简介：摘要目的探讨HepG2肝癌细胞不同乙型肝炎病毒X(HBx)表达水平对增殖、侵袭以及索拉非尼耐药的影响。方法肝癌HepG2细胞株感染HBx高表达序列的慢病毒为HBx高表达组，阴性对照组同HBx高表达组，但仅感染空载体。干扰组在HBx高表达组的基础上感染HBx干扰序列病毒，降低HBx表达。干扰对照组同干扰组，但感染的空载体。空白对照组无任何处理。Western印迹检测HBx的蛋白表达。细胞增殖检测试剂盒检测增殖，Transwell侵袭实验检测侵袭能力，检测索拉非尼半抑制浓度(IC50)。结果Western印迹结果显示成功构建各组稳定表达细胞株。HBx高表达组细胞增殖能力优于空白对照组、阴性对照组，干扰组细胞增殖能力低于干扰对照组和HBx高表达组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。空白对照组、阴性对照组、干扰组穿过Matrigel胶的细胞数分别为(46.2±4.1)个、(50.7±5.1)个、(48.2±5.2)个。HBx高表达组穿过Matrigel胶的细胞数(124.2±8.3)个、干扰对照组(117.2±7.5)个，均高于上述三组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。HBx高表达组和干扰对照组细胞IC50分别为(5.36±0.31) μmol/L和(5.48±0.20) μmol/L，高于空白对照组、阴性对照组、干扰组的(4.75±0.22) μmol/L、(4.60±0.14) μmol/L和(3.98±0.03) μmol/L，差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论HBx高表达促进HepG2肝癌细胞增殖和侵袭，提高HepG2肝癌细胞对索拉非尼的抵抗能力，抑制细胞凋亡。

简介：摘要目的探讨四跨膜蛋白CO-029和整合素αv在肝内胆管细胞癌中的表达与临床意义。方法组织芯片（TMA）检测254例肝内胆管癌病理标本中CO-029和αv的表达，并分析两者与肿瘤的临床病理特征及复发转移预后的关系。Spearman法分析两者表达相关性。免疫共沉淀Western-blot检测两者是否共存形成复合物。结果组织芯片检测显示CO-029阳性表达率51.6％ （131/254），αv阳性表达率61.4％（156/254）。CO-029与αv表达与肿瘤包膜、肿瘤大小、肿瘤数目（包括肝内播散）、TNM分期密切相关（P<0.05）。按复发时间（TTR）分组，术后早期复发组（TTR <1年） CO-029、αv的表达均明显高于未复发组（TTR≥1年）。CO-029高表达者术后更易复发（HR=2.01，95% CI=1.45～2.79；P<0.001），且术后生存期短（HR=2.03，95% CI=1.46～2.81；P<0.001）。αv高表达者术后复发时间短（HR=1.85，95% CI=1.38～2.47；P<0.001），术后生存期短（HR=1.95，95% CI=1.40～2.71；P<0.001）。免疫共沉淀Western blot证实αv与CO-029形成复合物。CO-029与αv在肝内胆管癌中表达正相关（r=0.401，P<0.01）。结论CO-029与αv差异表达与肝内胆管癌的复发转移及预后密切相关，且CO-029可能偶联αv形成复合物促进肝内胆管癌侵袭转移。

