小于1岁先天性心脏病患儿淋巴细胞亚群的检测

小于1岁先天性心脏病患儿淋巴细胞亚群的检测

王保存1葛圣林2丁力1

王保存1葛圣林2丁力1

（1安徽省儿童医院心脏外科安徽合肥230051）

（2安徽医科大学第一附属医院心脏大血管外科一病区安徽合肥230001）

【摘要】目的：探讨小于1岁先天性心脏病（先心病）患儿T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞及NK细胞的功能，为免疫干预、临床用药及预后判断提供理论依据。方法：采用病例对照研究，选取患儿106例，按病种分为2组：先心组68例及对照组38例。采用流式细胞术检测患儿外周血中CD3、CD4、CD8、CD16、CD56及CD19，对两组数据进行比较。结果：先心病组患儿CD3、CD4均低于对照组，CD19、CD16CD56均高于对照组，CD8、CD4/CD8+无明显差异。结论：先天性心脏病患儿合并免疫功能缺陷，尤以细胞免疫功能障碍为主，同时有体液免疫功能及非特异性免疫反应亢进。

【关键词】先天性心脏病；免疫缺陷；淋巴细胞亚群；流式细胞术

【中图分类号】R72【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2016）22-0248-03

先天性心脏病（Congenitalheartdisease，CHD）是指心脏和大血管的胚胎发育障碍而致心脏和大血管的形态、结构、功能及代谢上的异常，是先天性缺陷中最常见的一种疾病[1]，其发病率约占全部出生婴儿的0.8%[2]。先心病患儿常并发呼吸道感染，且难以治疗彻底，尤其是左向右分流型，以往的研究主要认为是由于血流动力学及机械因素所致。但是近年来的研究提出，先心病患儿可能同时合并免疫调节紊乱和/或免疫缺陷，特别是在左向右分流型先心病患儿中，此种倾向更为明显。检测先心病患儿外周血中淋巴细胞相关指标，可判断机体的免疫功能和免疫状态，为免疫干预、指导临床用药及判断预后提供理论依据。现总结、报道如下。

1.材料与方法

1.1对象

选取2014年1月至2015年3月间在安徽省儿童医院住院治疗的患儿106例，按病种分为2组：先心组(先天性心脏病组）及对照组（腹股沟斜疝组）。实验组先心病68例，其中室间隔缺损58例，动脉导管未闭6例，房间隔缺损2例，右室双出口及主动脉缩窄各1例，全部病例根据临床表现，结合胸片、心电图、彩色多普勒超声心动图检查，部分病例加做心脏CT造影检查（CTA），后均经手术证实，并排除其他疾病。对照组38例，为同期在本院普通外科及泌尿外科住院治疗腹股沟斜疝患儿，左侧24例，右侧10例，双侧4例，所有患儿近2周无感染性疾病及免疫药物使用史，且经彩色多普勒超声心动图检查，排除先天性心脏病等病变。基本资料比较详见表1。

表1基本资料比较（x-±s）

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*腹股沟斜疝以男性多见，男：女约（10～20）:1。**先心病患儿普遍生长发育较差，故体重偏低。

1.2检测方法

全部患儿均为术前采集外周静脉血0.5～1ml，加入EDTA抗凝管中，于采集后24小时内送检。取100ulEDTA抗凝的全血加入流式专用管中，加适量的单抗（按说明书所示），混匀，室温避光孵育15～20min，加入一定比例的溶血素裂解红细胞（5:1），混匀，室温避光孵育10min，上机检测。BeckmanCoulter公司的EpicsXL500流式细胞仪，采用Cellquest软件获取分析细胞相对计数。

1.3统计学分析

采用SPSS16.0统计软件对数据进行统计学分析。计量数据符合正态分布时以均数+标准差（x-+s）表示。两组连续性计量资料的比较符合正态分布的采用两独立样本t检验，不符合正态分布的采用秩和检验。全部检验均以P＜0.05为差异，有统计学意义。

2.结果

先心病患儿CD3+、CD4+百分比较对照组降低，CDl9+、CD16+CD56+百分比明显高于对照组，CD8+百分比及CD4+/CD8+比值较对照组无明显差异。详见表2。

表2各项变量指标统计分析结果（x-±s）

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3.讨论

Kung等［3］1979年报道了人的细胞单克隆抗体检测技术以来，淋巴细胞及亚群成为评价机体免疫功能的重要指标。淋巴细胞及其亚群的检测是判断机体免疫功能的一项重要指标，有助于了解患者的机体免疫状态、评价疗效及分析预后等。

T淋巴细胞及其亚群是具有特殊标志的胸腺输出细胞，是机体免疫防御系统的重要组成部分，主要介导细胞免疫及免疫调节功能，其数量和各亚群比例是反映机体免疫水平的主要标志。CD3+T淋巴细胞数量下降提示机体参加免疫反应的免疫活性细胞不足和/或细胞免疫功能低下。CD4+T淋巴细胞减少和功能下降，可直接导致机体免疫功能低下，特别造成细胞免疫功能低下。CD8+T淋巴细胞增多表示免疫抑制。最近的研究[4]主要集中在CD4+/CD8+的比值，是检测机体免疫紊乱敏感指标，CD4+／CD8+比值降低代表了机体免疫功能低下。

