鸭跖草提取物通过调控NADPH氧化酶4(Nox4)抑制缺氧/复氧心肌细胞凋亡及炎性因子表达

(整期优先)网络出版时间:2020-10-11
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摘要目的探讨鸭跖草调控NADPH氧化酶4(Nox4)对缺氧/复氧(H/R)心肌细胞凋亡及炎性因子表达的影响。方法利用H/R诱导H9c2细胞损伤,用不同浓度鸭跖草提取物处理细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测TNF-α、IL-1β、IL-6水平,蛋白质印迹法(Western blot)检测Bcl-2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、Nox4蛋白表达,实时荧光定量PCR(qPCR)检测Nox4 mRNA表达。用si-Nox4转染H9c2细胞,并经H/R处理,观察抑制Nox4对H/R心肌细胞H9c2的细胞活性、凋亡,以及SOD、MDA、LDH和炎性因子的影响。用pcDNA3.1-Nox4转染H9c2细胞,并用鸭跖草提取物和H/R处理,评价其对H9c2细胞活性、凋亡,以及SOD、MDA、LDH和炎性因子的影响。结果H/R处理后,H9c2细胞的存活率和SOD活性显著降低,细胞凋亡率以及Caspase-3、Bax蛋白、MDA、LDH、TNF-α、IL-1β、IL-6、Nox4 mRNA、Nox4蛋白表达量明显增加(P<0.05)。10 μg/ml和20 μg/ml鸭跖草提取物显著提高H/R处理后H9c2细胞的细胞存活率、SOD活性,明显降低凋亡率和Caspase-3、Bax蛋白、MDA、LDH、TNF-α、IL-1β、IL-6、Nox4 mRNA、Nox4蛋白表达量(P<0.05),与抑制Nox4表达的作用结果一样。过表达Nox4能逆转鸭跖草提取物对H/R诱导的心肌细胞活性、SOD活性的促进作用,和对细胞凋亡以及对Caspase-3、Bax蛋白、MDA、LDH、TNF-α、IL-1β、IL-6表达的抑制作用。结论鸭跖草通过调控Nox4表达保护H/R诱导的心肌细胞损伤,提高细胞活性,并抑制细胞凋亡及炎性因子表达。