两种检测乙肝血清学标志物方法的应用比较

两种检测乙肝血清学标志物方法的应用比较

祁双宝

祁双宝（河南省焦作煤业集团中央医院河南焦作454000）

【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2011）46-0163-02

【摘要】目的研究时间分辨荧光免疫测定法(TRFIA)定量检测乙型肝炎血清学标志物(HBV-M)与酶联免疫吸附试验(ELISA)定性检测HBV-M的临床应用价值及关系。方法采用TRFIA和ELISA法分别检测236份血清标本HBV-M，对结果进行分析，比较两种检测方法的结果异同。结果TRFIA法的HBeAb检测结果与ELISA法比较差异有统计学意义(P<0.05)，而其他单个HBV-M检测项目比较差异均无统计学意义(P>0.05)。另外，TRFIA法和ELISA法两种检测方法在HBsAg、HBeAb、HBcAb3种血清学标志物，HBsAg、HBcAb2种血清学标志物组合模式中阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论TRFIA检测HBV-M比ELISA法敏感，可作为乙型肝炎病毒指标定量的种常规方法，能为临床检测诊断与疗效监测、预后判断和科学试验以及乙型肝炎疫苗免疫力的评价和高危人群预防提供及时准确的实验信息。

【关键词】乙型肝炎病毒血清学标志物时间分辨荧光免疫测定法酶联免疫吸附试验

1对象选择与研究方法

1.1对象选择

所选病例均为09年至10年本院收治的乙肝或疑似乙肝病例，共180例，男女比例为：男110例，女70例，年龄19～60岁，平均(32.1±10.2)岁。

1.2研究方法

1.2.1试剂采用上海新波生物技术有限公司生产的HBsAg，HBsAb，HBeAg，HbeAb，HBcAb定量检测试剂盒和上海荣盛有限公司生产的ELISA法定性试剂盒。

1.2.2分析仪器采用Anytest2000型时间分辨荧光免疫分析仪和ELx-800酶标仪。

1.2.3检测方法

所有病例均在空腹的情况下，从静脉抽取血液5毫升，取出后当即用仪器分离血清，分离后采用定量和定性检测。采用TRFIA法测定时，首先对试剂盒内的乙肝线性参比体划出标准曲线，然后用软件Anytest2003得出各标准曲线皆符合工作要求;采用ELISA法需先设定阴阳性对照。然后，应用时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)法分别对180个病例样本进行乙肝病毒五项的血清标志物定量与定性检测，整个操作规程和最终的结果判断均按说明书和指导书要求操作。

1.3结果判定ELISA法:HBsAg、HBsAb、HBeAg均为样本OD值/阴性对照，平均OD值≥2.1判断为阳性，否则为阴性。HBeAb为COV=(阴性对照平均OD值+阳性对照平均OD值)/2，样本OD值≥COV为阳性，<ml,HBcAb正常值0-0.1NCUml,HBeAb正常值0-1.5NCUml,HBeAg正常值0-0.03NCUIA定量HBsAg正常值0-0.5ng>。

1.4统计学处理以上所有检测数据经由SPSS13.0软件进行分析，方法学间数据比较用x2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果分析

2.1TRFIA法和ELISA法检测结果

TRFIA法的HBeAb检测结果与ELISA法比较差异有统计学意义(P<0.05)，而其他单个HBVM检测项目比较差异均无统计学意义(P>0.05)。

2.2两种方法检测阳性结果模式统计对比：见表1、表2。

TRFIA法和ELISA法检测组合模式结果的比较1(例)表1

3讨论

乙型肝炎长期以来一直是全球广泛传播的传染病，具有影响面广，感染人数多的特点，并且到目前仍未得到有效的控制。以乙肝病毒感染数和HBsAg携带率估算，全世界HbsAg的携带者可能就有3.5亿人之多，这其中亚、非、拉等经济欠发达地区优势重灾区，据估算人说大概接近2.8亿，占到了总携带人群的80%以上。根据我国今年的流行病学调查显示，乙肝在我国属于发生率较高的传染病之一，据不完全统计我国的HbsAg病毒携带者约占总数的1/3，占亚、非、拉地区的1/2。

