简介:摘要目的探讨大黄附子汤对重症急性胰腺炎(SAP)早期大鼠结肠黏液层的作用机制。方法18只健康雄性Sprague-Dawley大鼠,随机数字表法分为3组(每组6只):对照组(Sham组)、重症急性胰腺炎组(SAP组)、重症急性胰腺炎-大黄附子汤组(DHFZT-SAP组)。逆行胰胆管注射4%牛磺胆酸钠(1 ml/kg)构建SAP模型,对照组开腹翻动胰腺组织后关腹。Sham组和SAP组造模后6、12 h分别给予1.5 ml生理盐水(37 ℃)灌胃;DHFZT-SAP组对应给予1.5 ml大黄附子汤(37 ℃)灌胃。于造模24 h后,经腹主动脉取血,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清淀粉酶、内毒素、TNF-α和IL-6的含量;取胰腺、肺和结肠组织行病理学观察并评分;采用过碘酸希夫/阿利新蓝(PAS/AB)染色法观察结肠黏液层及杯状细胞的变化;采用免疫组织化学法检测结肠组织黏蛋白-2(MUC2)及结肠上皮细胞间Occludin蛋白的表达。组间比较用单因素方差分析。结果SAP组胰腺、肺、结肠组织可见水肿淤血及部分坏死,组织病理评分高于Sham组(9.33±1.86比0.17±0.41,F=130.761,P<0.05;4.50±1.22比0.33±0.52,F=58.962,P<0.05;9.0±1.67比0.17±0.41,F=157.809,P<0.05);而DHFZT-SAP组胰腺、肺、结肠呈轻度水肿淤血,病理评分低于SAP组(5.50±1.05比9.33±1.86,F=19.307,P<0.05;2.67±1.03比4.50±1.22,F=7.857,P<0.05;6.0±1.41比9.0±1.67,F=11.250,P<0.05)。SAP组血清淀粉酶、内毒素、TNF-α和IL-6含量高于Sham组(2 254.89±197.29比224.66±42.82,F=606.760,P<0.05;68.90±8.55比23.01±4.92,F=129.806,P<0.05;292.03±20.33比56.0±11.60,F=610.122,P<0.05;198.14±17.36比30.86±2.63,F=544.778,P<0.05);DHFZT-SAP组血清淀粉酶、内毒素、TNF-α和IL-6含量低于SAP组(1 353.93±54.23比2 254.89±197.29,F=116.332,P<0.05;34.0±4.70比68.90±8.55,F=76.712,P<0.05;152.35±14.43比292.03±20.33,F=188.416,P<0.05;102.18±7.01比198.14±17.36,F=167.720,P<0.05)。SAP组大鼠结肠黏液层完整性被破坏,厚度和隐窝中杯状细胞数量低于Sham组(4.90±0.45比44.82±1.69,F=3135.946,P<0.05;7.14±0.79比15.77±0.85,F=329.202,P<0.05),MUC2和结肠上皮细胞间Occludin表达低于Sham组(0.14±0.02比0.32±0.05,F=60.693,P<0.05;0.19±0.03比0.55±0.06,F=167.018,P<0.05);DHFZT-SAP组结肠黏液层完整性有一定程度修复,厚度和隐窝中杯状细胞数量高于SAP组(13.31±0.78比4.90±0.45,F=533.746,P<0.05;10.92±0.71比7.14±0.79,F=75.635,P<0.05),MUC2和结肠上皮细胞间Occludin表达高于SAP组(0.18±0.02比0.14±0.02,F=11.552,P<0.05;0.31±0.10比0.19±0.03,F=9.383,P<0.05)。结论大黄附子汤通过修复结肠黏液屏障阻止内毒素移位而减轻SAP时全身炎性反应。
简介:摘要目的通过观察大黄附子汤对重症急性胰腺炎(Severe acute pancreatitis, SAP)致肠道动力障碍大鼠血清胃动素、回肠Cajal间质细胞及胃动素受体的影响,探讨大黄附子汤改善肠道动力障碍的作用及机制。方法清洁级雄性Sprague-Dawley大鼠,18只,随机(随机数字法)分为对照组、SAP组及大黄附子汤治疗组(n=6)。采用逆行胰胆管注射4%牛磺胆酸钠制备SAP大鼠模型。对照组开腹后,找到胰腺轻微翻动数次后关腹;SAP组在造模后12、24 h分别给予2 mL生理盐水(37℃)灌肠;治疗组在造模后12、24 h分别给予2 mL大黄附子汤(37℃)灌肠。