宜昌地区结核分枝杆菌耐药状况的调查

宜昌地区结核分枝杆菌耐药状况的调查

李鹏刘江美谭超

李鹏刘江美谭超（宜昌市中心人民医院湖北宜昌443002）

【摘要】目的分析结核分枝杆菌对一线和二线抗结核药物的耐药水平，掌握耐多药结核病流行情况。方法2010～2013年3年内宜昌市中心医院收集的3107株临床分枝杆菌，采用绝对浓度法在改良罗氏培养基上检测其对4种一线抗结核药和5种二线抗结核药的敏感性。结果结核复合群2952株(95%),非结核分枝杆菌155株(5%)。3107株分枝杆菌对9种抗结核药的耐药率为RIF(48.50%)、INH(45.52%)、SM(31.85%)、EB(19.58%)、DIP(18.56%)、LVX(16.24%)、PAS(9.78%)、AMK(7.61%)、CPM(6.29%)。与2010年的报道相比,对INH、RIF、EB、LVX、DIP的耐药率均明显增高,P<0.01；对SM、CPM的耐药率增高无显著性差异，P>0.05；而对AMK和PAS的耐药率明显降低，P<0.01。2952株结核杆菌中有耐多药结核菌(MDR2TB)和严重耐多药结核菌(XDR2TB)分别为1039和90株，分别占结核杆菌总数的35.19%和3.04%。其中MDR2TB数比2010年报道的32.02%略高。结论结核杆菌对抗结核药耐药水平较高且有增高的趋势，MDR2TB和XDR2TB流行严重，有必要加强抗结核药物耐药性的监测，并采取有效的措施控制耐药菌的传播。

【关键词】结核杆菌耐药耐多药结核

【中图分类号】R195【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2013）15-0382-02

中国是全球22个结核病高负担国家之一，肺结核病人数居全球第二位。近年来,结核病的发病率和死亡率在我国27种法定传染病中均占据首位。[1]由于人口基数大,流动人口增多,耐多药结核菌(MDR2TB)和严重耐多药结核菌(XDR2TB)流行以及结核菌和HIV的双重感染,使结核病疫情日益严重。本研究回顾分宜昌地区的结核菌耐药状况,为结核病防治提供依据。

1材料与方法

1.1菌株

2010～2013年从临床标本中分离的抗酸分枝杆菌3107株。结核杆菌标准菌株H37RV购自中国药品生物制品检定所。

1.2主要试剂

硫酸链霉素(SM)粉针剂(华北制药公司);异烟肼(INH)注射液(天津金耀氨基酸公司);利福平(RIF)纯品(上海信谊制药厂);盐酸乙胺丁醇(EB)纯品(上海信谊制药总厂);阿米卡星(AMK)注射液(上海信谊金朱药业公司);卷曲霉素(CPM)粉针剂(广西南宁中科药业公司);对氨基水杨酸钠(PAS)粉针剂(哈药集团制药总厂);左旋氧氟沙星(LVX)注射液(扬子江药业公司);对氨基水杨酸异烟肼(DIP)纯品(重庆华邦制药公司)。对硝基苯甲酸(PNB)(上海试剂一厂);噻吩222羧酸酰肼(TCH,Sigma公司)。药敏试验及菌种鉴定培养基按照《结核病诊断细菌学检验规程》[2]自制。

1.3含药培养基制备

按规程提供配方制备改良罗氏培养基,灭菌前分别加入各种药物,每种药物均设高、低两个浓度,各药浓度分别为:SM10μg/ml、100μg/ml;INH1μg/ml、10μg/ml;EB5μg/ml、50μg/ml;RIF50μg/ml、250μg/ml;AMK1μg/ml、10μg/ml;PAS1μg/ml、10μg/ml;CPM1μg/ml、10μg/ml;LVX2μg/ml、20μg/ml;DIP1μg/ml、10μg/ml;PNB最终浓度为500μg/ml;TCH最终浓度为5μg/ml。同时,留出一部分改良罗氏培养基用作空白对照。将各培养基分装入大试管内,每管5ml,平放在血清凝固器内90℃灭菌90min,制成斜面,冷却后取出置35℃培养24h,无菌生长方可使用。

1.4菌悬液制备

将2～3周菌龄的分枝杆菌用接种环小心取出,置于含0.5%Tween80的无菌试管内,用无菌玻璃棒小心研磨成乳酪状,用无菌生理盐水稀释,并与麦氏比浊管比浊,配成湿重为1mg/ml的菌悬液备用。

