基于腧穴配伍理论的针刺干预胃轻瘫大鼠的效应差异研究

基于腧穴配伍理论的针刺干预胃轻瘫大鼠的效应差异研究

徐小茹[1]，高琳，杜昂远，柴佳鹏，刘晓娜★

（长春中医药大学，长春，130117）

摘要：目的：观察针刺单穴与腧穴配伍干预胃轻瘫大鼠相关的形态学效应差异。方法：构建原发性胃轻瘫大鼠动物模型，随机分为空白组、模型组、单穴组和配穴组，单穴组造模后针刺单穴（中脘），配穴组造模后针刺腧穴配伍（内关、中脘、足三里），观察大鼠行为学改变，应用HE染色观察大鼠形态学变化。结果：空白组高岭土摄入量、摄食量、体重与模型组、单穴组、配穴组相比，均有显著性差异（p＜0.01）；模型组与单穴组、配穴组相比，均有显著性差异（p＜0.01）；单穴组与配穴组相比，有显著性差异（p＜0.01）。结论：针刺治疗效果可能是通过改善胃轻瘫大鼠胃组织病理损伤而实现的，且配穴组疗效优于单穴组。

关键词：单穴；腧穴配伍；胃轻瘫；HE

胃轻瘫(Gastroparesis,GP)是一种常见的胃肠运动障碍疾病，其疾病症状表现为胃肠排空延迟、腹胀和上消化道症状，如恶心、呕吐等[1-3]。根据项目组前期研究基础，针刺不同穴位可特异性的改变胃轻瘫的不同症状。如针刺足三里穴后，通过正电子发射计算机断层扫描（SPECT/CT）观察到大鼠的胃运动能力提高，提示胃肠排空延迟症状得到改善；针刺中脘穴后的SPECT/CT图像显示大鼠的胃容缩性扩张能力得到改善，提示腹胀症状得到缓解[4]。在前期研究基础上，本文进行了原发性胃轻瘫的模型复制，研究针刺单穴与腧穴配伍对胃轻瘫大鼠行为学、形态学的影响。

1.材料与方法

1.1 动物与分组　雌性Wistar大鼠40只，8-10周，200-250g，清洁级，购自辽宁长生生物技术股份有限公司，动物许可证号：SCXK（辽）2020-0001。饲养于长春中医药大学实验动物中心。在实验前适应性饲养一周，自由进食、饮水，节律光照，昼：夜=12：12，动物房温度、湿度分别维持在22±1℃、70%左右。实验动物饲养于洁净动物笼中，置于清洁级动物房，温度（22±3）℃，相对湿度50％~60％，光照时间为昼/夜（12h/12h），实验前适应性饲养1周。本实验研究所有程序均经长春中医药大学动物实验伦理审查批准，批准编号为2021525。40只小鼠由计算机生成的随机数字表分成4组：空白组（不造模，不针刺）、模型组（只造模，不针刺）、单穴组（造模后针刺中脘）、配穴组（造模后针刺内关、中脘、足三里），每组10只。

1.2 造模  雌性Wistar大鼠，在饮用水中加入水溶性右美托咪定(Dexmedetomidine)，浓度为25mg/L，口服3天，每天更换一次。口服右美托咪定第二天早6点进行腹腔注射顺铂5mg/kg，每12小时测量高岭土摄入量，共记录2天。造模总时长为3天，结合大鼠行为学指标确定模型复制成功[5]。以上方法用于表征造模成功，亦可表征针刺治疗前后差异[6]。

1.3 选穴　腧穴的标准定穴内关、中脘、足三里参考《实验针灸学》提供的腧穴定位，采用比较解剖学方法确定大鼠腧穴。针刺治疗每天1次，5天为一个疗程，每个疗程间休息一天，连续针刺治疗2个疗程，电针频率20Hz，强度2mA，每次治疗留针15分钟。

1.4 行为学观察：

观察并记录大鼠活动情况、毛发改变、死亡情况、高岭土摄入量，摄食量、体重等。

1.5形态学观察

 HE染色：取出4℃石蜡切片，复温到常温（30min）。常规脱蜡、染色、脱水、透明、中性树胶封片，光学显微镜下观察，照相。

1.6 统计学方法　实验所用数据用SPSS 19.0统计软件包处理。结果以均数±标准差表示，组间比较采用单因素方差分析（ANOVA）和t检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2.结果

2.1 行为学研究结果

通过比较，空白对照组大鼠的精神状态整体良好，活动敏捷，毛发正常光泽，未发生死亡，正常饮食、饮水、排便，便质正常。相比之下模型对照组、单穴组、配穴组大鼠在造模之后均不同程度的出现了食欲不振、体重减轻、毛发干枯欠光泽、精神欠佳，怠惰不动，在饲养过程中死亡3只。模型组大鼠状态较单穴组、配穴组更差。

通过观察和记录模型组、单穴组、配穴组大鼠对高岭土的摄取量有增加、摄食量有减少、体重有减轻。具体情况见图1、2，表1。

图1 各组大鼠高岭土摄取情况（单位g）

注：空白组高岭土摄入量与模型组、单穴组、配穴组相比，均有显著性差异（△△，p＜0.01）；模型组高岭土摄入量与单穴组、配穴组相比，均有显著性差异（★★，p＜0.01）；单穴组高岭土摄入量与配穴组相比，有显著性差异（▲▲，p＜0.01）。

