肝素钠软膏剂的制备与抗IIa因子效价测定

肝素钠软膏剂的制备与抗IIa因子效价测定

沈建华

南京科技职业学院 南京 210048

摘要：目的：制备肝素钠软膏剂并建立制剂质量控制方法。方法：根据基质处方，采用后加乳化剂并搅拌的方法制备软膏剂基质，将药液加入基质中搅拌均匀即可制得软膏剂。用生色底物法分别测定原料药和制剂中肝素钠的抗IIa因子的效价。结果：所制得的软膏剂外观与性状符合制剂要求，软膏剂中肝素钠含量为311.15IU/g，为标示量的97.23%。结论：本文肝素钠软膏剂的制备方法可行，质量控制方法客观准确，适合实验室与医院药房少量制备肝素钠外用剂型。

关键词：肝素钠 软膏剂 生色底物法 抗IIa因子效价

肝素钠系从猪或牛的肠粘膜提取的硫酸氨基葡聚糖的钠盐，属粘多糖类物质，具有延长凝血时间的作用。研究表明，肝素钠除了具有抗凝活性之外，还具有抗炎、抗过敏和抗补体等药理活性[1]。软膏剂是外用法给药的剂型之一，通过皮肤、孔窍、经络及病变局部等部位治疗疾病，避免了胃肠道的破坏与肝首过效应，减少血药浓度峰谷变化，已成为克服药物副作用的有效用药途径之一。

2005年版中国药典用兔血浆法，美国药典USP30版用羊血浆法测肝素钠效价的生物测定法。中国药典2020版、美国药典USP37版收载了生色底物法测定肝素钠的效价。血浆法由于不同批号的血浆所得实验结果有可能不同，因此肝素的效价测定也应采用抗IIa因子的发色底物的分光光度法。

本文拟制备肝素钠软膏剂，并用生色底物法测定原料药和制剂中的肝素钠抗IIa因子效价，以对制剂进行质量控制。

1 试剂与仪器

UV2550/UV2700 型紫外可见分光光度计（日本岛津公司）；肝素钠原料药系本实验室自制，抗IIa因子效价标示的肝素钠标准品购自惠兴生化试剂有限公司（9.5mg，2144IU）。抗凝血酶ATⅢ(Chromogenix，10IU/瓶)，发色底物S-2238(Chromogenix, 25mg)，Ⅱa因子(中国食品药品检定研究院，840IU/瓶)，三羟甲基氨基甲烷与聚乙二醇6000 ( 国药集团化学试剂有限公司)。

2 方法

2.1 软膏剂基质处方与制备

2.1.1 软膏剂基质处方

以100g为例，单硬脂酸甘油酯 7g，甘油14 g，硬脂酸10 g，水48 g，白凡士林10 g，十二烷基硫酸钠1g，液状石蜡10g，羟苯乙酯0.1g。

2.1.2 制备工艺

将除十二烷基硫酸钠之外的所有组分置于烧杯中，水浴加热至熔化，保温于85℃。另将十二烷基硫酸钠用少量蒸馏水溶解，并保温于85℃，在搅拌下将其加入上述混合物中，搅拌至冷凝即得。

2.2肝素钠原料药效价的测定

2.2.1标准曲线的测定

标准品用纯水精确定容至25mL，得到标准品母液。分装至离心管中备用。-20℃冻存。临用前取出放置至室温。取1mL用Tris缓冲液（pH8.4）定容至50mL，再取1mL该稀释液用Tris缓冲液（pH8.4）定容至50mL，得到标准品母液的1:2500稀释液。该稀释液效价约为0.0343IU/mL，再依次制得0.0240、0.0168、0.0118 IU/mL的另外三个浓度的标准品待测液。

37℃恒温下水浴，每隔12秒顺次加入标准品待测液100μL，0.25 IU/mL的ATⅢ加入100μL，5 IU/mL的IIa因子加入200μL（过量），0.625mmol/L的发色底物S-2238加入200μL，反应终止剂50%醋酸200μL。所得反应溶液在405nm波长下测定吸光值。以浓度为横坐标，吸光值为纵坐标即得标准曲线。

