一测多评法同时测定舒肝颗粒中2种成分的含量

一测多评法同时测定舒肝颗粒中 2 种成分的含量

刘晓俊

昆明市食品药品检验所 云南昆明 650032

摘要：目的：建立一种一测多评法同时测定舒肝颗粒中栀子苷、芍药苷的含量。方法：采用Thermo Acclaim120 C18色谱柱（250nm×4.6mm，5µm）;以乙腈-0.1%磷酸为流动相，梯度洗脱，流速为1.0ml/min;柱温30℃;检测波长为240nm，以栀子苷作为内标，计算出芍药苷的相对校正因子测定其含量。结果；2种成分在各自范围内线性关系良好(r>0.999），平均加样回收率104.1%--106.2%，RSD0.47%--1.02%，一测多评法结果与外标法结果接近。结论：该方法稳定可用于测定舒肝颗粒中栀子苷、芍药苷的含量。

关键词：舒肝颗粒；一测多评；栀子苷；芍药苷

舒肝颗粒是由当归、白芍、柴胡、香附、甘草、白术、茯苓、薄荷、栀子、牡丹皮10味中药组成的一种复方制剂。该药具有疏肝理气，散郁调经的功效。临床用于肝气不舒的两胁疼痛，头痛目眩，心烦意乱，口苦咽干，以及肝郁气滞所致的面部黧黑斑 ( 黄褐斑) 等[1-4]。目前质量控制标准并未对该制剂所含成分进行含量控制。为更好的控制该制剂质量，本研究建立了一测多评的方法测定舒肝颗粒种栀子苷与芍药苷的含量，为进一步提高舒肝颗粒质量标准提供依据。

1. 仪器与材料

Ultimate3000双三元泵高效液相色谱仪，MS250DV型电子天平（十万分之一）（上海洪纪仪器设备有限公司），AL104型电子天平（万分之一）（梅特勒-托利多公司），620C型超声波清洗仪（上海易净超声波仪器有限公司）。栀子苷（110749-201718，含量按97.6%计算）、芍药苷（110736-201741，含量按95.7%计算）均购自中国食品药品检定研究院。乙腈和甲醇均为色谱纯，磷酸为分析纯。药品均为昆明中药厂生产的舒肝颗粒（批号分别为：580445，591555,580138,591631）。

2. 方法与结果

2.1色谱条件

Thermo Acclaim120 C18色谱柱（250nm×4.6mm，5µm），流动相乙腈（A）-0.1%磷酸(B）以梯度进行洗脱(0~5min，A:5.0%；5~25min，A:5.0%→95.0%；25~28min，A:95.0%；28~30min，A:95.0%→5.0%),在240nm下进行检测，流速：1.0ml/min,柱温30℃，进样量20µl。

2.2对照品溶液制备

精密称取栀子苷对照品20.90mg和芍药苷对照品14.99mg置于10ml容量瓶中以70%甲醇溶解制成母液，即为栀子苷2.04mg/ml,芍药苷1.43mg/ml的两种对照品的混合对照品溶液。

2.3供试品溶液的制备

取舒肝颗粒适量，研细，精密称取约1.5g细粉置于25ml容量瓶中，加入适量70%甲醇，超声（100W，53kHz）30min，冷却至室温后定容，摇匀，用0.2µm滤过，即得。

2.4方法学考察

2.4.1 专属性试验

取对照品、供试品溶液，照“2.1”项下的色谱条件下进样测定，结果如图1-2所示，各成分色谱峰分离度良好（>1.5），理论塔板数均大于5000。

图1 对照品色谱图

图2 供试品（样品）色谱图

2.4.2线性关系考察

精密量取母液各200µl、250µl、333µl、667µl、1000µl置于5ml容量瓶中，用70%甲醇定容至刻度，照“2.1”色谱条件测定。以溶液质量浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y）进行回归，栀子苷回归方程为Y=0.136X-3.020，线性范围81.59--407.96（µl/ml），相关系数0.9998，芍药苷回归方程为Y=0.262X-1.733，线性范围57.38--286.91（µl/ml），相关系数0.9996，可知两种成分在各自的线性范围内线性性关系良好。

2.4.3精密度试验

平行用母液稀释15倍的对照品进样6次，照“2.1”项的色谱条件测定，栀子苷峰面积RSD为0.63%;芍药苷峰面积RSD为0.83%，表明仪器精密度良好,符合中国药典要求^[5]。

2.4.4重复性试验

取同一批舒肝颗粒（批号591555），按“2.3”项的供试品制备方法平行制备6份供试品，在“2.1”项下的检测条件下进样测定，每次进样20µl。结果：栀子苷含量(g/g)分别为1.99、1.97、2.02、1.99、1.93、2.03,计算得到RSD为1.83%。芍药苷含量(g/g)分别为2.72、2.68、2.76、2.72、2.62、2.75，计算得到RSD为1.83%。表明该方法重复性良好。

2.4.5稳定性试验

吸取同一批（批号591555）的供试品溶液，室温下于2h、5h、10h、20h、40h在“2.1”项色谱条件下进样测定。测得栀子苷和芍药苷的结果如下：栀子苷峰面积分别为40.904、41.232、40.465、40.528，RSD为0.79%。芍药苷峰面积分别为41.752、41.967、41.145、41.638，RSD为0.74%。表明溶液在40h内稳定性良好。

