转筋草抗乳腺癌细胞迁移化学成分的实验研究

转筋草抗乳腺癌细胞迁移化学成分的实验研究

钱朱萍

钱朱萍

(上海复旦大学附属中山医院青浦分院201700)

【摘要】目的：分析转筋草抗肿瘤迁移化学成分。方法：采用多种色谱法分离纯化转筋草提取物活性部分，经趋化实验与伤口愈合实验评价单体化合物抗肿瘤迁移活性。结果：浓度10μg?mL-1时，2、5化合物趋化抑制率分别为74.2%、82.6%。结论：2、5化合物具有抗肿瘤迁移活性。

【关键词】转筋草；抗肿瘤迁移活性；化学成分

【中图分类号】R737.9【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）26-0390-02

恶性肿瘤细胞经原发肿瘤散播到其他组织，进而产生继发性肿瘤的特征称为转移，是导致患者死亡重要原因。在迁移过程中，细胞趋化有着重要作用。本文研究示转筋草能抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231趋化运动[1-2]。

1材料与方法

1.1材料

ALDRICH公司氘代试剂；青岛海洋化工厂薄层色谱用硅胶、柱色谱；紫外可见分光光度计（HITACHIUV-3310型）；凝胶柱色谱（ToyopearlHW-40C，Tosoh）；制备HPLC色谱柱；液质联用色谱仪（Alliance2695，QuattroMicroESI）；JASCO半制备高效液相色谱仪；核磁共振仪（BrukerAV400instrument）。

人乳腺癌细胞MDA-MB-231（上海纪宁试剂有限公司）；Millipore公司NMM1604793HuPlasmaFibronectin；Sigma公司MTT；Millipore公司CBL417FEGF；Hyclone公司NUC0153胎牛血清；B600低速自动平衡离心机；Model680全自动酶标仪；Hyclone公司NUL0219H-DMEM培养液；苏州净化设备有限公司SW-CJ-2G超净工作台；OlympusCKX41倒置显微镜；HealForce公司HF160WCO2细胞培养箱。本院中医科提供转筋草。

1.2方法

1.2.1提取分离

粉碎5kg自然干燥转筋草，加6倍95%乙醇，3次加热回流提取，6h每次。减压浓缩提取液，获取700g浸膏，加水混悬。分别取360g正丁醇、88g乙酸乙醇、101g石油醚提取物，转筋草水层部分，取各层提取物行肿瘤转移活性筛选，对乳腺癌细胞MDA-MB-231趋化运动抑制率分别为65.4%、70.7%、31.3%、48.3%。取有较高活性乙酸乙酯行后续试验。

1.2.2细胞趋化实验

选择对数生长期的乳腺癌细胞MDA-MB-231于6孔板接种，37℃5%的CO2培养箱，24h，在细胞贴壁后加入样品，放置到培养箱内培养24h。收集各孔细胞悬液，2次PBS洗细胞，0.25%胰酶完全消化后，离心收集，0.1%BM内重悬，5min1300r?min-1离心后，除去血清，用0.1%BM将细胞密度调节到5×105个?mL-1。冰盒中调配EGF趋化因子，于趋化小室下室30μL/孔，包被完成膜光面朝下并且毛面朝轻在下室上铺好，固定装置，细胞悬液加于上室50μL/孔。样品浓度每个加3孔，3.5h培养后取出，并未趋化细胞刮去，染色固定，显微镜计数。趋化抑制率=（1-样品处理细胞于趋化因子作用下趋化细胞数/正常细胞于趋化因子作用下趋化细胞数）×100%。

1.2.3MTT法

选择对数生长期乳腺癌细胞MDA-MB-231进行试验。参照文献[3]MTT法检测各化合物抑制肿瘤细胞增殖作用。抑制率=[1-（加药组OD值）/空白组OD值]×100%。

2结果

2.1结构鉴定

鉴定结果:化合物1为粉蕊黄杨二醇A；2为（＋）-（20S）-20-dimethylamino-3-（3α-methylsenecioylamino）-5α-pregn-12β-ol；3为2，4-二羟基苯乙酮；4为香草酸；5为epipachysamineD。

2.2化合物对乳腺癌细胞MDA-MB-231趋化运动抑制

趋化因子诱导下，肿瘤细胞经变形运动穿过Transwell小室上下腔室8μm孔径滤膜，在筛选药物过程中，经衡量药物作用肿瘤细胞以及空白组肿瘤细胞穿膜细胞数差异，表达药物抑制肿瘤细胞趋化运动作用，评价抗肿瘤迁移活性。实验结果见表1。

表11-5化合物趋化抑制率

2.3伤口愈合实验

选择1、2、5较强抑制趋化活性化合物，对乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移进行测定。1、2、5化合物均对该细胞迁移产生抑制，其中2、5化合物具有较强作用。

3结论

本实验从转筋草内分离化合物5个，采用MTT法将非细胞剂量筛选出来，结果示在浓度10μg?mL－1时各化合物对乳腺癌细胞MDA-MB-231无细胞毒作用，而1、2、5化合物对该细胞有明显抑制趋化运动作用。所以取1、2、5化合物行伤口愈合实验，初步筛选抗肿瘤迁移活动。结果示1、2、5化合物均能剂量依赖性抑制肿瘤细胞迁移作用，其中以5化合物作用最强。此结果为转筋草抗肿瘤效果提供参考依据。

参考文献

[1]肖会君,李晨阳,唐生安,秦楠,段宏泉.转筋草中化学成分研究[J].中国中药杂志,2013,08(03):23.

[2]翟慧媛,李晨阳,唐生安,段宏泉.转筋草中的酚类成分及其抗氧化活性[J].中国中药杂志,2010,09(14):56.

[3]李晨阳,翟慧媛,唐生安,段宏泉.转筋草化学成分及其活性研究[J].中药材,2010,12(05):13.