葡萄皮中白藜芦醇的提取工艺及其对大鼠血脂水平的影响

葡萄皮中白藜芦醇的提取工艺及其对大鼠血脂水平的影响

周浩 ,王秀兰

江苏省连云港中医药高等职业技术学校 江苏连云港 222002

摘要 ［目的］研究葡葡萄皮中白藜芦醇的提取工艺，观察所得提取物对大鼠血脂水平的影响。［方法］采用乙醇溶剂对葡萄皮中的活性物质白藜芦醇进行提取，用大孔树脂进行纯化。建立高血脂大鼠模型，以低、中、高剂量连续灌胃高血脂大鼠45天后，测定血脂相关指标，同时设立空白对照组及模型对照组。评价葡萄皮提取物对高血脂大鼠血脂的影响。结果 8倍量60%乙醇提取2次，每次2h，DC-1型大孔树脂纯化，提取物中白藜芦醇的含量是5.16%。葡萄皮提取物125mg/kg∙BW可以有效降低高血脂大鼠的血清甘油三酯、总胆固醇，降低大鼠血清低密度脂蛋白。结论 葡萄皮提取物可以降低高血脂大鼠的血脂水平。

关键词 葡萄皮、提取、血脂、大鼠

现有研究结果表明，白藜芦醇是植物（主要是种子植物）在遇到真菌感染、紫外线照射等不利条件时所产生的植物补体，对植物本身起保护作用，同时对人体也具有调节脂质代谢、抑制血小板聚集、保护心血管、抗炎、抗肿瘤等多种生物学活性和药理作用，具有很大的药用价值。白藜芦醇的提取一般以葡萄、落花生以及我国传统中药材虎杖、何首乌、桉叶、桑椹等植物为原料，但以葡萄特别是葡萄皮和葡萄籽中白藜芦醇含量最高^[1-2]。白藜芦醇在葡萄中含量较高，有研究表明，白藜芦醇在葡萄叶片、果梗、皮、籽中的含量要高于果肉果汁^[3]。本文研究从葡萄皮中提取白藜芦醇的工艺及葡萄皮提取物对大鼠血脂的影响。

1 材料

1. 1. 材料无水乙醇，国药集团化学试剂有限公司；葡萄皮。

1.2仪器 101-3A 型数显电热鼓风恒温干燥箱、DS-1型组织捣碎机、FSJ180-4型电子分析天平、R501型旋转蒸发器、721型分光光度计。

1. 2. 实验动物 SPF级Wisart大鼠，购于贵州医科大学实验动物中心[生产许可证号：SCXK（黔）2012-0001；使用许可证号：SYXK（黔）2012-0001]。

2 方法

2.1葡萄皮提取物的制备

目前常用提取物白藜芦醇的方法为：葡萄皮（渣）→乙酸乙酯/乙醇/丙酮等有机溶剂浸提→过滤→浓缩→浓缩液→上柱→洗脱→浓缩→冻干或喷雾干燥→成品^[3-4]。本实验采用安全性最好的乙醇做溶剂。^[5]葡萄皮白藜芦醇的最佳工艺条件为料液比1:12，乙醇体积分数60%，超声时间12min，水浴温度30℃，此时巨峰葡萄皮中白藜芦醇提取率为0.0149%。毕海丹^[6]等从葡萄皮渣中提取白藜芦醇时用乙醇浓度 80%，温度60℃，料液比1∶20，提取时间5h。优选结果经验证实验，获得较高得率为94.2ug/g。本实验工艺，采用60%乙醇作为溶剂，溶剂量为8倍，回流提取2次、每次2h，合并滤液过DC-1大孔树脂，用70%乙醇洗脱至无色，干燥即得葡萄皮提取物。

葡萄皮提取物中白藜芦醇含量测定按照《保健食品功效成分检测方法》“白藜芦醇的高效液相色谱测定法2”^[7]，检测结果5.16%。

2.2葡萄皮提取物对大鼠血脂的影响实验

按照国家食品药品监督管理局《关于印发抗氧化功能评价方法等9个保健食品功能评价方法的通知》（国食药监保化[2012]107号）附件6辅助降血脂功能评价方法的标准进行实验。