本实验研究结果表明，先心病患儿CD3+、CD4+较对照组降低，提示先心病患儿有免疫功能低下，特别是细胞免疫功能低下，这与以往的报道相符合[5-7]。CD8+及CD4+/CD8+比值较对照组无明显差异，免疫抑制的作用无明显强化，这与既往的研究显示CD8+升高及CD4+/CD8+比值降低有差异。可能的原因为，CD3+降低中以CD4+降低为主，CD8+无明显变化，提示先心病患儿的细胞免疫受到明显抑制。况且，CD8+与T淋巴细胞CD4+T淋巴细胞相似，是一个复杂的细胞群，内部还存在着诸多的亚群，如按CD28有无可分为CD8+/CD28+和CD8+/CD28-两类。其整体数量没有变化，并不代表CD8+T淋巴细胞内部无变化，这也提示，日后的研究应该进一步细化CD8+T淋巴细胞的亚群。

B淋巴细胞介导的是体液免疫，识别、呈递抗原，合成、分泌抗体，调节免疫应答，在自身免疫疾病发病中扮演着重要角色。CDl9是B淋巴细胞特有的表面标志，其表达的量能够反映B淋巴细胞的功能。

在本次实验中可以看到，先心病患儿外周血CDl9+百分比明显高于对照组，其机制可能为先心病患儿CD3+、CD4+淋巴细胞的降低可以刺激B淋巴细胞增生，分泌活跃，使体液免疫功能亢进。这种体液免疫的亢进，增强机体的抗感染作用，有利于先心病患儿呼吸道感染的局限，尤其是合并病毒感染。在临床上，先心病患儿合并呼吸道的感染，应注重抗病毒治疗。

NK细胞是除T、B淋巴细胞之外的第三类淋巴细胞，主要介导机体的自然免疫，是非特异性免疫系统的主要组分之一，在自身免疫、免疫调节和免疫监视同样扮演着重要角色[8-10]。NK细胞通常在感染或疾病的极早期或早期升高，中后期下降。NK细胞比例高，提示机体的非特异性免疫反应强烈，可能彻底清除病毒等病原体，但同时也有造成自身免疫损伤的风险。CD16和CD56是NK细胞的特异性标记,表达量可以反映NK细胞的数量和活性。

本实验中，CD16+和CD56+在先心病患儿外周血中检测的百分比较对照组高，我们认为，先心病患儿比对照组患儿更易合并潜在的感染，如呼吸道、泌尿道、胃肠道等，机体的非特异性免疫反应更为强烈，在患儿入院24h内采血送检，出现NK细胞的比例增高在理论上是有可能的。

综上所述，淋巴细胞及其亚群是机体的免疫功能及免疫调节的重要一部分，检测先心病患儿外周血相关标记物的表达，可判断机体的免疫功能和免疫状态，为早期的免疫干预、合理的临床用药及准确的预后判断提供依据。既往有关先心病合并免疫功能缺陷的研究，基本上集中于辅助性T细胞亚群、红细胞、免疫球蛋白等的功能，本实验除进一步佐证了先心病患儿合并免疫功能缺陷外，尤其是细胞免疫功能低下，还同时存在体液免疫和非特异性免疫反应亢进的可能，这在既往研究中是不常见到的。由于在本实验中，患儿年龄局限于1岁以内，样本量尚小，可能存在偏倚，仍有待于多年龄段、大样本和更为深入、细致的研究。

【参考文献】

[1]BolgerAP,CoatsAJ,GatzoulisMA.Congenitalheartdisease:theoriginalheartfailuresyndrome.[J]EurHeartJ2003,24(10):970-76.

[2]张伟艳，周凯，莫绪明.家族性先天性心脏病的遗传学研究进展[J].中华心血管病杂志，2013,41(9):812-14.

[3]KungP，GoldsteinG，ReinherzEL，etal.MonoclonalantibodiesdefiningdistinctivehumanTcellsurfaceantigens[J].Science.1979，206（4416）：347-49.

[4]LiY,GengS,YinQ,etal.DecreasedlevelofrecentthymicemigrantsinCD4+andCD8+TcellsfromCMLpatients[J].JTranslMed,2010,14(8)：47.

[5]饶智国，黄显湘，李佩玲等.33例先天性心脏病患儿T细胞亚群、B细胞和免疫球蛋白的检测.新医学，2000,31(1):28-29.

6]冯梅，王一彪，孙若鹏.先天性心脏病患儿辅助性T细胞亚群TH1、TH2及红细胞免疫功能的研究.中华儿科杂志，2007,45（12）：947-48.

[7]丁宇，殷勇，王薇等.先天性心脏病合并重症肺炎患儿辅助性T细胞功能的动态变化.中国小儿急救医学，2012,19（4）：415-16.

[8]田志刚，魏海明，孙汭．NK细胞免疫识别及其调节机制与免疫相关性疾病［J］．中国科学技术大学学报，2008,38(8):896-904.

[9]施长友，张永乐．慢性乙型肝炎患者T淋巴细胞亚群与自然杀伤细胞活性分析［J］．中华医院感染学杂志，2012,22(20):45.45-46.

[10]OrangeJS.HumannaturalkillercelldeficienciesandsusceptibilitytoInfection[J].MicrobesInfection.2002,4(15):1545-58.