生（制）何首乌醇提物对小鼠各个脏器及血液生化指标影响

生（制）何首乌醇提物对小鼠各个脏器及血液生化指标影响

胡雯婧

(湖北科技学院湖北咸宁437100)

【摘要】目的：观察生品和炮制后的何首乌醇提物在高低两个剂量下长期给药对小鼠各个脏器及血液生化指标的影响。方法：生（制）何首乌醇提物分别按低剂量2g/kg和高剂量4g/kg剂量连续给药90天后对给药小鼠进行30天、60天、90天各项血液生化。结果：60天小鼠CREA、TBA、（P<0.05或P<0.01）有统计学意义和90天小鼠ALP、AST、BUN、DBIL、LDH、TBA、（P<0.05或P<0.01）有统计学意义其他各项指标或正常或仅有趋势。结论：长时间超剂量使用何首乌特别是未炮制过的生品有一定胆汁淤积、肝脏和肾脏衰竭的危险性。

【关键词】何首乌；醇提物；肝脏损伤；肾脏衰竭

【中图分类号】R285.1【文献标识码】B【文章编号】2095-1752（2017）09-0306-02

中国古代中医学及中药学上将何首乌与人参、虫夏草、灵芝并为四大仙草之一。何首乌由唐代李翱《何首乌》首先记载[1]在古代各个精方要方中为常见药物之一[2]。何首乌分为生品和炮制品两种在秋冬两季采挖，切制除去杂质，洗净，稍浸，润透，切厚片或块，干燥后为生品。制何首乌的炮制方法分为黑豆汁和酒制，用黑豆汁蒸至内外棕褐色即可。生品主要为解毒，消痈，通常润便。制何首乌具有补肝肾，益精血，乌须发，强筋骨的疗效[3]现代医学证实何首乌还具有抗高血脂[4]，抗氧化[5]，增强免疫[6]，延缓衰老[7]，防止老年痴呆[8]和提高记忆力的作用[9]一直以来视为滋补上品，古代医学上记录其不良反应主要集中在消化道。但是近来无论是在国外临床报道上还是近日的国内临床报道上何首乌的不良反应屡见不鲜集中在肝脏损伤上。[10]这使得国家食品药品监管总局不得不在2014年发布口服何首乌有肝损伤的风险，使这味传统中药面临被视为“毒药”的局面。另外李奇[11]研究服用何首乌不慎还会引起肾脏和肺脏的损伤其中肺损伤为首次报道。目前现有研究表明何首乌的致毒成分为蒽醌类，50%醇提物的毒性大于75%的醇提物和水提物。所以本实验室选择生（制）何首乌醇提物长期90天给药。本实验前期自购上海康桥中药饮片有限公司的生（制）何首乌两种各5kg，产地：贵州。后委托南京泽朗医药科技有限公司进行生（制）何首乌50%醇提物的提取并出具提取物含量合格证明：HPLC≥98%。本实验根据临床用量200倍、100倍即50%醇提物4g/kg、2g/kg，给小鼠灌胃连续90天，以观察生（制）何首乌醇提物高低剂量对小鼠主要脏器有何影响。

1.实验材料

1.1.1实验动物C57BL/6小鼠。70只雄性，体重18～19g，实验室温度（18-29℃）湿度（40%-70%）购置上海斯莱克实验动物有限公司，合格证SCXK（沪）2015-0002。

1.1.2实验药品生（制）何首乌均购置上海康桥中药饮片有限公司的生（制）何首乌两种各5kg，交由南京泽朗医药科技有限公司进行50%醇提物的提取与制备并出具检测报告。生何首乌批号：150611制何首乌批号：150704产地：贵州。

1.1.3实验试剂20%福尔马林溶液、纯净水、白蛋白（ALB）、总蛋红素（TBIL）、总蛋白（TP）、直接胆红素（DBIL）、心肌激酶（CK）、肌酐（CREA）、乳酸脱氢酶（LDH-L）、间接胆红素（IBIL）、尿素氮（BUN）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总胆汁酸（TBA）、球蛋白（GLO）、碱性磷酸酶（ALP）的测定试剂盒由上海中医药大学安全药物评价中心提供。

1.1.4仪器全自动生化仪（日本奥林巴斯，型号AU400）、电子天平（梅特勒电子天平，型号AL204）、高速离心机（型号：TGL-20M/TGL20M）、电子显微镜（日本奥林巴斯IX83）。

1.2实验方法

1.2.1长期毒性实验实验小鼠随机分为空白组（control）、制何首乌高剂量（RPMPHD）、制何首乌低剂量（RPMPLD）、生何首乌高剂量（RPMPHD）生何首乌低剂量（RPMPLD）每组14只分两笼进行饲养，每隔三天称一次重，生（制）何首乌醇提物使用前配成所需浓度溶剂为水，按高剂量0.2ml/10g和低剂量0.1ml/10g每天给药。分别于60天，90天后小鼠眼球取血，860g/mins离心15mins进行离心分离血清，检测各项生化指标。

