HPLC法测定无水碳酸钠中EDTA-2Na的残留

HPLC法测定无水碳酸钠中EDTA-2Na的残留

谢英新王广慧杨蕾

哈药集团制药总厂

【摘要】目的：建立无水碳酸钠中EDTA-2Na的残留测定方法。方法：色谱柱：InertsilODS-3，250mm×4.6mm，5μ；流动相：0.025mol/L硫酸铵溶液（用硫酸调节pH值至3.0）；检测波长：254nm；流速：1.0ml/min；进样量：50μl。结果：EDTA-2Na在0.03～7.49μg/ml浓度范围内具有良好的线性关系，平均回收率为98.02%，RSD为0.82%。结论：本法测定无水碳酸钠中EDTA-2Na具有良好的专属性、线性、重复性和准确度，适用于EDTA-2Na的检测。

【关键词】无水碳酸钠；EDTA-2Na；残留测定

DeterminationofresiduesofEDTA-2NainanhydroussodiumcarbonatebyHPLC

YingxinXieGuanghuiWangLeiYang

HarbinGeneralPharmaceuticalFactory

Abstract:ObjectiveToestablishthemethodfordeterminationofresiduesofEDTA-2Nainanhydroussodiumcarbonate.MethodThechromatographiccolumnisInertsilODS-3，250mm×4.6mm，5μ；mobilephase0.025mol/Lammoniumsulfate(pH3.0)；detectionwavelengthis254nm;theflowrateis1.0ml/min；theamountofinjectionis50μl.ResultsThechromatographicmethodtodetecttheuseofEDTA-2Nainanhydroussodiumcarbonateisaccurate,andthecalibrationcurveofEDTA-2Naislinearintherangeof0.03～7.49μg/ml,theaveragerecoveryis98.02%,RSDis0.82%.ConclusionThemethodisaccurate,reproduciblewhichcanbeusedfortheresiduesofEDTA-2Nainanhydroussodiumcarbonate.

Keywords:anhydroussodiumcarbonate;EDTA-2Na;residues

无水碳酸钠为药用辅料，为本厂很多粉针制剂的重要辅料，如头孢他啶、盐酸头孢替安等，为便于质量控制，本厂开发了粗品精制制备无水碳酸钠合成工艺，为防止无水碳酸钠中残留的金属离子与配伍的主药发生反应，影响药品质量，在制备无水碳酸钠时，添加了少量的金属络合剂乙二胺四乙酸二钠（EDTA），提高药品稳定性。

由于乙二胺四乙酸二钠（EDTA）可与钙离子结合成可溶的络合物引起钙的减少，静脉制剂中使用乙二胺四乙酸二钠（EDTA）会导致血钙下降，因此，要增加EDTA检查项，密切关注和严格控制无水碳酸钠中乙二胺四乙酸二钠（EDTA）的用量。

目前，乙二胺四乙酸二钠（EDTA）的检查方法有比色法、滴定法、离子色谱法和高效液相色谱法[1]等，本厂综合筛选了多种方法，最终选择专属性强的高效液相色谱法检测乙二胺四乙酸二钠（EDTA）的金属络合物EDTA-Cu，从而间接对EDTA进行测定。考虑到碳酸钠与硫酸铜在水溶液中会形成碱式碳酸铜白色沉淀，干扰测定，因此在络合前加入硫酸溶液，将碳酸钠转变成硫酸钠后，再通过检测乙二胺四乙酸二钠（EDTA）的金属络合物EDTA-Cu对碳酸钠中的EDTA残留量进行测定。

1仪器与材料

1.1仪器XP205型分析天平（MettlerToledo）;LC-20A型高效液相色谱仪（日本岛津）；LC-20AD型紫外检测器（日本岛津）；

1.2材料硫酸（分析纯，哈尔滨试剂化工厂）；EDTA-2Na（分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司）；硫酸铜（分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司）；无水碳酸钠（注射级，批号：20170401、20170501、20170502，哈药集团制药总厂）。水为自制纯化水。

2方法与结果

2.1色谱条件色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂[InertsilODS-3，250mm×4.6mm，5μ]；流动相：0.025mol/L硫酸铵溶液（用硫酸调节pH值至3.0）；检测波长：254nm；流速：1.0ml/min；进样量：50μl。

2.2溶液的制备

2.2.1空白溶液的制备取纯化水8ml，置50ml纳氏比色管中，滴加浓硫酸1ml，超声2min，加2%硫酸铜溶液1ml，室温放置1小时，即得。

2.2.2对照品溶液的制备精密称取乙二胺四乙酸二钠30mg，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取上述溶液1.0ml，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液1.0ml，置50ml纳氏比色管中，加水7ml，滴加浓硫酸1ml，超声脱气2分钟，加2%硫酸铜溶液1ml，室温放置1小时，即得。

