血清中游离脂肪酸检测方法的研究进展

血清中游离脂肪酸检测方法的研究进展

郑利平

郑利平(南宁市第二人民医院检验科530031)

【摘要】游离脂肪酸，简称FFA，其组成成分为亚油酸、油酸以及软脂酸等，属于甘油三酯的水解产物。游离脂肪酸存在于血液中，且与血清白蛋白结合。对人体血清中游离脂肪酸含量进行检测，能够尽早发现患者血清中游离脂肪酸的异常情况，最终起到预防及尽早对相关疾病进行治疗的目的。临床中对人体血清游离脂肪酸的检测方法主要有气相色谱法、液相色谱法以及酶法等。临床最常用也最简单的血清游离脂肪酸检测方法为气相色谱法，而使用酶法进行血清游离脂肪酸检测是最准确的检测方法，临床进行血清游离脂肪酸检测时，应根据患者实际情况以及临床需要选择合适的检测方法。

【关键词】血清游离脂肪酸检测方法研究进展

【中图分类号】R446.1【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2013）03-0035-02

本文将探讨血清中游离脂肪酸检测方法，从而提高临床检测血清中游离脂肪酸正确率，现结果如下。

1血清中游离脂肪酸概述

游离脂肪酸，简称FFA，其组成成分为亚油酸、油酸以及软脂酸等，属于甘油三酯的水解产物。游离脂肪酸存在于血液中，且与血清白蛋白结合。

脂肪酸是生物体中重要的组成部分，对生物体的某些生命活动提供能量，参与前列腺素或类固醇的合成过程，对某些蛋白质起到一定的修饰作用[2]。是生物体脂类代谢情况出现异常的重要标识无，能够影响基因表达，导致生物体内细胞生长、分化、代谢等发生变化。脂肪酸可分为饱和脂肪酸与不饱和脂肪酸，不饱和脂肪酸又分为单不饱和脂肪酸与多不饱和脂肪酸。各种脂肪酸对人体中脂代谢以及糖代谢具有不同影响。

近年研究发现，人体血清中的游离脂肪酸浓度易受多种因素影响，如脂类代谢、内分泌功能以及糖代谢等，血清中游离脂肪酸浓度升高可导致人体中胰岛素抵抗情况增加，且大部分肥胖且伴有2型糖尿病患者体内都存在胰岛素抵抗现象；反之，人体中游离脂肪酸浓度升高，发生胰岛素抵抗，则患有2型糖尿病以及心血管疾病的风险将增加。

2检测方法

2.1气相色谱法1.选用试剂为标准品C17：0和正十七酸甲酯C17:0甲酯、油酸甲酯C18:1甲酯、C18:3、C18:2、C20:4甲酯、硬脂酸甲酯、EPA甲酯、DHA甲酯、甲醇为色谱纯、氯化钠为分析纯、浓硫酸、环己烷为分析纯、正己烷、经重蒸馏处理，水为双重蒸馏水；2.仪器采用美国惠普公司生产的型号为HP5890气相色谱仪，氢火焰离子化检测器（FID），SePu3000色谱工作站，上海医科大学仪器厂生产的型号为XW-80A漩涡混匀器；3.色谱条件。载气为氮气，浓度为99.99%，PEG-20M石英毛细管柱，初始柱温为170摄氏度，程序升温速度为每分钟三摄氏度，升至210摄氏度时保持六分钟，之后再以每分钟十摄氏度速度将温度升至230摄氏度，并保持此温度35分钟，汽化室温度为250摄氏度，检测机器温度为250摄氏度，分流比为1：15，进样量为1微升；4.血清样品来源。取受检患者清晨空腹时间进行样品采集，之后将血清分离，并保存在零下二十度；5.样品预处理。将0.6毫升血清加入0.5毫升C17:0甲酯中，并混合均匀，将混合液放入温度为60摄氏度水浴两小时，之后将其取出放至室温，加入正己烷以及饱和氯化钠溶液各两毫升，将混合液进行三分钟漩涡混匀，并静止30分钟，之后进行十分钟离心，离心速度为每分钟3000转，取上层离心液加入1.5毫升正己烷，之后用氮气将其吹干，用0.2毫升环己烷溶解，取1微升上述溶液进行分析。