2.2.2原料药效价测定

精确称取约0.3g肝素钠原料药置100ml容量瓶中，用生理盐水定容至刻度，充分混匀，作为原料药储备液。按原料药估计效价（200IU/mg），精确稀释得到约0.0240IU/mL的原料药供试品溶液。同2.2.1法测定原料药供试品溶液的吸光值，进而求算原料药效价。

2.3 肝素钠软膏剂的制备

按照2.1.2项制备软膏剂基质，软膏剂中肝素钠的标示含量为320IU/g，根据所测得的原料药效价，准确称取肝素钠原料药，用适量水（该部分水从基质中剔除）溶解肝素钠原料药，将该药液加入基质中，搅拌均匀即得。

2.4 软膏剂中肝素钠含量的测定

精密称取肝素钠软膏剂约2.5g，置100ml容量瓶中，加无水乙醇30ml，置水浴中加热溶解后，加生理盐水至刻度，摇匀，4℃放置过夜，弃去上层油脂，过滤，取滤液50ml置蒸发皿内，水浴加热至无乙醇嗅味，再移至50ml容量瓶中，用生理盐水定容至刻度，即得软膏剂储备液。精确稀释得到约0.0320 IU/mL的软膏剂供试品溶液。同2.2.1法测定原料药供试品溶液的吸光值，进而求算软膏剂中肝素钠含量。

3 结果

3.1 软膏剂基质与制剂性状

所制得的软膏剂基质与制剂皆为色泽均匀、质地细腻、涂展性良好的淡黄色乳膏。

3.2 肝素钠原料药抗IIa因子效价

标准品待测液的曲线回归方程为y= -8.7322x+0.6307（R

2=0.9916），见图1。

图1. 肝素钠效价测定的标准曲线

原料药供试液吸光值为0.433，进而求算得肝素钠原料药效价为188.67IU/mg。

3.3 软膏剂中肝素钠含量

按照3.2中所测得的肝素钠原料药的效价，精密称取0.1696g原料药，制得肝素钠软膏剂。测得软膏剂供试液吸光值为0.359， 进而求得软膏剂中肝素钠含量为311.15IU/g，为标示含量的97.23%。

4 讨论

软膏剂的基质在制备时，乳化剂的加入可以先加，也可以后加。根据文献报道，制备软膏剂基质时，以后加乳化剂并用胶体磨高剪切匀乳所得基质综合评分最好。本文中采用后加乳化剂并搅拌，所制得的软膏剂基质符合制剂要求。

肝素钠的效价测定是质量控制的关键，本文中用生色底物法测定肝素钠抗IIa因子的效价，该方法特异性好，灵敏度高，重复性好，终点指标客观，不受其它凝血因子的影响。目前我国肝素钠效价测定多采用血浆法，由于每批血浆之间存在差异，不同批号的血浆所得结果有可能不同，且实验结果依赖主观判断。生色底物法属于理化方法，而血浆法属于生物测定法，用理化方法代替生物测定法是药物质量控制中的趋势，增强科学性，减少主观判断。

总之，本文所制备的肝素钠乳剂型软膏剂符合制剂的一般要求，并且建立了生色底物分光光度测定原料药与制剂中肝素钠抗IIa因子效价的方法，从而有效地进行肝素钠软膏剂的质量控制，可供实验室少量制备或医院药房制备肝素钠外用剂型参考。

参考文献

1  王磊，焦楠，李传秋等.羊血浆法测定海普林软膏中肝素钠生物效价的探讨[J].中国生化药物杂志，2002，23（3）：149-150.

2  郝士婧等.生色底物法测定肝素钠的效价[J].上海医药，2022，43（19）：70~73.

3  李湛军，徐康森.低分子肝素生物活性测定方法的比较研究 [J].药物分析杂志，2005，25（9）：1111-1114.