图2 各组大鼠摄食量情况（单位g）

注：空白组摄食量与模型组、单穴组、配穴组相比，均有显著性差异（△△，p＜0.01）；模型组摄食量与单穴组、配穴组相比，均有显著性差异（★★，p＜0.01）；单穴组摄食量与配穴组相比，有显著性差异（▲▲，p＜0.01）。

表1 各组大鼠体重变化情况（单位g，x±s）

注：空白组体重与模型组、单穴组、配穴组相比，均有显著性差异（△△，p＜0.01）；模型组体重与单穴组、配穴组相比，均有显著性差异（★★，p＜0.01）；单穴组体重与配穴组相比，有显著性差异（▲▲，p＜0.01）。

2.2 形态学研究结果

空白组胃窦部肌层平滑肌细胞排列紧密、整齐；胃窦部黏膜层和黏膜下层黏膜腺体细胞规则排列，细胞间间隙适中，无空泡样变，未有血管扩张，见图3。

图3 空白组大鼠胃窦部HE染色结果

注：A为胃窦部组织切片的4倍放大影像，B为黏膜肌层+胃底腺的10放大影像，D为黏膜层10放大影像。图中标注M为黏膜层（mucosa，M），S为浆膜（serosa，S），ML为肌层（muscular layer，ML），SmL为黏膜下层（submucous layer，SmL），LMM为黏膜肌层（lamina mu claris mucosa，LMM），FG为胃底腺（fundic gland，FG），CC为主细胞（chief cell，CC），PC为壁细胞（parietal cell，PC）[7]。（下同）

模型组胃窦部肌层平滑肌细胞胞浆染色淡，透亮，可见空泡样变；胃窦黏膜层和黏膜下层黏膜腺体细胞排列不整齐，细胞间间隙变大，主细胞数量减少，壁细胞胞浆减少，空泡样变，染色淡，有血管扩张，见图4。

图4 模型组大鼠胃窦部HE染色结果

注：同上。

单穴组与模型组相比，胃窦部肌层平滑肌细胞排列较为致密；黏膜层和黏膜下层的黏膜腺体细胞相对排列整齐，主细胞数量相对有增加，细胞间隙减小，空泡减少，充血减轻，见图5。

图5 单穴组大鼠胃窦部HE染色结果

注：同上。

配穴组与模型组相比，胃窦部肌层平滑肌细胞相对排列致密；黏膜层和黏膜下层的黏膜腺体细胞相对排列整齐，主细胞数量相对有增加，细胞间隙减小，空泡减少，充血减轻，见图6。

图6 配穴组大鼠胃窦部HE染色结果

注：同上。

3.小结

传统中医对胃轻瘫这个现代病名的记载应对应着“痞满”“呕吐”等脾胃病，美国胃肠病学会发布的《Clinical Guideline: Management of Gastroparesis》[8]中多次提到了针灸对胃肠道疾病的有效性。本研究结果表明，针刺治疗效果可能是通过改善胃轻瘫大鼠胃组织病理损伤而实现的，且配穴组疗效优于单穴组。

参考文献：

[1]Pasricha PJ, Parkman HP. Gastroparesis: definitions and diagnosis[J]. Gastroenterol Clin North Am,2015,44(1):1-7.

[2]Onyimba,F. U., Clarke,J.O.. Helping Patients with Gastroparesis[J]. Medical Clinics of North America,2019,103(1):71–87.

[3]Parkman HP, Hasler WL, Fisher RS. American Gastroenterological Association medical position statement: diagnosis and treatment of gastroparesis[J].Gastroenterology,2004,127(5):1589-1591.

[4]智沐君,于波,李铁等.核素99mTc-DTPA液体胃排空测定法在糖尿病胃轻瘫动物模型中的应用[J].中华中医药杂志,2020,35(05):2511-2514.

[5]Polat G, Yilmaz U, Anar C, et al. Is there relationship between excision repair cross-complementation 1 expression level and response to treatment and prognosis in an advanced stage lung cancer treated with cisplatin-based chemotherapy?[J]. Indian J Cancer, 2015,52(3): 277-280.

[6]Polat G, Yilmaz U, Anar C, et al. Is there relationship between excision repair cross-complementation 1 expression level and response to treatment and prognosis in an advanced stage lung cancer treated with cisplatin-based chemotherapy?[J]. Indian J Cancer, 2015,52(3): 277-280.

[7]智沐君. 按部选穴针刺对糖尿病胃轻瘫大鼠胃运动调节效应差异及相关机制研究[D].长春中医药大学,2020.

[8] Camilleri M, Parkman HP, Shafi MA, et al. Clinical Guideline: Management of Gastroparesis[J]. The American Journal of Gastroenterology, 2013, 108(1):18-37.

基金资助：吉林省中医药科技项目（No.2022134）；国家自然科学基金项目：（81804172）；吉林省科技发展计划项目：20220203119SF。

 第一作者：徐小茹，（1990.1），女，汉，山东烟台，博士研究生，教师，讲师，腧穴配伍理论与临床应用研究，长春中医药大学，17386841575

★通讯作者：刘晓娜，（1984.4），女，吉林长春，博士研究生，副教授，腧穴配伍理论与临床应用研究