2.2液相色谱法采空腹静脉血离心取上清分成两个1.5毫升,用75%的乙醇60℃下除去血清中与FEA结合的白蛋白(不影响血清中的胆固醇酷和磷脂的脂肪酸),无需常规的分离步骤,应用2-硝基苯麟盐酸盐(2-NpH.HCl)作为衍生试剂,在l一乙基一3一(3一二甲基氨丙基碳化二亚胺)盐酸盐(1-EDC.HCl)的催化下,直接衍生血清中的FEA,形成不挥发的能在紫外一可见光区产生吸收的脂肪酸的麟盐衍生化物,再用磷酸缓冲液酸化增加各种脂肪酸的分离度,衍生化的脂肪酸用正己烷萃取法与其它的酞麟和干扰成分分离出来,氮气吹干后甲醇定容,应用C18反向色谱柱进样30分钟内洗脱分析测定。

2.3酶法1.血清样本。采集待测患者清晨空腹静脉血进行酶法游离脂肪酸测定；2.试剂及仪器。采用日本积水医疗株式会社生产的血清游离脂肪酸酶法试剂盒、质控及干扰物、校准物，全自动生化分析仪为日本日立公司生产，型号为7170A；3.酶法血清游离脂肪酸的不精密度试验。参照美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)颁布的EP5-A[3]文件方案进行操作。收集低高值2水平血清游离脂肪酸混合血清。连续测定20天,每天测定两批,批间间隔的时间不少于2小时,每批对样品做双份测定,取均值,计算批内、批间、天间及总不精密度(cv%)；4.酶法血清游离脂肪酸的回收试验。基础样本:向0.9毫升低浓度游离脂肪酸血清样本中加入浓度为0.9%、剂量为0.1毫升的NaCl溶液，回收样本：向0.9ml低浓度游离脂肪酸血清样本中分别加入浓度为250uEq/L、500uEq/L、1000uEq/L的游离脂肪酸标准溶液，剂量均为0.1毫升，并对其进行混合均匀，之后重复检测2次,计算两次检测平均值，计算公式为:P=(X1-X0)/M×100%,其中X1为混合样本的检测平均值,P为回收率,M为添加的标准液浓度，X0为基础标本浓度；5.酶法FFA的干扰试验。参考NCCLSEP7-A2[4]文件方案进行操作：在健康人混合血清中各自添加一定量的维生素C、胆红素血红蛋白、脂肪乳，同时测定这些标本的FFA浓度，每个浓度测定2份,结果取均值，以干扰程度为10%作为该系统对干扰物的最高限；6.最低检测限试验。参照NCCLSEP17-A评价方案,用剂量为1毫升蒸馏水为空白标本进行检测，一次连续测定20次,对于离群的可疑值采用G检验方法进行验证；7.线性范围测定。参照美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)颁布的EP6-A评价方案，用高浓度血清和低浓度血清，配置20个浓度梯度的溶液进行检测，同时测定两次每个浓度的标本，计算两次测定结果的平均浓度。

3讨论

对人体血清中游离脂肪酸含量进行检测，能够尽早发现患者血清中游离脂肪酸的异常情况，最终起到预防及尽早对相关疾病进行治疗的目的[5]。临床中对人体血清游离脂肪酸的检测方法主要有气相色谱法、液相色谱法以及酶法等。

经研究可知，临床最常用也最简单的血清游离脂肪酸检测方法为气相色谱法，而使用酶法进行血清游离脂肪酸检测是最准确的检测方法，临床进行血清游离脂肪酸检测时，应根据患者实际情况以及临床需要选择合适的检测方法。

参考文献

[1]陆瑞芳,吴岷.长链多不饱和脂肪酸对恶性肿瘤的作用[J].肿瘤,2009,23(6):525-5261

[2]陈亚飞,程速远,孙宇,等.毛细管气相色谱法测定海狗油胶丸中X-3多不饱和脂肪酸的含量[J]1药物分析杂志,2011,24(5):499-501.

[3]NCCLS.EP5-A2:Evalutionofprecisionperformanceofquantitativemea-surementmethods;approvedguideline-secondedition[S].WaynePA,2010，12（2）：225-226.

[4]NCCLS.EP7-A2:Interferencetestinginclinicalchemistry;approvedguideline-secondedition[S].WaynePA,2010，7（6）：259.

[5]邵健华,高妍.游离脂肪酸对大鼠骨骼肌细胞胰岛素受体与胰岛素底物?的表达和酪氨酸磷酸化的影响[J].北京医科大学学报,2008，30(5):4251.