KAI-1、 MMP-9在子宫内膜异位症中的表达及意义

KAI-1、 MMP-9在子宫内膜异位症中的表达及意义

张雪梅 初篮 张莹 马天好 关鑫 齐月

黑龙江省大庆市人民医院 163000

［摘要］ 目的：探讨肿瘤转移抑制基因KAI-1、基质金属蛋白酶9（MMP-9）在子宫内膜异位症（Endometriosis简称内异症EMS）异位内膜中的表达意义。方法：对本院60例内异症异者（研究组）及30例正常子宫内膜者（对照组）,应用免疫组织化学SP 法检测不同子宫内膜组织中KAI-1 、MMP9的表达,分析两组KAI-1 、MMP9表达水平及相关性。结果：KAI-1在研究组中低表达，而MMP-9呈高表达；KAI-1在对照组中高表达，而MMP-9呈低表达；两组中KAI-1 、MMP9表达水平比较差异均统计学有意义（P＜0.05）。内异症和正常子宫内膜组织中KAI-1、MMP-9水平均呈负相关（r=-0.402，-0.550，P＜0.05），结论：KAI-1、MMP-9在内异症组织中表达呈负相关，其可能参与了EMS异位内膜的转移和侵袭中的作用，促进内异症的发生、和发展。可能成为EMS预后和复发的监测指标之一。

［关键词］ 原癌基因蛋白质类/代谢；基质金属蛋白酶9/代谢；基因，肿瘤抑制；子宫内膜异位症/代谢

KAI-1、MMP-9 In endometriosis sickness expressiong and significance

ZHANG Xue-mei CHU Lan ZHANG Ying MA Tian-hao GUAN Xin QI Yue

Daqing People's Hospital Heilongjiang 163000

［Abstract］ Objective: To discuss the expression of tumor shift suppressor gene KAI，matrix metal proteinase9(MMP-9) in endometriosisi sickness in dystopia internal membrane and its significance.Methods In53 patients and 30 healthy controls，the expreeion of KAI-1，MMP-9 in the endometriosisi was detected with lmmunochemistry SP method，and the relationgship was analyzd.Results LAI-1 had lowexpressed while MMP-9 lowly expressed,and the differences between two groups were remarkably significant(P＜0.05).KAI-1 and the MMP-9 expressed showed negative correlation between two groups.Conclusiongs KAI-1 and MMP-9 was negatively expressed in EMS，which may piay a role in the EMS prognosis.KAI-1 and MMP-9 may be sered as the prognsis and monitor markers for EMS

［Key words］ ：Proto-oncogene protieins/ME；Metallpprotienase 9；Genes，tumor suppresso；Endometriosis/ME

子宫内膜异位症（Endometriosis简称内异症EMs）是指子宫内膜腺体和间质出现在子宫体以外部位。迄今为止，内异症的发病机制仍不清楚。内异症最显著的特征是其在病理上属良性病变，却有类似恶性肿瘤的发生侵袭、转移的特性。KAI-1基因是肿瘤转移抑制基因,调节细胞的粘附,使肿瘤细胞不易脱离，抑制肿瘤浸润和转移。目KAI-1的研究领域主要集中在恶性肿瘤中。而在EMS中的研究国内外少见。基质金属蛋白酶9（matrix metal proteinases 9，MMP-9）经研究表明是EMS浸润和转移的细胞因子之一。本研究采用免疫组化SP法，检测KAI-1、MMP-9在异位内膜及正常内膜的表达及相关性，进一步探讨EMS的发病机制。

1 材料和方法

1．1 材料 材料选择2009年1月至2016年3月哈医大五院妇产科选择子宫内膜异位症患者60例为实验组，年龄21-45（35.6+-1.1）岁,术后病理证实均为EMS。选择同期门诊体检行诊刮术的患者30例（分泌期15例，增生期15例）为对照组，年龄18-48（33+-0.8）岁，均经病理证实为正常子宫内膜而无病变，实验选取的患者均无生殖系统肿瘤及其他内外科合并症，且术前三个月内均未使用性激素及内异症药物。

1.2 方法

1.2.1 主要试剂：KAI-1鼠抗人单克隆抗体浓缩液购自美国SCBT公司；MMP-9鼠抗人单克隆抗体购自福州迈新生物技术公司

1.2.2 实验方法：将选取的病例的组织蜡块切片，先用HE染色法初步筛选出典型的标本，再采用SP法，严格按照试剂说明进行试验，以正常子宫内膜腺体及间质阳性片为对照，以0.01mol/L磷酸盐缓冲溶液（PBS）代替一抗作为阴性对照，检测KAI-1 、MMP-9在EMS中的表达。

1.2.3 结果判定：以出现棕黄色颗粒且其着色强度高于背景非特异性染色者为阳性表达细胞，将免疫组化切片置于Olympus显微镜下（HE×100）观察，每例随机选取6个完整而不重叠的视野进行半定量分析，测定KAI1及MMP9免疫组化反应阳性颗粒的光密度（总密度/扫描面积），以6张图像的平均光密度值代表该例KAI1及MMP9蛋白的表达水平。

1.3 统计学处理：数据用SPSS13.0软件包进行分析,计量资料用（ ±S）表示，采用t检验，直线相关分析，P﹤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组不同子宫内膜组织中KAI-1、MMP-9表达水平比较