于造模48 h后,各组大鼠取腹主动脉血,测定血清内毒素及淀粉酶含量,使用酶联免疫吸附法测定血清胃动素水平;取胰腺、回肠组织行苏木精伊红染色观察病理变化;采用免疫组织化学法检测回肠平滑肌组织中Cajal间质细胞(interstitial cells of cajal, ICC)表达蛋白c-kit及胃动素受体(Motilin receptor, MTL-R)蛋白的表达。结果与对照组相比,SAP组大鼠血清内毒素、淀粉酶水平均显著增高[(504.98±88.81) pg/mL vs. (17.76±5.01) pg/mL; (532.28±66.53) U/L vs. (69.45±3.61) U/L,均P<0.05],而血清胃动素水平显著降低[(195.4±6.7) ng/L vs. (301±8.10) ng/L, P<0.05],ICC表达蛋白c-kit及MTL-R免疫组织化学评分降低(P<0.05);与SAP组相比,大黄附子汤治疗组大鼠血清内毒素、淀粉酶水平均显著降低[(189.9±38.23) pg/mL vs. (504.98±88.81) pg/mL; (294.23±25.66) U/L vs. (532.28±66.53) U/L,均P<0.05],而血清胃动素水平显著升高[(264.2±8.3) ng/L vs. (195.4±6.7) ng/L, P<0.05],同时c-kit及MTL-R免疫组织化学评分升高(P<0.05)。结论大黄附子汤通过促进胃动素的分泌、提高ICC细胞的活性及MTL-R的表达而改善SAP大鼠肠道动力障碍。
简介:摘要目的观察大黄附子汤(DHFZT)对早期重症急性胰腺炎肠黏膜机械屏障的影响。方法24只雄性SD大鼠采用随机数字表法分为4组:假手术(SH)组、假手术-DHFZT(SH-DHFZT)组、重症急性胰腺炎(SAP)组、DHFZT治疗(SAP-DHFZT)组,每组6只。SH组、SH-DHFZT组大鼠开腹后,翻动胰腺数次后关腹;SAP、SAP-DHFZT组经胰胆管缓慢逆行注入4%牛磺胆酸钠(1 ml/kg)诱导SAP模型。术后SH、SAP和SH-DHFZT组与SAP-DHFZT组分别用2 ml生理盐水或DHFZT于术后12、24、36 h保留灌肠。检测大鼠血淀粉酶、血钙、内毒素、白细胞介素(IL)-1β,肠黏膜二胺氧化酶(DAO)浓度变化。比较肠黏膜机械屏障紧密连接蛋白Claudin-1、Occludin、ZO-1的表达及肠道病理组织学评分。采用SPSS 22.0软件中单因素方差分析(One-way ANOVA)对数据进行分析。结果SAP组血清内毒素、淀粉酶、DAO及IL-1β水平高于SH组[内毒素(132.40±8.00) ng/L比(31.70±8.40) ng/L,淀粉酶(1 163.00±71.88) U/L比(174.20±8.89) U/L,DAO(23.11±2.98) μg/L比(10.76±2.42) μg/L,IL-1β(82.20±7.14) μg/L比(25.37±2.38) μg/L,F=452.162、1 118.302、62.099、342.100,P值均<0.05],差异均有统计学意义,SAP组血钙含量低于SH组[(1.25±0.16) mmol/L比(1.99±0.10) mmol/L,F=92.292,P<0.05],差异有统计学意义。SAP-DHFZT组血清内毒素、淀粉酶、DAO及IL-1β水平低于SAP组[内毒素(68.80±5.30) ng/L比(132.40±8.00) ng/L,淀粉酶(500.70±54.67) U/L比(1 163.00±71.88) U/L,DAO(13.79±2.93) μg/L比(23.11±2.98) μg/L,IL-1β(63.03±7.27) μg/L比(82.20±7.14) μg/L,F=263.544、322.707、29.841、21.235,P值均<0.05],差异均有统计学意义,血钙含量高于SAP组[(1.72±0.08) mmol/L比(1.25±0.16) mmol/L,F=41.419,P<0.05],差异有统计学意义。SAP组大鼠48 h后胰腺及回肠组织结构均发生不同程度破坏,ZO-1、Occludin、Claudin-1表达减弱。经DHFZT治疗后,胰腺及回肠组织结构破坏有修复,肠上皮紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-1表达高于SAP组(ZO-1为0.80±0.12比0.09±0.02,Occludin为0.69±0.11比0.53±0.11,Claudin-1为0.42±0.02比0.30±0.01,F=204.365、6.374、172.800,P值均<0.05),差异均有统计学意义。结论DHFZT通过促进肠上皮紧密连接蛋白表达,减轻肠黏膜机械屏障的损伤,达到治疗SAP的目的。