麒麟丸和维生素 E对少弱精子症患者精液质量及体外胚胎发育的影响

麒麟丸和维生素 E对少弱精子症患者精液质量及体外胚胎发育的影响

易疆莺 $, 郭微 $, 程强军 , 杨付桥 , 李瑞文 *

(成都市妇女儿童中心医院生殖与不孕研究所，四川成都 610091)

摘要：目的 观察中药麒麟丸及维生素E对男性少弱精子症不育患者精液质量的改善和助孕疗效。方法 选择2015年9月至2017年8月在我院进行常规体外受精~胚胎移植的少弱精子症不育患者237例，随机分为对照组，维生素E组和中药组，对照组患者服用安慰剂，VE组服用维生素E胶丸，中药组服用麒麟丸，12周后观察三组患者治疗前后精液常规指标（精子密度、活力、形态正常率）和精液中活性氧（ROS）水平，受精后胚胎的发育及妊娠情况。结果 治疗组患者治疗后精子密度、活力、精子形态正常率较对照组均提高， ROS水平明显下降，麒麟丸组疗效更明显；在受精率、种植率和妊娠率的比较上，中药麒麟丸组显著高于维生素E组和对照组（P<0.05）。结论 中药麒麟丸和维生素E均能改善少弱精子症患者精液质量，能够降低精液中ROS水平，增加形态正常精子的百分率及受精能力，提高体外受精胚胎移植中胚胎的发育潜能，麒麟丸疗效更加明显，且该药安全有效，无副作用，为治疗少弱精患者、提高其体外受精-胚胎移植的成功率提供一种新的治疗思路。

关键词：麒麟丸；维生素E；少弱精子症；精液质量；胚胎发育

Effect of QiLin Pill and Vitamin E on sperm Quality and Embryo Development from oligoasthenozoospermia patients in Vitro

Yi Jiangying^$, Guo Wei^$, Cheng Qiangjun, Yang Fuqiao, Li Ruiwen*

(Reproductionand Infertility Institute of Chengdu Woman –Children Central Hospital, Chengdu, Sichuan, 610051)

Abstract Objective to observe the effect of qilin pill and vitamin E on improving semen quality and assisting pregnancy in male infertility patients with oligospermia. Method to choose between September 2015 and August 2017 in our hospital for conventional in vitro fertilization - embryo transfer less weak sperm sterility patient 237 cases, randomly pided into control group, vitamin E group and Chinese traditional medicine group, control group patients taking placebo, VE group take vitamin E capsule, Chinese traditional medicine group taking kirin pill, 12 weeks after observing three groups before and after treatment in patients with semen routine index (sperm density, vigor, shape ZhengChangLv) and semen of active oxygen (ROS) level, after fertilization embryo development and pregnancy. Results after treatment, the sperm density, motility and normal sperm morphology rate in the treatment group were all increased compared with those in the control group. In comparison of fertilization rate, planting rate and pregnancy rate, qilin pill group was significantly higher than vitamin E group and control group (P<0.05).

conclusion Chinese medicine pills and vitamin E can improve sperm and weak sperm quality, less able to reduce the semen of ROS level, increase the percentage of normal sperm morphology and fertilization ability, improve the developmental potential of embryos in vitro fertilization embryo transfer, kirin pill curative effect more obvious, and the drug is safe and effective, no side effect, for the treatment of patients with a little weak sperm, improve the success rate of in vitro fertilization and embryo transplantation provides a new thought of treatment.

Key words QiLin Pill；Vitamin E; Oligoasthenozoospermia; Sperm quality; Embryo development

体外受精（IVF）及胚胎移植（ET）是目前治疗不孕症的主要手段。如何提高精子的质量，从而获得体外发育潜能高的胚胎成为关注的焦点。附属性腺感染会造成精液中过氧化物酶阳性的白细胞增多，进而导致活性氧自由基（ROS）增加。常规的体外培养过程亦会导致ROS的生成增加，而ROS是强氧化剂，能破坏一系列的大分子物质，损伤精子膜和精子DNA，对精子的活动力产生不良影响，导致精子DNA片段化比例升高，降低精子的受精能力、胚胎质量及囊胚的形成率甚至导致胚胎的凋亡[1]。麒麟丸含多种纯中药制剂，具有提高过氧化物歧化酶（SOD）活性，通过清除机体内过多的ROS来降低ROS对精子损伤的作用[2]。维生素E(VE)是动物细胞中有效的脂溶性抗氧化物质，能够降低自由基诱导的DNA损伤，保护细胞不受氧化应激作用。本实验通过口服麒麟丸及维生素E两种方式，来阐明麒麟丸和维生素E对少弱精症患者精液ROS水平、精子质量及体外胚胎发育方面的影响。