据此我们不难发现，我国是乙肝病毒流行的重灾区，对乙肝病毒的防治已经到了刻不容缓的地步，它直接影响到我国国民的整体身体素质和健康，全面做好防治乙肝工作才能为经济发展和社会进步提供有力的保障。

当然，由于我国人口众多，各地区经济发展状况还存在较大的差异，这项工作任重而道远。应当首先从乙肝病毒的筛查工作入手，在确定未染病的健康人群中广泛的进行接种免疫，这是目前最有效的预防乙肝的方法。要想做好这一环的工作，首先就要有一套快速、准确、灵敏、简便的检测方法，过筛无偿献血，人员、从业人员体检及婚检，临床上作病程进展的评估及疗效评价等。传统的ELISA检测法，对血清标志物进行定性检测并判断其呈阴性还是阳性，这种方法的缺陷就在于它无法知道浓度的大小，这给临床诊治和用药都造成了很大的不便。而HBV血清标志物定量检测能较为准确地反映其血清中的含量，可以间接反映体内HBV复制活跃程度，对临床药物疗效评价具有重要意义。

全面准确的分析方法，会给临床诊断治疗带来很大的改观。而时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术就是这样一种方法，它是一种新型的免疫标记技术，其灵敏度高达10-18，线性范围宽(10-12～10-18mol/L)，高稳定性(<±1%)。TRFIA实际上是在荧光分析的基础上发展起来的，它是一种特殊的荧光分析方法，以镧系元素为标记物，又称“解离-镧系荧光免疫分析”。在传统的异硫氰酸荧光素标记的荧光免疫分析中，其激发光波长和荧光光谱的Stokes移位较小，仅28nm，有由于激发光谱和发射光谱常有部分重叠，在测量时，不可避免产生干扰。而用镧系元素标记抗原抗体的荧光免疫分析则利用了波长和时间两种分辨技术，因稀土离子本身激发光谱宽(300～500nm)荧光发射光谱窄(甚至不足10nm)，通过时间延迟，去除非特异荧光干扰，在固定时间检测特异荧光，解决了自然背景干扰问题，明显提高检测灵敏度，并通过激发光与发射光之间较大的Stokes移位，很容易对激发光和发射光进行波长分辨，明显排除了非特异荧光的干扰，提高了光谱的分辨率，使特异性明显增强。

在临床的实际使用当中，表面抗体和核心抗体的定量检测，意义重大。这方面我国医学界已经做出了很大的努力，相关仪器和试剂已能够完全国产，不在依赖国外，这也就大大的降低了检验的成本。TRFIA因其突出的高敏感性、特异性，无放射污染等特点，在乙肝定量检测当中被逐步重视，并且越来越广泛的应用。

我们的研究已经表明TRFIA检测方法比ELISA法更为敏感，是一种非常有效的乙肝病毒定量检测方法，能为临床检测诊断与疗效监测、预后判断和科学试验以及乙型肝炎疫苗免疫力的评价和高危人群预防提供及时准确的实验信息。

参考文献

[1]郭淑英,等.固相时间分辨荧光免疫分析螯合剂中间体的合成[J].中国卫生检验杂志，2006,16(3):264-266.

[2]陈慧英,张锦锋,岑小鹏等.ELISA检测乙型肝炎HBsAg室内质控血清的试剂和使用[J].上海医学检验杂志,2000,15(4):203-205.

[3]黄宪章,石文,庄俊华等.TRFIA与ELISA法检测乙肝病毒血清学标志物结果的比较[J].现代检验医学杂志,2008,23(1):59.

[4]雷秀霞,陈小辉,徐邦牢等.TRFIA、MEIA、ELISA法检测HBV-M结果分析[J].中国医师杂志,2004(9):45-47.