KAI-1在研究组中低表达 (图1)，对照组高表达，出现较多棕黄色颗粒（图2），研究组中KAI-1蛋白的表达水平明显低于对照组（t=-3.387，P=0.001）；MMP-9蛋白在研究组中高表达（见图3），而在对照组中低表达（见图4）。研究组MMP-9的表达水平明显高于在对照组且（t=3.352，P =0.002）。对照组增生期和分泌期中KAI-1、MMP-9表达水平比较，其差异均无统计学意义（P＞0.05），见表1。

图1 KAI-1蛋白在研究组中的阴性表达（SPx100） 图2 KAI-1蛋白在对照组中的阳性表达（SPx100）

图3 MMP-9蛋白在研究组中的阳性表达（SPx100） 图4 MMP-9蛋白在对照组中的阴性表达（SPx100）

KAI-1与MMP-9的相关性分析

两组不同子宫内膜组织中KAI-1、MMP-9表达水平均呈负相关（r=-0.402，-0.550，P＜0.05），见表1。

表1 两组不同子宫内膜组织中KAI-1及MMP-9表达水平比较（ ±S）

组别 例数 KAI-1　 　 MMP-9　　　　　

对照组 30 0.1740±0.0052 0.1701±0.0036

增生期 15 0.1739±0.0049 0.1703±0.0040

分泌期 15 0.1740±0.0057 0.1700±0.0031

研究组 60 0.1703±0.0041 0.1728±0.0037

3 讨 论

EMS是育龄妇女的常见病之一，发病率为10％～15%［1］，目前的治疗方法除根治性手术外，疗效均不理想。复发率高。严重影响妇女的生活质量。其显著特征是在病理上属于良性病变，却有类似恶性肿瘤发生侵袭、转移的特性。近年来子宫内膜细胞侵袭、转移和新生血管生成被认为是EMS重要的发病机制［2］，基质金属蛋白酶9在许多恶性肿瘤呈高表达，可通过降解基底膜及细胞外基质而促进肿瘤细胞侵袭和转移［3-4］，本次实验再次验证在EMS中MMP-9呈高表达，与李艳［5］等研究的结果一致。提示异位内膜具有更强的产生MMP-9的能力，从而使异位内膜具有更强的水解能力来降解基底膜，破坏腹膜间质细胞的连接。使异位内膜在腹腔内种植、生长并使病灶不断扩大。KAI-1首先证实在前列腺癌细胞中有抑制转移的作用，后来发现许多恶性肿瘤，如胃癌、直肠癌、子宫内膜癌、肺癌中都存在其表达下降或缺失,目前公认是一个肿瘤抑癌基因［6-7］。但KAI-1在EMS的研究中，目前尚无报道（黑龙省科技查新报告，报告编号：2015150201560N-20536）。KAI-1在研究组中呈阴性表达，对照组中呈阳性表达，提示在异位病灶形成过程中KAI-1基因的表达受到抑制,使异位内膜具有较正常内膜更强的侵袭、种植和生长能力,这也提示了可能KAI-1抑制了EMS的转移、种植的特性。这与KAI-1在其他肿瘤组织中表现出的特性相吻合。本文资料表明，对照组增生期和分泌期中KAI-1及MMP-9表达水平比较差异均无统计学意义（P＞0.05），可能与两组样本量少有关。文中两组中KAI-1及MMP-9表达水平均呈负相关（r=-0.402，-0.550，P＜0.05）。提示KAI-1与MMP-9表达关系密切，其可能参与EMS发生、发展，在内异病灶形成中，KAI-1表达受到抑制则减弱了对 MMP-9表达的抑制作用 ,使异位内膜组织水解能力增强 ,异位内膜基底膜降解 ,促进异位内膜种植生长 ,因此，笔者认为EMS组织中KAI-1呈低表达、MMP-9呈高表达的患者可能是发生EMS的高危人群，可望成为预测和诊断EMS的新方法，对EMS的诊治、预后和复发具有指导意义。

参考文献

［1］.Matsrese G，De P，et al.Pathogenesis of endometriosis：naturalimmunity dysfuncting or autoimmune disease. Trends Mol Med，2013 9(5)：223-228.

［2］.Say LM.Role of endometriosis in cancer and tumor development.Ann NY Aca-dsci,2014.955(1):281-292.

［3］.Akgul PS,Bevilacqua G,Kopper L,et al.Evidence for a novel gene associated with low tumor metastatic potential.J Natl Cancer Inst，2011 80∶200–204.

［4］.Rosengard AM,leone A,Stabc JA,et al.Indentification of a second human nm23gene,nm23H1.Cancer Res，2015，47:328～332.

［5］.李艳，郎景和，王立杰等MMP-9及TIMP-1在子宫内膜异位症中患者腹水及血清中的表达，现代妇产科进展，2005，14（4）：293-296.

[6 ] 　Dong J T , Lamb PW , Rinker2Schaeffer CW , et al.KAI1 , a metastasis suppressor gene for prostate canceron human Chromosome11p11. 2 [ J ] . Science ， 2011，268 (5 212) :8842886.

［7］.Postal EH,Multiple bioschemical activities of NM23/NDP kinase in gene regulation,J Bioenerg Biomember,2013，35(1):31-40.