2.2.3供试品溶液制备取本品约1.6g，置50ml纳氏比色管中，精密称定，加水8ml使溶解，滴加浓硫酸1ml，超声2分钟，加2%硫酸铜溶液1ml，室温放置1小时，即得。

2.2.4系统适用性溶液制备精密称取乙二胺四乙酸二钠30mg，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取上述溶液1.0ml置50ml纳氏比色管中，加水7ml，滴加浓硫酸1ml，超声脱气2分钟，加2%硫酸铜溶液1ml，室温放置1小时，即得。

2.3系统适用性试验

按照2015年版《中国药典》高效液相色谱法[2]，检测波长254nm，分别精密量取空白溶液、对照品溶液、供试品溶液和系统适用性溶液各50μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，系统适用性图谱中的EDTA-Cu的色谱峰的理论板数不低于2000。

2.4波长的选择

参考EDTA-Cu的DAD光谱扫描图谱及《HPLC法测定肝素钠原料中EDTA-2Na的残留》文献检测波长情况，将本品的检测波长设定为254nm。

2.5EDTA-2Na含量测定的反应时间考察

在选定的EDTA含量测定条件下，配制供试品溶液，在室温下放置，于第0min、20min、40min、60min、80min进样检测EDTA-Cu的峰面积。结果见表1：

供试品溶液室温放置60min时，对照品和样品的峰面积达到稳态平衡。

2.6EDTA-2Na含量测定的回收率试验

精密称取乙二胺四乙酸二钠（EDTA）（含量99%）30.92mg，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取上述溶液1.0ml，置10ml量瓶中，加水定量稀释至刻度，摇匀，量取0.8ml、1.0ml、1.2ml各3份，分别置9个加1.6g碳酸钠的50ml纳氏比色管中，分别加水7.2ml、7.0ml、6.8ml，溶解，滴加浓硫酸1.0ml，超声脱气2分钟，加2%硫酸铜溶液1ml，室温放置1小时，作为回收率试验溶液；另取供试品溶液和对照品溶液各一份，分别取50μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算供试品中乙二胺四乙酸二钠（EDTA）的回收量，9份供试品平均回收率为98.02%，RSD为0.82%，回收率较好。

2.7EDTA-2Na含量测定的线性试验

精密称取乙二胺四乙酸二钠（EDTA）（含量99%）31.53mg，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取上述溶液1.0ml，置10ml量瓶中，加水定量稀释至刻度，摇匀，精密量取上述溶液0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.7ml、0.8ml、0.9ml、1.0ml、1.2ml各1份，分别加水7.9ml、7.8ml、7.6ml、7.4ml、7.3ml、7.2ml、7.1ml、7.0ml、6.8ml，分别置50ml纳氏比色管中，摇匀，滴加浓硫酸1.0ml，超声脱气2分钟，加2%硫酸铜溶液1ml，室温放置1小时，作为线性试验溶液；分别取50μl注入液相色谱仪，记录色谱图，得到线性方程为：A=26716.8186×M+591.9067，r=0.9999，结果表明EDTA-2Na浓度在0.03~7.49μg/ml，相当于EDTA在碳酸钠里的残留量在0.000019%~0.00468%范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.8EDTA-2Na含量测定中间精密度

分别于不同时间、由不同分析人员测定精密度，在EDTA含量测定范围内，制备供试品溶液，用至少测定6次的结果进行评价，计算含量及其相对标准偏差，测定结果表明日内及日间RSD均小于4.0%，中间精密度良好。

2.9EDTA-2Na耐用性

通过将色谱条件中流动相的柱温、缓冲盐浓度、pH、流速、检测波长及色谱柱填料进行微小变动，考察该色谱条件的耐用性。结果表明色谱条件柱温30℃±5℃，缓冲盐浓度±0.005mol/L，pH3.0±0.2，流速1.0±0.2ml/min，检测波长254±3nm，及更换为ODS-2色谱柱均能满足系统适用性要求，EDTA含量均不受影响.

2.10乙二胺四乙酸二钠（EDTA）含量测定

测定无水碳酸钠的3批样品，20170401批含量为0.0006%、20170501批含量为0.0015%、20170502批含量为0.0004%。

3结论

本品EDTA含量测定方法，经方法学验证可知，本方法能够准确定量测定碳酸钠中EDTA含量；EDTA含量限度参考国家食品药品监督管理总局药审中心的电子刊物《关于静脉给药制剂中使用乙二胺四乙酸二钠有关情况调研及分析》，规定为本品含EDTA不得过0.004%，精制工艺完全能够符合该限度要求。

【参考文献】

1.要辉，纪万里，白育庭.HPLC法测定肝素钠原料中EDTA-2Na的残留.[J]中国民族民间医药，2015，24（16）：28-29

2.国家药典委员会.中华人民共和国药典四部[M].北京：中国医药科技出版社，2015.