2.4.6加样回收率试验

精密称取含有量已知的同一批（批号591555）颗粒粉末6份，每份约0.75g，加入对照品溶液（即“2.2”项下制得的母液，即为栀子苷2.04mg/ml,芍药苷1.43mg/ml的浓度）1ml，按“2.1”项的色谱条件下进样检测，计算回收率栀子苷回收率为105.12%、105.54%、105.20%、105.27%、105.13%、105.08%，平均回收率为105.22%，RSD为0.17%。芍药苷回收率为104.63%、104.97%、105.30%、107.15%、107.09%、106.16%，平均回收率为105.88%，RSD为1.03%。

2.4.7相对校正因子的计算

吸取“2.4.2”项的5个线性标准溶液，照“2.1”项下的色谱条件下进样测定。以芍药苷作为内标物质，计算栀子苷的相对校正因子ƒ_K/S，公式为ƒ_k/ƒ_s=(W_kA_s)/(W_SA_K)；其中：W_K为其他成分质量浓度，A_K其他成分峰面积，W_S为内标成分质量浓度，A_K为内标成分峰面积。栀子苷校正因子分别为0.731,0.731,0.729,0.726,0.736，校正因子平均值为：0.730，RSD为0.45%。

2.4.8耐用性试验

考察了不同流速对校正因子的影响，分别以0.8ml/min、0.9ml/min、1.1ml/min、1.2ml/min的流速进样，进样量为20µl的条件下无明显影响。栀子苷的相对校正因子结果为0.731、0.735、0.731、0.734，平均值为0.732，RSD值为0.29%，表明该方法测出的相对校正因子准确度较高。

2.4.9色谱峰定位

以芍药苷为内标，考察栀子苷在相同条件下不同时间，相同进样量的条件下的相对保留时间，以芍药苷为定位峰，栀子苷的相对保留时间值分别为，1.08,1.07,1.07,1.07,1.07,相对保留时间平均值为1.072RSD为0.42%。芍药苷与栀子苷的相对相对保留值无明显差异。

2.4.10样品含量测定

取4批颗粒照“2.3”项下方法处理，以“2.1”项下色谱条件下进行测定，分别采用外标法和一测多评法计算含量，所得结果无明显差异，同批次的含量及相对标准偏差见表1。

表1四批样品外标法与一测多评法含量结果

3. 讨论与结论

3.1讨论

3.1.1色谱条件优化

本实验考察了不同流动相对栀子苷和芍药苷的峰型、分离度等的影响。使用0.1%磷酸-乙腈、0.1%磷酸-甲醇为初始流动相进行梯度洗脱。通过考察确定以0.1%磷酸--乙腈（95:5）为初始比例，同时不断优化梯度洗脱时间和比例，最终确定以“2.1”项下梯度进行洗脱。

3.1.2柱温优化

本实验还考察了柱温在不同流动相下的分离效果，考察了25℃、28℃、30℃、35℃、40℃柱温洗脱时的影响，最终确定以30℃为检测柱温。

3.1.3供试品溶液制备方法筛选

本实验考察了不同提取溶剂比例对栀子苷和芍药苷提取率的影响，使用了纯甲醇、70%甲醇、40%甲醇在分别超声15min，30min下的提取效果，使用70%甲醇超声30min时可提取达到最大化，故选用。

3.1.4检测波长优化

本实验考察了以210nm、240nm、275nm为检测波长对结果的影响。以210nm为检测波长，色谱图杂峰较多，相互干扰严重。以275nm为检测波长，各成分响应值均降低，故最终选择以240nm为检测波长。

3.2结论

本实验采用“一测多评”法测定舒肝颗粒中栀子苷和芍药苷的含量，考察了仪器的精密度等，该方法与外标法测得的含量无显著差异，建立的不同化合物之间的校正因子具有较高的可信度，可在仅有芍药苷照品时通过一测多评技术实现同步测定舒肝颗粒中芍药苷与栀子苷的含量，为舒肝颗粒的标准提升与质量控制提供了理论依据。

参考文献

1. 王伟．舒肝颗粒治疗肝郁化热型经行头痛［J］．医药论坛杂志，2008,29（1）：73-74

2. 宋瑜，周善康，姚树成．舒肝颗粒治疗肝郁气滞型腹痛147例［J］．河南中医，2006,26（9）：72.

3. 李瑞．舒肝颗粒治疗乳腺增生症的临床观察［J］．中国医药指南，2014,12(11):277-278.

4. 王晶,张世洋,盛永成，等.白术治疗胃肠道疾病药理作用研究进展［J］．中华中医药学刊,2018,12（36）:2854-2858.

5. 国家药典委员会.中华人民共和国药典 (四部)[M].北京:中国医药科技出版社,2015.

作者一姓名：刘晓俊；性别：男；出生年月：1986.11；籍贯云南省昆明市：（具体到市）民族汉族；最高学历硕士研究生：；目前职称：主管药师；研究方向：药品检验，化妆品检验