HPLC法测定栀子提取物中栀子苷的含量分析

HPLC法测定栀子提取物中栀子苷的含量分析

朱梅 朱建文 韦东洋 朱潜荣

柳州潜荣健康产业有限公司 广西柳州市 545000

摘要：当前，多采用高效液相色谱法（HPLC）来测定中药材及其制剂当中成分的具体含量，仪器的灵敏度、定量方法、重复性等因素直接影响着测量结果的准确性。本文采用HPLC法对栀子提取物当中的栀子苷含量进行测定，结果得知，当栀子苷在24.5~98.3mg·mL^-1之间时，有着良好的线性关系，回收率达99.0%，表明HPLC法所得结果可靠且准确，有着较好的重复性，有助于控制栀子提取物质量。

关键词：高效液相色谱法；栀子苷；栀子提取物

栀子是一种典型的药食两用中药材，产地有四川、江西等，具有保肝利胆、抗炎镇痛等功效，而且还能用于治疗心脑血管疾病、神经系统疾病等。在栀子当中，主要成分为栀子酸、西红花素、栀子苷，而栀子苷为其主要药理成分^[1]。舒肝宁注射液作为一种中药注射剂，主要成分为栀子、茵陈、灵芝、板蓝根等，功效为保肝护肝、清热解毒等，此药有着复杂成分，为了能对此药成品质量的安全性、均一性进行有效控制，需要控制此些提取物的质量；对于其中的栀子而言，栀子苷为其主要活性成分，是舒肝宁注射液主治与功能相结合的重要成分。尽管药典当中已对测定栀子中栀子苷含量的方法，但在现实生产时，多采用醇沉淀、水提取方法，其与药典收录的方法不同^[2]。因此，需要与药典中的方法相结合，优化栀子提取物的含量测定方法。本文采用HPLC法来行此操作，现剖析如下。

1.资料与方法

1.1试验材料

岛津LC-10AT型高效液相色谱仪，日本A＆D公司GR-202型电子天平，中国药品生物制品检定研究院提供的栀子苷对照品（批号为0715-9909），贵州瑞和制药有限公司生产的栀子提取物，磷酸（分析纯），甲醇（色谱纯）。

1.2方法

1.2.1制备对照品溶液

取适量栀子苷对照品，将甲醇加入，制成溶液（每1mL含0.05mg）。

1.2.2制备供试品溶液

取适量栀子饮片，加水进行煎煮（2次），首次加水时，加入7倍于饮片的水，煎煮90min；而对于第2次加水，需加5倍于饮片的水，煎煮60min，合并滤液，并进行减压浓缩。分别将乙醇加入，使其在含醇量上分别达道60%、80%，最后减压，对乙醇进行回收。依据每30g浸膏加水到100g来计算，开展水沉处理。热处理水沉物（115℃），时间为45min，然后将其自然冷却至室温，并冷藏（0~10℃），时间≥10d。针对水沉液而言，用钛棒过滤（5µm），将沉淀物去除，便能最终得到栀子提取物过滤液。对1.5mL栀子提取物续滤液进行精密吸取，置入量瓶（25mL）中，加入甲醇到刻度，充分摇匀、滤过，便可得到。

1.2.3制备空白溶液

方法同1.2.2。

1.2.4色谱条件

迪马公司C18柱（250mm×4.6mm，5µm）；将甲醇-水-磷酸（25:75:0.05）当作流动相；柱温为40℃；检测波长为238nm；进样量为10µL；流速为1.0mL/min。

1.2.5线性关系考察

采用对照品溶液开展线性范围试验，依据上述色谱条件对栀子苷峰面积进行测定。将峰面积当作纵坐标，而把对照品溶液进样量当作横坐标；开展线性回归分析，方程：16136.38+862812.27X=Y，相关系数r=0.9996，进样浓度区间为24.5~98.3mg·mL^-1，也就是进样量在此范围内，与峰面积之间的线性关系良好。

2.结果

2.1精密度结果

吸取10µL栀子苷对照品溶液（浓度是49.1µg·mL^-1），进行6次重复进样，峰值面积441318，RSD0.17%，此些结果证实其有着良好的精密度。

2.2重复性结果

景区栀子提取物，依据上述方法制备供试品溶液6份，然后依据上述色谱条件进行测定，将峰面积以及色谱图记录下来，结果241.58mg·g^-1，RSD为0.28%，表明有着良好的重复性。

2.3稳定性结果

取适量栀子提取物，依据上述制备方法制成供试品溶液，分别在0h、0.5h、1.5h、6h、16h、24h等时间点进样，将峰面积记录下来，结果得知，进样栀子苷峰面积均值为499501，RSD1.56%，提示溶液在24h内维持稳定。

2.4加样回收率试验结果

吸取已经知晓栀子苷准确含量的栀子提取滤液，共计6份（1.5mL/份），分别置入到量瓶当中（100mL），加水到刻度，充分摇匀；然后吸取其中的0.8mL，置入到量瓶（25mL）中，将1.0mL对照品溶液分别加入，再将甲醇加入到刻度，匀速摇匀，且进行滤过处理。依据方法中所给出的色谱条件来进行处理，将栀子苷回收率计算出来，结果得知，此方法有着良好的回收率。

2.5样品测定结果

选取10批栀子提取物，依据上述色谱条件对其中的绿原酸含量进行测定，得知其中栀子苷的含量为225.93mg/g（依据总固体来折算），见表1。

表1 测定样品含量的结果

3.讨论

有报道^[3]指出，栀子苷所对应的最大吸收波长有两种，其一为240nm，其二是238nm，取适量栀子苷对照品溶液，在特定波长段（190~400nm），开展紫外光谱扫描（20min），从中得知，其最大吸收波长是237nm，因此，测定波长选237nm。在选择流动相时，在实验过程中，选择了流动相，其中，采用甲醇-水-磷酸、甲醇-水-磷酸有着并不好的流动相；而甲醇-水-磷酸时，有着并不对称的栀子苷峰形^[4]。所以选择甲醇-水-磷酸（实验条件下），可得到较好的峰型，而且样品分离度也较好，出峰时间恰当。经本次研究得知，采用HPLC法对栀子提取物当中的栀子苷含量进行测定，准确且可靠，有助于含有此成分中成药质量标准的提升。

参考文献：

[1]翟永松, 杜守颖, 陆洋,等. 三七总皂苷对栀子提取物中栀子苷大鼠肠吸收的影响[J]. 中华中医药杂志, 2019, 025(003):459-462.

[2]李建宇, 徐冰, 张毅,等. 近红外光谱用于大孔树脂纯化栀子提取物放大过程的监测研究[J]. 中国中药杂志, 2016, 041(003):421-426.

[3]杜守颖, 陆洋, 姚宗玲,等. 醒脑静中各成分对栀子提取物中栀子苷大鼠鼻腔吸收的影响[J]. 中国实验方剂学杂志, 2017(04):156-160.

[4]徐浩淇, 杨世林, 章军,等. 动态优化方法在蓝芩口服液提取工艺优化中的应用[J]. 山地农业生物学报, 2015(02):43-46.

作者简介：

朱梅（1979-01），女，汉族，籍贯：广西柳州市，当前职务：工程师，当前职称：工程师，学历：本科，研究方向：生物工程