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  • 简介:摘要目的探讨四跨膜蛋白CO-029和整合素αv在肝内胆管细胞癌中的表达与临床意义。方法组织芯片(TMA)检测254例肝内胆管癌病理标本中CO-029和αv的表达,并分析两者与肿瘤的临床病理特征及复发转移预后的关系。Spearman法分析两者表达相关性。免疫共沉淀Western-blot检测两者是否共存形成复合物。结果组织芯片检测显示CO-029阳性表达率51.6% (131/254),αv阳性表达率61.4%(156/254)。CO-029与αv表达与肿瘤包膜、肿瘤大小、肿瘤数目(包括肝内播散)、TNM分期密切相关(P<0.05)。按复发时间(TTR)分组,术后早期复发组(TTR <1年) CO-029、αv的表达均明显高于未复发组(TTR≥1年)。CO-029高表达者术后更易复发(HR=2.01,95% CI=1.45~2.79;P<0.001),且术后生存期短(HR=2.03,95% CI=1.46~2.81;P<0.001)。αv高表达者术后复发时间短(HR=1.85,95% CI=1.38~2.47;P<0.001),术后生存期短(HR=1.95,95% CI=1.40~2.71;P<0.001)。免疫共沉淀Western blot证实αv与CO-029形成复合物。CO-029与αv在肝内胆管癌中表达正相关(r=0.401,P<0.01)。结论CO-029与αv差异表达与肝内胆管癌的复发转移及预后密切相关,且CO-029可能偶联αv形成复合物促进肝内胆管癌侵袭转移。

  • 标签: 胆管肿瘤 转移 预后 四跨膜蛋白
  • 简介:摘要目的探讨四跨膜蛋白CO-029表达与胆管癌上皮-间质转变(EMT)及肿瘤转移的关系和作用机理。方法利用已构建的vshRNA-CO-029 (LV/GFP/CO-029)慢病毒质粒转染并筛选沉默CO-029基因表达的稳转胆管癌细胞株HCCC-9810-vshRNA-CO-029作为沉默组,以模拟质粒转染的HCCC-9810细胞作为模拟组,以未转染细胞作为对照组。分别以细胞划痕、Transwell和裸鼠体内种植实验检测三组细胞的迁移和侵袭转移能力变化。应用免疫共沉淀和肿瘤坏死因子(TNF)-α刺激实验检测CO-029对EMT相关基因表达的影响。结果沉默组细胞划痕愈合率低于模拟组细胞[(27.11±4.58)%比(92.84±6.24)%],沉默组细胞穿过Matrigel胶的数量为(57.15±6.10)个,低于模拟组(108.20±9.21)个及对照组(112.00±10.45)个,差异均具有统计学意义(均P<0.01)。裸鼠肝脏移植沉默组细胞的肝脏瘤体积为(2.17±0.54)cm3,而移植模拟组细胞的肝脏瘤体积为(0.74±0.15)cm3,差异有统计学意义(P<0.05)。模拟组肺转移的发生率和肺转移瘤灶数目分别为100%(6/6)、(214.17 ± 35.64)个,沉默组分别为16.7% (1/6)、(41.56±14.15)个,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。免疫共沉淀显示CO-029可与TNF-αR1形成复合物,TNF-α可诱导模拟组细胞的E-钙黏蛋白表达下调,波形蛋白和N-钙黏蛋白表达上调,而沉默组细胞中则无明显变化。结论CO-029表达与胆管癌侵袭转移能力正相关,并可能与TNF-α协同诱导胆管癌细胞发生EMT,是胆管癌复发转移及预后干预的潜在靶点和分子靶向治疗指标。

  • 标签: 四跨膜蛋白质类 CO-029 胆管细胞癌 上皮-间质转变 转移
  • 简介:摘要目的探讨环指蛋白187(RNF187)表达与肝癌侵袭转移和上皮间变的关系。方法2019年4月至2019年10月,利用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)分别检测高转移潜能肝癌细胞株(MHCC97-H)和低转移潜能的肝癌细胞株(PLC/PRF/5、HepG2,中国科学院上海生物所)中RNF187的表达。通过慢病毒转染技术沉默RNF187后,RT-qPCR和Western blot法分别检测RNF187 mRNA及蛋白的表达水平及上皮-间充质转化(EMT)分子标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、黏结合蛋白多糖-1(Syndecan-1)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形纤维蛋白(Vimentin)的表达情况,噻唑蓝(MTT)法和Transwell法分别检测MHCC97-H细胞增殖和侵袭能力的影响。计量资料以均值±标准差(Mean±SD)表示,组间比较采用t检验。结果高转移潜能组MHCC97-H的RNF187的mRNA表达(0.082±0.006)明显高于低转移潜能组PLC/PRF/5(0.014±0.003)、HepG2(0.017±0.002,t=41.755、36.248,P均<0.05),MHCC97-H的RNF187蛋白表达(2.8±0.3)明显高于PLC/PRF/5(1.8±0.2)、HepG2(1.7±0.2,t=11.030、11.667,P均<0.05)。MHCC97-H-Mock和MHCC97-H-短发卡RNA(shRNA)-RNF187的EMT分子标志物的表达分别为,上皮标志物E-cadherin(0.81±0.08,0.31±0.06)、Syndecan-1(0.70±0.08,0.22±0.07);间皮标志物N-cadherin(0.28±0.04,0.73±0.09)和Vimentin(0.26±0.03,0.68±0.08)。两组细胞株EMT各分子标志物的表达比较差异有统计学意义(t=22.312、24.634、19.424、17.854,P均<0.05),提示MHCC97-H-shRNA-RNF187细胞株EMT过程显著下调。MTT法示,72 h后,MHCC97-H-shRNA-RNF187的增殖能力(2.2±0.4)明显低于MHCC97-H-Mock(4.5±0.6,t=2.428,P<0.05)。Transwell小室法示,MHCC97-H-shRNA-RNF187组细胞穿过微孔滤膜的细胞数量[(178±67)个]明显少于MHCC97-H-Mock组[(482±73)个,t=14.563,P<0.05]。结论RNF187表达可诱导EMT并参与肝癌细胞的侵袭与转移过程。

  • 标签: 肝细胞癌 环指蛋白187 上皮间质转变 转移