简介：摘要目的探讨四跨膜蛋白CO-029表达与胆管癌上皮-间质转变(EMT)及肿瘤转移的关系和作用机理。方法利用已构建的vshRNA-CO-029 (LV/GFP/CO-029)慢病毒质粒转染并筛选沉默CO-029基因表达的稳转胆管癌细胞株HCCC-9810-vshRNA-CO-029作为沉默组，以模拟质粒转染的HCCC-9810细胞作为模拟组，以未转染细胞作为对照组。分别以细胞划痕、Transwell和裸鼠体内种植实验检测三组细胞的迁移和侵袭转移能力变化。应用免疫共沉淀和肿瘤坏死因子(TNF)-α刺激实验检测CO-029对EMT相关基因表达的影响。结果沉默组细胞划痕愈合率低于模拟组细胞[(27.11±4.58)%比(92.84±6.24)%]，沉默组细胞穿过Matrigel胶的数量为(57.15±6.10)个，低于模拟组(108.20±9.21)个及对照组(112.00±10.45)个，差异均具有统计学意义(均P<0.01)。裸鼠肝脏移植沉默组细胞的肝脏瘤体积为(2.17±0.54)cm3，而移植模拟组细胞的肝脏瘤体积为(0.74±0.15)cm3，差异有统计学意义(P<0.05)。模拟组肺转移的发生率和肺转移瘤灶数目分别为100%(6/6)、(214.17 ± 35.64)个，沉默组分别为16.7% (1/6)、(41.56±14.15)个，差异均具有统计学意义(均P<0.05)。免疫共沉淀显示CO-029可与TNF-αR1形成复合物，TNF-α可诱导模拟组细胞的E-钙黏蛋白表达下调，波形蛋白和N-钙黏蛋白表达上调，而沉默组细胞中则无明显变化。结论CO-029表达与胆管癌侵袭转移能力正相关，并可能与TNF-α协同诱导胆管癌细胞发生EMT，是胆管癌复发转移及预后干预的潜在靶点和分子靶向治疗指标。

简介：摘要目的探讨环指蛋白187(RNF187)表达与肝癌侵袭转移和上皮间变的关系。方法2019年4月至2019年10月，利用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)分别检测高转移潜能肝癌细胞株(MHCC97-H)和低转移潜能的肝癌细胞株(PLC/PRF/5、HepG2，中国科学院上海生物所)中RNF187的表达。通过慢病毒转染技术沉默RNF187后，RT-qPCR和Western blot法分别检测RNF187 mRNA及蛋白的表达水平及上皮-间充质转化(EMT)分子标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、黏结合蛋白多糖-1(Syndecan-1)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形纤维蛋白(Vimentin)的表达情况，噻唑蓝(MTT)法和Transwell法分别检测MHCC97-H细胞增殖和侵袭能力的影响。计量资料以均值±标准差(Mean±SD)表示，组间比较采用t检验。结果高转移潜能组MHCC97-H的RNF187的mRNA表达(0.082±0.006)明显高于低转移潜能组PLC/PRF/5(0.014±0.003)、HepG2(0.017±0.002，t＝41.755、36.248，P均<0.05)，MHCC97-H的RNF187蛋白表达(2.8±0.3)明显高于PLC/PRF/5(1.8±0.2)、HepG2(1.7±0.2，t＝11.030、11.667，P均<0.05)。MHCC97-H-Mock和MHCC97-H-短发卡RNA(shRNA)-RNF187的EMT分子标志物的表达分别为，上皮标志物E-cadherin(0.81±0.08，0.31±0.06)、Syndecan-1(0.70±0.08，0.22±0.07)；间皮标志物N-cadherin(0.28±0.04，0.73±0.09)和Vimentin(0.26±0.03，0.68±0.08)。两组细胞株EMT各分子标志物的表达比较差异有统计学意义(t＝22.312、24.634、19.424、17.854，P均<0.05)，提示MHCC97-H-shRNA-RNF187细胞株EMT过程显著下调。MTT法示，72 h后，MHCC97-H-shRNA-RNF187的增殖能力(2.2±0.4)明显低于MHCC97-H-Mock(4.5±0.6，t＝2.428，P<0.05)。Transwell小室法示，MHCC97-H-shRNA-RNF187组细胞穿过微孔滤膜的细胞数量[(178±67)个]明显少于MHCC97-H-Mock组[(482±73)个，t＝14.563，P<0.05]。结论RNF187表达可诱导EMT并参与肝癌细胞的侵袭与转移过程。