miRNA-192靶向调控WT1在高糖诱导足细胞EMT中的作用

(整期优先)网络出版时间:2020-12-06
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摘要目的探讨miRNA-192靶向调控Wilms肿瘤蛋白1(WT1)在高糖诱导足细胞上皮-间充质转化(EMT)中的作用。方法以人肾小球足细胞为研究对象,将细胞分为4组:空白对照组、高糖组、阴性对照组、miRNA-192抑制组。采用Western印迹检测各组足细胞表面标志蛋白肾病蛋白(nephrin)、WT1、转化生长因子(TGF)-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达水平;qRT-PCR检测各组细胞miRNA-192、WT1、TGF-β1、α-SMA mRNA表达水平;采用双荧光素酶靶标实验验证miRNA-192与WT1基因的靶向关系。结果与空白对照组相比,高糖组和阴性对照组nephrin的蛋白表达水平显著降低,差异有统计学意义(F=444.404,P<0.05);miRNA-192相对表达量升高而WT1蛋白及mRNA表达水平均降低(F=184.216、243.543、107.898,P均<0.05);双荧光素酶报告基因实验分析结果显示,WT1是miRNA-192的靶基因;与空白对照组相比,高糖组和阴性对照组TGF-β1、α-SMA蛋白及mRNA表达水平均升高(FTGF-β1蛋白=69.014,P<0.05;Fα-SMA蛋白=87.644,P<0.05;FTGF-β1 mRNA=147.714,Fα-SMA mRNA=247.584,P<0.05)。与阴性对照组相比,miRNA-192抑制组nephrin的蛋白表达水平升高(t=16.519,P<0.05),miRNA-192相对表达量降低、WT1蛋白及mRNA表达水平升高(tmiRNA-192=10.533,tWT1=17.088、8.186,P均<0.05);TGF-β1、α-SMA蛋白及mRNA蛋白表达水平均降低(tTGF-β1蛋白=6.114,P<0.05;tα-SMA蛋白=7.941,P<0.05;tTGF-β1 mRNA=8.239,tα-SMA mRNA=8.481,P均<0.05)。结论miRNA-192靶向调控WT1促进糖尿病肾病的发展,其作用机制可能与足细胞EMT有关;抑制miRNA-192的表达可减轻高糖诱导的足细胞EMT。