酶联免疫吸附试验检测乙肝表面抗原的质控分析

酶联免疫吸附试验检测乙肝表面抗原的质控分析

朱惠芳

朱惠芳

（江苏省江阴市南闸卫生院检验科214405）

【摘要】目的探讨酶联免疫吸附试验（ELISA）检测乙肝表面抗原（HBsAg）的影响因素，提高质控水平。方法采用ELISA标准步骤检测HBsAg，分析、总结检测过程可能存在的影响检测质量的因素和质控方法。结果血清标本、试剂盒、操作过程、结果研读、药物等因素是影响ELISA检测HBsAg质控的主要原因，加强质控可以提高检测质量。结论针对ELISA检测HBsAg的影响因素加强质量控制，可以提高检测质量，为临床提供可靠参考。

【关键词】ELISA；HBsAg；影响因素；质控

【中图分类号】R446.11【文献标识码】B【文章编号】1007-8231（2011）09-1307-02

乙型病毒性肝炎（乙肝）是乙肝病毒经过血液传播的疾病，具有很强的传染性，影响患者的肝脏功能和生活质量[1]，因此，加强乙肝的检测对及时治疗具有重要临床意义。酶联免疫吸附试验(ELISA)是检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的常用方法[2]，具有快速、简便等特点，但检测结果的影响因素较多，现报告如下。

1ELISA检测方法

选择我院门诊和住院患者的血清样本，质控品来自卫生部临床检验中心，乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒(酶联免疫法)由上海科华生物技术有限公司提供，应用96孔680型酶标仪，严格按照说明书进行操作。ElISA出现蓝色判为阳性。

2影响因素

2.1血清标本因素检验科人员接收血清标本要仔细核对和检查，不符合要求的标本要重新抽血送检，如乳糜血、脂血增大血清黏度，屏蔽抗原抗体反应，导致假阴性结果。标本保存条件和时间影响检测结果的准确性，HBsAg室温下第九天、4～8℃第十四天开始出现溶血变化，释放出具有酶活性的血红蛋白，容易出现假阳性结果。因此，标本应充分凝固后分离血清，若标本未充分凝固或凝固不全，标本中残留的纤维蛋白原易致假阳性结果，如条件不允许，应及时把标本放置低温冰箱中。

2.2试剂因素不同生产厂家试剂的灵敏度和特异度存在差异，购买试剂时应选择与检验设备配套的公司，并保证公司产品的质量合格。试剂应保存在4℃冰箱内，应用前试剂盒必须先平衡至室温，即在室温下放置20～30min后再进行测定，可使反应微孔内的温度迅速达到所需温度，利于后续测定。剩余试剂保存在4℃冰箱内，下次使用前要仔细检查是否变质，过期产品不应使用。

2.3操作因素

2.3.1加样ELISA加样前必须将试剂盒平衡至室温后才能开始操作，移液器校正后做标准量手工加样，样品量适中，尽量做到准确和均一。加样过程应使加样器垂直，避免接触包被板底部，不要加在孔壁上部非包被区域，且液体不可溅出和产生气泡。全自动仪器加样时，加样量要足够，最好选用带有指示剂稀释试剂作为样品加注与否的监测指示，仪器要定期校准，避免实验重复性差。

2.3.2温育ELISA检测结果依据色彩深浅，温育时间是保证检测结果准确性和灵敏度的关键环节。ELISA法抗原抗体反应所需温度一般控制在37℃，时间严格按照说明书的操作规程。96孔酶标板易产生边缘效应，酶标板周围与内部孔升降温速率不同，造成周边孔与内部孔温差较大，为防止边缘效应，最好应用水浴，并贴密封膜防止污物浸入。

2.3.3冼涤洗涤液要新鲜配制，严格按照说明书配制。洗涤目的是分离结合与未结合的抗原抗体复合物及酶标记物，清除非特异性吸附的蛋白质、血球、细菌中酶的干扰。手洗对结果影响较大，半自动与全自动洗板机使用恰当对结果影响轻微，血清中残留的的纤维蛋白丝或洗涤液析出的结晶易使洗板机针小孔全阻塞或半阻塞状态，造成未结合标记酶洗脱不彻底，影响结果。

2.3.4洗板显色：最恰当的洗板次数为5～6次，彻底清洗残留在孔内的酶标记物、过氧化酶等。显色终止15min内酶标仪读取，酶标仪不应置于阳光或强光照射下，先预热15～30min再进行测试。

2.4结果判断因素

ELISA测定是定性测定，当血清中HBsAg浓度过高时会引起钩状效应，影响结果判断，若血液中血脂过高或血粘度过大，也会影响结果。因此，应结合临床表现和实验室检查进行综合诊断。

2.5药物因素

乙肝免疫球蛋白与HBsAg形成复合物，影响HBsAg的检出，乙肝疫苗接种后1～2周内，血清中可检出HBsAg成份，形成一过性的HBsAg阳性等。

3质控措施

质控原则是建立严格的审核制度和规范的操作规程，科学研读检测结果，判断时药结合临床表现和其他实验室检查结果[3]，每次检测时做好双份质控品的监测，出现异常结果及时与临床医生沟通，确保结果准确、可靠。具体质控措施是针对影响检测结果的影响因素进行总结、分析，尽量避免和减少干扰[4]。

4讨论

ELISA基本原理是将已知抗原(或抗体)结合到某种固相载体表面，测定时将受检标本(抗原或抗体)和酶标抗原(或抗体)按不同步骤与固相载体表面的抗原或抗体进行反应，再用洗涤方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其它物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检的抗体或抗原量成一定比例，再加入酶反应底物变为有色产物后，根据其颜色反应的深浅进行定性或定量分析，以了解被测标本中抗体或抗原含量。ELISA检测方法简单，无需特殊设备，深受广大基层医院检验科欢迎。但由于受ELISA手工加样、温度、温育时间、洗板、显色等因素的影响，导致有一定的假阳性或假阴性结果，影响临床诊治[5]。本文同过对ELISA影响因素分析和总结，针对性进行质量控制，加强制度管理和人员培训，减少或避免人为因素影响，提高结果准确性，为临床诊断提供可靠参考。

参考文献

[1]张蕾,周晶珠,王立.乙型肝炎分子生物学检验方法的应用及质量控制[J].中国现代医生,2009,47(14):98-99.

[2]杜艳霞.酶联免疫吸附试验测定操作的体会[J].中国实用医药,2009,4(27):139-140.

[3]李凤侠,范亚敏,范永丽.酶联免疫吸附试验一步法检测HBsAg的分析体会[J].中国误诊学杂志,2009,9(16):3875-3876.

[4]王静.酶联免疫吸附试验法检测乙型肝炎病毒表面抗原的影响因素分析[J].检验医学与临床,2010,7(7):671-672.

[5]邵维杰,肖艳群,陈慧英,等.酶联免疫吸附试验定性检测乙肝表面抗原测量不确定度评定的探讨[J].检验医学,2009,24(7):545-547.