1.3统计学处理

用SPSS22.0统计学软件进行数据分析。采用单因素ANOVA考察显著性，组间两两比较采用LSD方法以P<0.05为显著性标志和P<0.01作为非常显著性标志，所用计量资料均用x-±s表示。

2.结果

2.1对血液生化指标的影响

给药后60天，各给药组与空白组的ALT、AST、ALP、CK、TBIL、DBIL、LDH、BUN、TP、GLO、无统计学差异（P>0.05），而各给药组与空白组的TBA变化十分明显，具有统计学差异（P<0.05或P<0.01）。空白组与生何首乌高剂量下的CREA变化明显升高(P<0.01)。继续给药至90天后，生何首乌低剂量组ALP和生何首乌高剂量AST与空白组（P<0.05）有明显差异。制何首乌低剂量组、制何首乌组高剂量和生何首乌组低剂量组BUN具有统计学差异（P<0.05或P<0.01）。生（制）何首乌低剂量和高剂量的DBIL与空白组有统计学意义（P<0.05或P<0.01）、空白组与生何首乌低剂量的LDH有明显升高（P<0.05）有统计学意义。生何首乌低剂量组与空白组（P<0.05）有统计学意义。

3.讨论

随着人们的生活水平不断提高，中药养生也越来越收人们的重视。何首乌在中国历来为滋补佳品的首选之一，具有延年益寿的功效。但是从近年来，特别是近五年来，何首乌的不良反应频频突发。在2014年国家食品药品总局也发布了何首乌风险提示，也在2015年就有一安徽男子为了乌发而口服6斤何首乌粉末而肝脏衰竭致人死亡的不良反应。早在2005年英国MHRA有7例使用何首乌粉或者制剂发生黄疸等不良反应。现代何首乌的不良反应主要发生在肝脏功能上，肝脏是人体中最重要的代谢场所，药物通常经过肝脏内的P450酶代谢才进入体循环。而P450酶具有家族遗传性，因此推断何首乌的肝脏毒性也可能与家族性遗传有关。何首乌的主要化学成分为二苯乙烯苷和蒽醌类，蒽醌类主要为大黄素、大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚。张敏[12]等实验证明何首乌蒽醌类之一的大黄酚是导致肝细胞衰竭的成分之一，而大黄素和大黄酸肝细胞调往指数无变化，在其制何首乌给药组实验中AST与ALT均有升高但无统计学意义（P>0.05）这也证明了临床上服用何首乌的患者往往在前期诊断不出有肝损伤的症状。贾歌刘畅[13]等则实验证明何首乌中由于二苯乙烯苷含量最高且具有保肝作用，可能与蒽醌类的大黄素、大黄酸相互拮抗使得何首乌的保肝作用大于肝损伤作用，这也可能使得AST和ALT有趋势升高但无统计学意义重要原因之一（P>0.05）。

本实验结果发现小鼠在给药60天给药组与空白组的AST和ALT均无统计学差异，DBIL、TBIL和BUN也仅仅趋势并且其他生化指标未见异常。而MDA和MPO方面也仅仅提示炎症和细胞氧化毒性的发生但在常规血检中未能发现。TBA的方面各个给药组与空白组均有明显差异，有统计学差异（P<0.05或P<0.01）表明胆汁淤积较明显。在60天后各个给药组小鼠体重都有不同程度的下降后又缓慢上升，由于未做脂肪代谢上指标，估计可能与脂肪代谢有关。而90天后ALP、AST、BUN、DBIL、LDH、TBA及皆有变化，但是提示肝脏损伤的AST、ALP、LDH和TBA也仅仅是生何首乌组有差异，相比较于空白组不是很大且90天后只有一组小鼠的TBA有统计学差异。从60天和90天的实验数据来看，何首乌对于机体的损伤主要直接表示在胆汁的排泄上，主要见于DBIL和TBA的升高，间接提示可能为慢性肝脏功能的损伤。其次为肾脏的损伤主要见于BUN和CREA上的降低，其实在临床上BUN和CREA的降低表示为早期肾实质性损伤，但是对于BUN的降低可以分为两部分。在临床上BUN的降低，可能为肝功能异常，也可能为其他原因。对于本实验AST的升高，也仅仅见于一组。一般来说ALT和AST的升高表示急性或者慢性肝损伤，提示何首乌的传统肝损伤的血液生化指标上AST和ALT上不明显，结合本实验上可以同时参考BUN和TBA上的一些指标。

本实验也显示，在相同剂量下，长时间超剂量使用何首乌具有一定的毒性，传统中药药理作用和成分十分复杂，结合临床报告何首乌的肝损伤也只占一小部分。这可能与患者体质或者遗传性P450酶有关，在临床上使用何首乌要密切监测留意肝肾功能的不良反应。特别是有肝脏功能不良的患者更要留意其临床生化指标，也为何首乌安全用药及不良反应提供一定参考。

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