简介：摘要目的观察布鲁菌外膜蛋白（OMP）16脂化型（L16）和非脂化型（U16）对成骨细胞的毒力效应。方法利用大肠埃希菌BL21（DE3）原核表达系统制备L16和U16重组蛋白，并使用镍柱纯化。采用成组设计，利用小鼠成骨细胞系（MC3T3细胞）分别与L16和U16重组蛋白共孵育（L16、U16刺激组），以布鲁菌脂多糖（LPS）刺激物为阳性对照（LPS对照组），未加任何刺激的细胞作为阴性对照，孵育时间为24 h。CCK-8法检测MC3T3细胞的活力；离心收集培养细胞上清，生物发光法测定上清中乳酸脱氢酶（LDH）的释放率，评价L16和U16对MC3T3细胞的毒力作用；进一步使用Annexin Ⅴ-PE/7-AAD双染流式细胞术检测MC3T3细胞的凋亡率，以及通过免疫印迹法（WB）检测凋亡执行蛋白Caspase-3的活化水平。结果L16刺激组细胞活力[（56.16±1.63）%]显著低于U16刺激组和LPS对照组[（97.02±1.44）%、（98.64±0.90）%，P均< 0.01]，LDH释放率[（84.64±0.96）%]显著高于U16刺激组和LPS对照组[（34.82±3.41）%、（26.75±1.95）%，P均< 0.01]。Annexin Ⅴ-PE/7-AAD染色结果显示，L16刺激组细胞凋亡率为（46.45±2.19）%，而其余组均< 1%。WB结果显示，L16刺激组细胞内存在活化的Caspase-3，而U16刺激组和LPS对照组未检测到此活化片段。结论L16能诱导成骨细胞的凋亡，使成骨细胞的增殖受到抑制，而U16的作用不明显，具备完整脂化结构的布鲁菌L16是毒力效应所必需的。

简介：

简介：摘要：在科技飞速发展的现阶段，信息技术逐渐走进教育领域，并在会直接影响课堂教学活动的开展。在这样的大形势下，如何将信息技术融入教学引导中，就成为教师需要思考的重点问题。基于此，本文结合在小学数学问题解决教学分析，具体阐述如何借助信息技术开展教学，以供参考。

简介：摘要目的利用布鲁菌Omp31的单克隆抗体，初步建立布鲁菌抗原流式细胞术（FCM）检测方法，分析该方法在人布鲁菌病（简称布病）临床样本检测中的价值。方法牛种布鲁菌2308、104M、S19，羊种布鲁菌M5-90和猪种布鲁菌S2共5个菌株，经超声破碎，获得其菌液上清，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法和蛋白免疫印迹法（Western blot），检测已制备的抗布鲁菌Omp31单克隆抗体5H3对上述5个菌株的识别能力。构建Omp31重组真核表达载体（pcDNA3.1-Omp31）并转染人胚肾细胞（293FT细胞），Western blot检测Omp31蛋白的表达。羊种布鲁菌弱毒疫苗株M5-90侵染人急性单核细胞白血病细胞系（THP-1细胞），构建含菌单核吞噬细胞。将5H3抗体用异硫氰酸荧光素（FITC）或藻红蛋白（PE）标记，采用FCM，利用FITC-5H3抗体检测pcDNA3.1-Omp31转染293FT细胞和含菌单核吞噬细胞，鉴定该抗体对细胞内布鲁菌抗原的识别能力，初步建立FCM的检测方法，并测定FITC-5H3抗体在FCM中的灵敏度。利用双抗体（PE-5H3和FITC-CD14）的流式细胞染色测定人外周血单个核细胞（PBMCs），分析该方法应用于人布病临床检测的可行性。结果抗布鲁菌Omp31单克隆抗体5H3不仅能识别羊种布鲁菌M5-90菌株和猪种布鲁菌S2菌株，还能识别缺失Omp31基因的牛种布鲁菌2308、104M、S19菌株。FITC-5H3抗体可用于流式细胞染色识别细胞内的布鲁菌抗原，表达Omp31的293FT阳性细胞比例约为59.3%，疫苗株M5-90侵染的THP-1阳性细胞比例约为6.2%，检测293FT阳性转染细胞的灵敏度为4%。初步建立了基于PE-5H3和FITC-CD14的双抗体染色的FCM检测方法，该方法检测布病患者PBMCs中的双抗体阳性细胞比例（1.93%）高于健康人群（< 0.30%，阴性）。结论利用FCM，初步建立了荧光素标记抗布鲁菌Omp31单克隆抗体5H3检测细胞内布鲁菌抗原的方法，并发现5H3抗体能识别牛种布鲁菌，弥补了布鲁菌抗原检测中Omp31的应用缺陷。此方法的建立为布病病原学检测方法的研究提供了新策略，为检测试剂的开发提供了新材料。