松果菊苷对大大鼠心肌细胞缺血再灌注损伤 (IRI)的保护作用及 microRNA-34a(miR-34a)表达的影响分析

松果菊苷对大大鼠心肌细胞缺血再灌注损伤 (IRI)的保护作用及 microRNA-34a(miR-34a)表达的影响分析

卢世文 余丽菲

广西医科大学第二附属医院 广西南宁 530007

摘要:目的探究松果菊苷对心肌细胞缺血再灌注损伤(IRI)的保护作用及micro?RNA-34a(miR-34a)表达的影响。方法以鼠胚胎H9c2心肌细胞为研究对象，并建立缺血再灌注损伤模型，分为对照组、松果菊苷低剂量组、松果菊苷中剂量组与松果菊苷高剂量组，对比细胞存活率、细胞凋亡率，并对比miR-34a水平变化情况。结果四组心肌细胞存活率比较存在差异P<0.05，由高到底依次为对照组、高剂量组、中剂量组、低剂量组。四组心肌细胞凋亡率比较，差异P<0.05，由高到底依次为低剂量组、中剂量组、高剂量组、对照组。四组miR-34a水平存在差异，P<0.05，由低到高依次为对照组、低剂量组、中剂量组与高剂量组。结论松果菊苷具有心肌细胞缺血再灌注损伤保护作用，其发生机制与miR-34a水平上调存在相关性。

关键词：松果菊苷；心肌细胞；缺血再灌注损伤；miR-34a；发生机制；

前言

急性心肌梗死为临床常见心血管疾病，极易造成死亡，挽救心肌关键之处为梗死动脉疏通、心肌血液供应恢复，避免血流灌注加重心肌损伤，诱发心律失常、新功能不全、心肌顿抑等，被称为心肌缺血再灌注损伤。microRNA-34a(miR-34a)是内源性非编码小RNA，对RNA降解促进或者RNA翻译抑制，对靶基因表达有效调控^[1]。研究指出，心血管疾病中RNAs大量表达，具有心肌细胞凋亡、肥大、纤维化等调控作用。本文将重点分析松果菊苷对心肌细胞缺血再灌注损伤(IRI)的保护作用及micro?RNA-34a(miR-34a)表达的影响。

1资料与方法

1.1细胞株、主要仪器和试剂

以鼠胚胎H9c2心肌细胞为研究对象，并建立缺血再灌注损伤模型，分为对照组、松果菊苷低剂量组、松果菊苷中剂量组与松果菊苷高剂量组。松果菊苷生产厂家是上海源叶生物技术有限公司。检验试剂盒生产厂家美国Ambin公司。使用设备：实时荧光定量PCR仪器，生产厂家：美国Beckman Couhe公司；流式细胞仪，生产厂家：Bekman Couhe公司。

1.2 建立模型

冻存心肌细胞取出，复苏，在血清（10%）DMEM培养基中接种，并在孵育箱内进行培养，细胞融合度为80%-90%时，更换培养基，不含血清，在孵育箱中培养，持续2h。

制备含药血清，选择36只SD雄性大鼠，体重是250g左右，分为四组，对照组不采用任何药物，低剂量松果菊苷组大鼠取2.5mg/kg松果菊苷静脉注射；中剂量组松果菊苷大鼠取5mg/kg松果菊苷静脉注射；大剂量松果菊苷组大鼠取10mg/kg松果菊苷静脉注射。大鼠在给药以后，由股动脉处抽取血液，离心操作，取得血清，过滤除菌，水浴灭火，补体0.5h。

1.3 观察指标

对比细胞存活率、细胞凋亡率，并对比miR-34a水平变化情况。

1.4统计学方法

使用SPSS 21.0软件对比分析，计量资料使用T检验，表达方式±；计数资料使用X2检验，表达方式%，差异P<0.05，统计学意义存在。

2 结果

2.1 心肌细胞存活率、凋亡率比较

四组心肌细胞存活率比较存在差异P<0.05，由高到底依次为对照组、高剂量组、中剂量组、低剂量组。四组心肌细胞凋亡率比较，差异P<0.05，由高到底依次为低剂量组、中剂量组、高剂量组、对照组。如表1。

表1：心肌细胞存活率、凋亡率比较（X±S，%）

2.2 miR-34a水平比较

四组miR-34a水平存在差异，P<0.05，由低到高依次为对照组、低剂量组、中剂量组与高剂量组。如表2。

表2：miR-34a水平比较（X±S）

3 讨论

心脏缺血一段时间后血液供应恢复过程中，极易出现心肌缺血再灌注损伤，表现为血压降低、梗死面积增大，发病机制不明确。当前，心肌缺血再灌注损伤防治方法为减小梗死面积，然而，很多方法与药物仅可延迟心肌损伤。 松果菊苷在抗衰老药物中存在，常见的有玄参、列当、地黄、管花肉苁蓉等， 其中管花肉苁蓉中松果菊苷约占30%，为重要的抗衰老成分。研究指出，松果菊苷具改善免疫力、保护肝脏、保护神经、抗癌、抗炎、抗氧化等作用，这也就表明松果菊苷具有心肌缺血再灌注损伤保护作用^[2]。miRNA广泛存在于动植物界，是细胞生理活动调节器，对靶mRNA结构域识别，互补结合靶mRNA，对靶mRNA翻译产生抑制，促进降解，对靶基因表达有效调节。研究指出，miRNA在心力衰竭、左室重塑过程中参与，包括miR-34a、miR-133等，其中miR-34a是miR-34家族中一部分，由p53对其直接调控，属于Bcl-2直接靶基因。有学者提出，miR-34a可促进癌细胞凋亡，发挥抗癌作用，且在心肌缺血再灌注损伤中，可促使心肌细胞凋亡减少，心肌损伤减轻^[3]。本次研究结果可见，四组心肌细胞存活率比较存在差异P<0.05，由高到底依次为对照组、高剂量组、中剂量组、低剂量组。四组心肌细胞凋亡率比较，差异P<0.05，由高到底依次为低剂量组、中剂量组、高剂量组、对照组。四组miR-34a水平存在差异，P<0.05，由低到高依次为对照组、低剂量组、中剂量组与高剂量组。

综上所述：松果菊苷具有心肌细胞缺血再灌注损伤保护作用，其发生机制与miR-34a水平上调存在相关性。

参考文献：

[1]蔡华,张领,李满生, 等.松果菊苷通过上调miR-34a减轻心肌细胞缺血再灌注损伤[J].中国循证心血管医学杂志,2018,10(6):739-742,745.

[2]王国涛,马国华,李家英, 等.松果菊苷调控Sirt1-FOXO1通路减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤[J].中国药师,2019,22(11):1976-1979,2002.

[3]张祥,杨洛,廖敏, 等.松果菊苷对db/db糖尿病小鼠心肌细胞脂质代谢紊乱的改善作用[J].医学研究杂志,2020,49(4):87-92.

项目名称：广西壮族自治区卫生健康委员会自筹经费科研课题；编号： Z20190622

课题名称：miR-34a对大鼠缺血缺氧心肌细胞凋亡的影响