对象与方法

一、试验设计

（一）试验方法 本研究采用开放性，自身前后对照的临床研究。

（二）用药方案 按组别分别服用麒麟丸（广东太安堂药业股份有限公司，国药准字Z10930034）6g，每天三次和维生素E 100mg，每天2次，共3个月，治疗后复查精液情况及比较随后胚胎的发育情况，评估药物的疗效。

二、病例选择

选择2015年9月至2017年8月在成都市妇女儿童中心医院生殖与不孕研究所由男方精子因素行体外受精~胚胎移植治疗的不孕症患者，纳入标准：精子密度<20x10⁶/mL，a+b级精子<30%或a级精子<10%，且精子活动率<40%。符合上述标准者共237例。随机均分为对照组(79例)、维生素E组(79例)、中药组（79例）。三组患者在平均年龄均为（28.7±3.6岁）、不孕年限（3.2±1.4年）、平均获卵数（13.2±4.9个）、治疗前精液指标等方面，差异无统计学意义(P>0.05)。

三、方法

（一）治疗方法 对照组服用安慰剂，维生素E组服用维生素E 100mg，每天2次，麒麟丸组服用麒麟丸每次6g，每天3次，三组均连续服用12周。

（二）超排卵 三组患者均采用长方案促排卵，月经黄体期(约月经周期第21天)使用促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)进行垂体降调节，在月经的第2~3天测雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)及B超监测基础窦卵泡，据激素水平及卵泡情况使用促排卵药物，当卵泡直径达到18mm注射绒促性素(HCG)，36 h后在B超引导下取卵。

（三）精子的准备和评估 三组精液样品以手淫的方法收集于无菌的容器内。液化后，对精液中精子密度、活力及精子的形态进行评估。根据精子的密度与活力采用梯度离心(300g×8 min)或直接上游等方法进行处理。

（四）精液中ROS水平测定 参考张慧琴等^[3]采用化学发光法直接对精液ROS含量进行定量测定。取400µL液化精液于一次性照度计容器内，加入4µL鲁米诺储存液（DMSO配制成25mmol/L）和8µL辣根过氧化物酶（HRP，240U/mg），充分反应5 min后，于25℃条件下检测化学发光信号10s，获取精子ROS检测的Integral值（RLU/s）。

（五）ICSI操作 三组患者进行ICSI时，将洗涤好备用的精子加入5µL 10％的聚乙烯吡咯烷酮（pvp）微滴中，注射的卵母细胞置于5µL10 %HSA的胚胎操作液（M-HTF）微滴中，上面覆盖石蜡油，以注射针吸取单个形态正常的活动精子，于3点的位置将精子注入卵母细胞后缓慢退出注射针。以此方法注射下一个。

四、数据统计分析

实验数据以均值±标准差（ ±s）表示。采用SPSS18.0统计软件进行显著性检验。P<0.05为差异有统计学意义。

结果

一、两组间ROS水平及精子质量比较

分析发现，中药麒麟丸组在精子浓度，a级精子百分率，a+b级精子百分率，正常形态精子百分率等方面均高于维生素E组和治疗前(P<0.05)；中药组精液中ROS水平较维生素E组和治疗前亦明显降低 (P<0.05)（表1）。

表1治疗前后精液参数的比较

维生素E组 麒麟丸组

治疗前 治疗后 治疗前 治疗后

精子浓度(10⁶/ml) 14.12±4.35^a 20.08±4.89^b 14.01±4.51^a 25.17±5.02^c

a级精子(%) 7.89±2.32^a 14.18±6.06^b 7.31±1.40^a 17.30±7.72^c

(a+b)级精子(%) 10.13±2.32^a 19.88±5.04^b 10.42±2.51^a 22.86±9.03^c

正常精子(%) 10.89±4.07^a 14.35±5.07^b 10.41±4.21^a 21.86±6.07^c

ROS 浓度 702.2±210.5^a 512.3±161.5^b 695.4±212.7^a 206.6±113.3^c

[注]：同行不同字母表示差异显著（p<0.05）.