1.5接种方法

将制备好的1mg/ml菌悬液作1∶100倍稀释后,各吸取0.1ml分别接种于每支含药培养基的斜面上,各管接种量为10-3mg，同样接种2支不含药的改良罗氏培养基作对照。以标准菌株H37RV做培养基质控。接种完毕后，置35℃温箱内培养,4周观察结果。

1.6药敏试验报告

以无药对照管生长,含药高、低浓度管均不生长为敏感；含药低浓度管生长、高浓度管不生长为中度耐药;高、低浓度管均生长为高度耐药(本试验所指的耐药包括中度耐药和高度耐药)，H37RV株须各药均敏感。

1.7菌种鉴定报告

对照管生长,PNB管、TCH管均不生长为牛结核杆菌；对照管、TCH管生长,PNB管不生长，为人型结核菌;对照管、PNB管、TCH管均生长为非结核分枝杆菌。

1.8MDR2TB

指至少对INH、RIF耐药的结核杆菌。XDR2TB为在MDR2TB的基础上再增加对LVX耐药及对CPM或AMK任一种耐药。

1.9统计学分析

两样本率的比较用u检验。

2结果

2.13107株临床分离菌株对各种药物的耐药率与本科2010年报道[3]的耐药率比较,除SM、CPM无明显差异外,AMK和PAS显著降低,其余的均显著增高。见表1。

表1本科本次研究与2003年报道临床分离菌株耐药率(%)的比较

2.2在3107株临床菌株中,经鉴定,结核复合群为2952株(95.0%),非结核分枝杆菌为155株(5.0%)。

2.3在3107株结核杆菌中,MDR2TB和XDR2TB分别为1039和90株,分别占35.19%和3.04%。其中MDR2TB数比2010年报道的32.02%略高,但无显著性差异(u=1.76,P>0.05)。

3讨论

20世纪90年代结核病开始在全球范围内死灰复燃，引起了人们对结核病防治的高度重视。结核病的耐药现象，尤其是耐多药结核病已成为结核病控制工作的三大挑战之一。2007～2008年全国结核病耐药性基线调查显示，全国每年有耐多药结核病患者12万例，广泛耐药患者9000余例[4]。对结核病患者结核杆菌耐药情况的分析可以为结核病预防控制提供重要的科学依据。本次研究分析了2010～2013年3年内本院3107株分枝杆菌临床分离株的药敏及菌型

鉴定情况。结果显示：结核复合群占95%，非结核分枝杆菌占5%；平均耐药率为22.66%,较2010年本院报道的略高。其中对一线药INH、RIF、EB及二线药LVX、DIP耐药率增高明显，而对AMK、PAS耐药率明显降低[5]。

本次研究共检测到MDR2TB1573株,占结核复合群的35.19%,仅较2010年的32.02%略高,但因2010年的统计中未将非结核分枝杆菌剔除，而后者绝大多数均为INH、RIF耐药，故实际上2010年的MDR2TB分离率应小于32.02%，即本次MDR2TB的增加率应更高。本次研究还分离到XDR2TB136株，占结核复合群的3.04%[6]。

世界卫生组织严重耐多药结核专题组在2006年10月明确了XDR2TB的定义,并呼吁尽快开展临床监测研究,以便对XDR2TB这一结核菌的极端耐药形式有更多的了解。对XDR2TB疫情的监测,依赖于实验室细菌学诊断，且必须同时开展一线药和二线药的敏感性试验[7]。但目前使用的二线药物的敏感性试验尚未标准化，这是一个亟待解决的问题。

参考文献

[1]中华医学会结核病学分会.全国耐药结核病学术研讨会纪要[J].中华结核和呼吸杂志,2000,23:79-81

[2]中国防痨协会.结核病诊断细菌学检验规程[J].中国防痨杂志,1996,18(2):80285.

[3]施旭东,王雷.10种抗结核药物对结核分枝杆菌的体外抑菌试验结果分析[J].实用医技杂志,2003,10(3):1742175.

[4]全国结核病流行病学抽样调查技术指导组.2000年全国结核病流行病学抽样调查报告.中国防痨杂志,2002,(02):99.

[5]周瑛.150例耐多药肺结核的成因分析和治疗探讨.安徽医学,2005,26(5):387-388.

[6]何海波,王晓萌,朱一凡.1103例肺结核细菌耐药情况分析.浙江预防医学,2003,15(11):17-18.

[7]邓云峰,王俊玲,王燕,等.严重耐多药结核病的实验室监测[J].中华检验医学杂志,2008,31(8):8762879.