共50只大鼠，10只大鼠作为空白对照组给予维持饲料，40只大鼠作为模型对照组给予模型饲料（68.8%普通饲料、1%胆固醇、10%蛋黄粉、10%猪油、10%蔗糖和0.2%胆盐）。模型对照组给予模型饲料10天后，根据TC水平将模型对照组随机分成4组。设置低、中、高三个剂量组和模型对照组，三个剂量组分别为0.125g/kg.bw、0.25g/kg.bw、0.75g/kg.bw葡萄皮提取物灌胃大鼠。空白对照组和模型对照组灌胃给予相同体积的去离子水。空白对照组喂食维持饲料，模型对照组和三个实验剂量组喂食高脂模型饲料。连续45天后，处死大鼠，取血进行甘油三酯TG、总胆固醇TC、高密度脂蛋白HDL-C和低密度脂蛋白LDL-C项目检测。

2.3结果统计 采用SPSS 11.5统计软件进行结果处理。采用单因素方差分析与组间 LSD 检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。

3结果

3.1葡萄皮提取物对大鼠体重的影响：各剂量组实验初始、末期大鼠体重与模型对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）,见表1。

表1 葡萄皮提取物对大鼠体重的影响

注：与模型对照组比较：^*P＜0.05

2.2葡萄皮提取物对大鼠血脂含量的影响

2.2.1造模后大鼠血脂含量水平：与模型对照组比较，各剂量组大鼠血清TC、TG、HDL-C、LDL-C含量差异无统计学意义（P＞0.05）。空白对照组血清TC、TG和LDL-C显著低于模型对照组，差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）。见表1。

表1 实验前各组大鼠血清TC、TG、HDL-C、LDL-C含量比较（`x±S）

注：与模型对照组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01。

2.2.2实验后大鼠血脂含量水平：与模型对照组比较，各剂量组大鼠血清TG含量均显著下降，差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）；低、高剂量组大鼠血清TC含量显著下降，差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）；中、高剂量组大鼠血清LDL-C含量显著下降，差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）;空白对照组大鼠血清TC、TG和LDL-C含量显著低于模型对照组，差异有统计学意义（P＜0.01）。见表2。

表2 实验后各组大鼠血清TC、TG、HDL-C、LDL-C含量比较（`x±S）

注：与模型对照组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01。

4 讨论

白藜芦醇呈白色针状晶体，易溶于甲醇和乙醇，利用该性质可用溶剂提取白藜芦醇。采用乙醇作为溶剂获得白藜芦醇安全性较高。以8倍量60%乙醇提取2次，每次2h，DC-1型大孔树脂纯化，白藜芦醇含量为5.16%，获得较高的提取得率。此方法获得的葡萄皮提取物可以有效降低高血脂大鼠的血清甘油三酯、总胆固醇，降低大鼠血清低密度脂蛋白。结果证明葡萄皮提取物可以降低高血脂大鼠的血脂水平。

参考文献

[1]余慧琳.白藜芦醇的生理功能及其应用前景.生物学通报，2005，40（11）：12-13

[2]郜海燕，于震宇，陈杭君等.白藜芦醇功能和作用机理研究进展.中国食品学报，2006，3(1):411-416

[3]Lin Z Q,Cervinka V, et al. Managing selenium contaminated agricultural draginage water by the integrated on farm drainage management system:role of selenium volatilization[J].Water Research,2002,(36):3150-3160.

[4]刘苇芬.葡萄皮中白藜芦醇的提取及其功能研究.江西食品工业.2011年第3期：29-031

[5]张焕丽，李凡姝，马慧,等.巨峰葡萄皮中白藜芦醇提取工艺的研究.农产品加工.2016年9月,9(415):29-33

[6]毕海丹．白藜芦醇提取及分离纯化技术的研究进展[J]．食品工程。2009,13:15-19．

[7]保健食品功效成分检测方法/白鸿主编.-北京：中国医药出版社，2011.5（2012.1重印）