猪肠道寄生虫虫卵的分离与纯化

猪肠道寄生虫虫卵的分离与纯化

刘嘉年翟亚超李东明杨文娟闰尚风别平权唐艳辉刘世

刘嘉年翟亚超李东明杨文娟闰尚风别平权唐艳辉刘世国

(新乡医学院453000)

【摘要】猪肠道寄生虫病是严重危害和制约畜牧业发展的寄生虫病之一，凡是猪养殖地就有不同程度的猪肠道寄生虫病发生，特别是在集约化养猪场。寄生虫感染与寄生虫病是我国一个严重的公共卫生问题，被寄生虫感染的土壤是人类感染的主要来源[1]。对猪肠道寄生虫虫卵的分离提纯工作是进行寄生虫病研究分析的主要工作，也是必备工作，对进一步研究猪肠道寄生虫的致病性、药物效应、产生的耐药性和对猪肠道寄生虫的免疫性有重要意义。在结合科研实践的基础上对猪肠道寄生虫卵的分离纯化的操作方法进行改进，改进后提高了虫卵的回收率和虫卵的存活率，简化了工作流程。目的：利用更方便有效的方法分离纯化猪肠道寄生虫卵。方法：利用饱和食盐水和33%硫酸锌混合溶液从土壤里提纯猪肠道寄生虫卵。结果:悬浮法成功将虫卵提纯，省去了过滤的繁琐工作，提取的虫卵密集且存活率高，提取率：饱和食盐水和33%硫酸锌溶液>33%硫酸锌溶液>饱和食盐水>蒸馏水。结论：猪肠道寄生虫卵的分离提纯用硫酸锌和饱和食盐水的混合液提纯效率高于普通的虫卵提纯，且杂质少，虫卵密集，存活率高。

【关键词】猪肠道寄生虫卵；分离；纯化

【中图分类号】R943.1【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）26-0380-01

现实生活中很多人体自身免疫性疾病不能治愈。如何治疗和预防自身免疫性疾病成为医学研究的重要课题之一。随着社会发展，人类居住环境卫生状况逐步好转，人类减少了以往很多感染性疾病的危害。但随着人类饮食，生活环境的卫生状况的改善。病原生物的感染，特别是肠道寄生虫感染率的降低，导致人类人体免疫的另一类紊乱：将免疫靶向针对了人类自身组织和器官。导致一系列自身免疫性疾患。利用猪肠道寄生虫治疗人体自身免疫疾病，需要大量且精确数量的存活虫卵，目前科学杂志和文献上对虫卵的分离提纯还是依照老式的方法先一边一边分级过滤，再用饱和食盐水悬浮虫卵。这种方式不仅费时费力，提取率很低，提取出来的杂质也很多。

1材料与方法

1.1方法

根据虫卵和土壤的密度不一样，利用硫酸锌和饱和食盐水混合液双浮聚法悬浮，因为虫卵的比重小能浮在表面，悬浮后利用玻片或吸管吧表面虫卵吸出，即能得到纯净虫卵。

1.2材料来源

新乡市地区屠宰场和散户感染猪的粪便进行分离纯化.

实验器材：大烧杯，玻璃棒，200目和400目滤网，七水合硫酸锌(AR，广东省化学试剂工程技术研究开发中心产品)，配制成浓度为330g／L的水溶液，比重1．18；市售食盐，配成饱和溶液，比重1．175～1．200。

2操作步骤

2.1组一：饱和食盐水和硫酸锌双重浮聚：1配置饱和食盐水。2用饱和食盐水溶解33克硫酸锌，定容100ml。3将200目滤网过滤后的土壤倒入小烧杯，再加入溶液，静止15分钟，取上清。

2.2组二：1配置饱和食盐水。2将200目滤网过滤后的土壤倒入小烧杯，再加入溶液，静止15分钟，取上清。

2.3组三:1配置33%硫酸锌溶液。2将200目滤网过滤后的土壤倒入小烧杯，再加入溶液，静止15分钟，取上清。

2.4组四：1取蒸馏水溶液。将200目滤网过滤后的土壤倒入小烧杯，再加入溶液，静止15分钟，取上清。

3实验结果

3.1不同悬浮法对虫卵形态的影响

4种悬浮法悬浮的虫卵放置30、60min后，其形态均无明显改变

3.2不同悬浮法对虫卵的分离效果

猪肠道寄生虫卵收集纯化中，利用悬浮过滤法均能成功将虫卵提纯，各方法虫卵提纯度比较：饱和食盐水和硫酸锌双重浮聚法提纯率55%，饱和食盐水浮聚法提纯率17%，33%硫酸锌浮聚法提纯率23%。

3.3讨论：

目前，分离纯化肠道寄生虫卵的方式不多，最常见的是将土壤或粪便过筛后离心，该方式操作简单，但获得的虫卵杂质较多，只能用于对纯度要求不高的实验，有一些科研人员试图通过提高过筛的次数来提高其纯度，但经本实验小组试验证实多次过筛并不能有效提高其纯度，且会损失较多的虫卵，操作也相对复杂，消耗大量时间且提纯周期长。还有就是利用Percoll液来提取高纯度猪肠道寄生虫卵，这种方法用时较短，效果较好，但是所用成本价格较高，只能用来少量提纯，所分离出的虫卵并不能完全满足研究需要。本实验饱和食盐水和硫酸锌的混合液提纯方式操作简且效果较好，所分离出的虫卵完全能够满足研究需要，可以研究寄生虫病致病机理和相关药物研发，创造良好的基础。注意事项：过滤过程中注意滤网，漏斗的操作和使用；悬浮法应用蒸馏水设置对照实验。

参考文献

[1]许隆棋，蒋则孝，余森海，等．人体常见三种土源性线虫感染与土壤污染调查[J]．中国寄生虫病防治杂志，1994，7(3)：171—173．