相关,高表达患者预后较差。
简介:摘要目的为了观察同型半胱氨酸致肾脏足细胞损伤的机制,进而为同型半胱氨酸致肾脏损伤的分子机制提供理论依据。方法培养小鼠肾脏足细胞后,并用0,10,20,60,80μmol/L同型半胱氨酸干预,采用MTT方法检测不同浓度同型半胱氨酸干预下足细胞的抑制率。提取足细胞RNA,进行逆转录后采用qRT-PCR的方法检测肾脏足细胞miR-92amRNA的表达。结果与正常对照组相比,同型半胱氨酸浓度为10、20、60和80μmol/L足细胞存活率下降,并且呈浓度依赖性。qRT-PCR结果显示在不同浓度的同型半胱氨酸作用下,miR-92amRNA表达随着同型半胱氨酸浓度的增高,表达增多。结论miR-92a可能参与了同型半胱氨酸导致的肾脏足细胞损伤。
简介:摘要目的探讨miR-106a模拟体对OA大鼠的影响。方法将24只S-D雌性大鼠按随机数字表法分为3组,分为假手术组,OA组,miR-106a模拟体治疗组。术后8周,处死所有大鼠,从每只大鼠的胫骨内侧平台分离关节软骨组织。组织病理学观察软骨细胞形态变化、变性数量;检测炎症细胞因子(IL-1、IL-6、TNF-β)水平、凋亡受体p65、DR6蛋白的表达、miR-106aRNA的表达。采用单因素方差分析或LSD-t检验。结果组织病理染色结果显示,假手术组大鼠关节面及滑膜结构完整,软骨细胞呈水平排列,关节软骨边缘光滑;OA组关节软骨边缘严重破坏,软骨细胞排列紊乱;miR-106a模拟体治疗组大鼠软骨结构趋于正常,偶见不均,关节软骨表面欠光滑。与假手术组相比,OA大鼠软骨中miR-106a的表达明显减少(F=918.02,P<0.01);炎症介质(IL-1、IL-6、TNF-β)在OA组软骨匀浆中的表达也明显增强(F=41 914.86,P<0.01;F=6 485.16,P<0.01;F=8 873.31,P<0.01);OA组的DR6、p65蛋白表达水平较高(F=2 319.338,P<0.01;F=1 253.882,P<0.01)。与OA组相比,miR-106a模拟体治疗组炎症介质(IL-1、IL-6、TNF-β)明显降低(1.270±0.020,6.040±0.170,5.690±0.080),DR6、p65蛋白2种蛋白表达均减轻(1.53±0.09,0.41±0.04)。结论miR-106a模拟体可减轻OA大鼠的炎症改变,减少软骨细胞的退行性改变。
简介:目的:研究miR-152分子对NK细胞杀伤JEG-3细胞效应的影响。方法:在滋养细胞肿瘤细胞系JEG-3细胞中分别转染pre-miR-152(实验组),Cy3标记的pre-miRNA-control(阴性对照),空白对照(NC)为未转染的JEG-3细胞。转染48h进行NK细胞的细胞毒测定,观察各组NK细胞对JEG-3细胞的杀伤效应。结果:与对照组相比,实验组NK细胞对JEG-3细胞的平均杀伤率显著增高(P〈0.05),且随着效靶比的增高,杀伤率也增大。空白对照组与阴性对照组之间的NK细胞杀伤能力无显著差异(P〉0.05)。结论:miR-152可以提高NK细胞对滋养细胞的杀伤作用。