二、两组胚胎体外发育及妊娠率比较

比较治疗后精子形成的胚胎体外发育及妊娠率发现，中药麒麟丸组与维生素E组和对照组（安慰剂）相比，其受精率、种植率和妊娠率都提高了(P<0.05)，维生素E组较对照组相比，各指标也均有提高，但差异不显著(P>0.05)（表2）。

表2两组胚胎发育及妊娠率比较

对照组 维生素E组 麒麟丸组

周期数(n) 79 79 79

受精率(%) 72.50^a 75.67^a 82.78 ^b

卵裂率(%) 94.11^a 96.25^a 98.35^a

优胚率(%) 41.32^a 42.29^a 43.32^a

种植率(%) 24.34^a 27.50^a 34.21^b

妊娠率(%) 41.26^a 44.30^a 50.52^b

[注]：同行不同字母表示差异显著（p<0.05）.

讨论

ROS过多会引起三磷酸腺苷的耗竭，从而导致精子的活动力降低[4]。一般临床上多采用具有抗氧化作用的维生素E、维生素C、辅酶Q等来治疗男性少弱精子症，但其疗效一般。本研究采用中药麒麟丸进行治疗，并与维生素E进行对比，探讨了麒麟丸在改善男性精子质量及降低精液ROS水平方面的作用，并观察其对随后合子胚胎体外发育及妊娠率的影响。结果表明二者对精子活力的提高及精液中ROS水平的降低、体外胚胎发育潜能及妊娠率的提高均有一定的作用，且中药组麒麟丸疗效更加明显。研究表明，麒麟丸含有淫羊藿、制何首乌、菟丝子、枸杞子、覆盆子、黄芪、丹参、锁阳等多种有益于精子发生及抗氧化的成份。可以提高精子的活动力，抗菌消炎，补气升阳；维生素E、枸杞子中的枸杞多糖和黄芪具有明显的抗氧化作用，可阻止过度累积的ROS对精子的损伤[5-6]。本实验发现组患者服用中药麒麟丸后，精子各项指标均高于维生素E组和治疗前，精液中ROS的水平则明显降低。同时，我们比较了经治疗后的精子受精后相应胚胎的体外发育潜能及妊娠率，发现中药麒麟丸组与维生素E组和对照组（安慰剂）相比，其胚胎的受精率、种植率和妊娠率都提高了，维生素E组较对照组相比，各指标也均有提高，但差异不显著，见表2，这几项指标的提高可能是由于中药麒麟丸和维生素E的治疗改善了男方精子的质量，降低了精液ROS的水平，从而减少了因ROS的过度积累引起的精子基因组及线粒体发生高频率单股和双股DNA断裂损伤的比例[7]，因而受精后胚胎的质量提高，种植率及妊娠率亦相应升高了。 7 综上所述 本实验初步研究表明，中药麒麟丸治疗少弱精症患者有较好疗效，同时通过所含成分的抗氧化作用，显著降低了精液中ROS的水平，提高了精子的质量，相应的提高了受精后胚胎的发育潜力，且该药安全有效，无副作用，为治疗少弱精患者、提高其体外受精-胚胎移植的成功率提供一种新的治疗思路。但本实验由于样本量有限，还需要大规模、多中心的随机对照研究以证实其长期疗效。

参考文献：

[1]李晓莉,王斌,刘嘉麟,等.枸杞多糖对小鼠耐缺氧效应的研究[J].华中农业大学学报,1999(3):283-285. [2]高淑红,苏珍枝,肖学凤,等.制首乌化学成分及药理作用研究进展.山西中医学院学报2012(2):74-77. [3]张慧琴,赵洪鑫,张爱军,等.补肾生精汤与卵胞浆内单精子注射治疗男性严重少、弱精子症不育的临床观察[J].中国中西医结合杂志2007(6):972-975. [4]商学军,郭军,陈磊,等，麒麟丸治疗少弱精子症的多中心临床疗效观察[J].中华男科学杂志2011(12):1139-1142. [5]章振保,杨庆涛.淫羊藿苷抗大鼠雄激素部分缺乏的实验研究[J].中国男科学杂志,2006(3):47-50. [6]苏格尔,常艳旭.锁阳的化学成份及药理作用研究概况[J].中国民族医药杂志,2005(6):46-49. [7]龚琴琴,张昌军.活性氧与精子DNA损伤的保护[J].中国性科学,2012(4):3-5.