简介：摘要目的探讨Beclin1对肺癌细胞紫杉醇耐药的影响及其分子机制。方法人非小细胞肺癌A549和小鼠LLC Lewis肺癌细胞采用梯度递增法建立紫杉醇耐药细胞株A549/DOX和LLC/DOX。采用蛋白质免疫印迹(Western blot)分析耐药和非耐药细胞株Beclin1蛋白表达水平。采用对照慢病毒和Beclin1慢病毒感染A549/DOX和LLC/DOX，建立A549/DOX组、A549/DOX/Beclin1组、LLC/DOX和LLC/DOX Beclin1组，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色、克隆形成实验和体外移植瘤分析紫杉醇对4组细胞增殖的影响。采用流式细胞仪分析紫杉醇对4组细胞凋亡的影响；Western blot分析4组细胞凋亡和自噬相关蛋白表达水平。计量资料比较采用t检验。结果A549/DOX组和LLC/DOX组细胞48 h吸光度(A)值(1.63±0.05、1.72±0.13)明显高于A549/DOX/Beclin1组和LLC/DOX Beclin1组(1.09±0.13、1.21±0.06)，差异有统计学意义(t＝9.895、9.624，P<0.05)。EdU染色结果显示，A549/DOX组和LLC/DOX组细胞EdU染色阳性率[(93.71±2.81)%、(95.29±3.54)%]明显高于A549/DOX/Beclin1组和LLC/DOX Beclin1组[(62.14±7.52)%、(70.14±6.09)%]，差异有统计学意义(t＝10.410、9.435，P<0.05)。克隆形成实验结果显示，A549/DOX组和LLC/DOX组细胞克隆形成数量[(115.43±10.75)、(142.57±23.71)个]明显高于A549/DOX/Beclin1组和LLC/DOX Beclin1组[(71.57±7.98)、(86.14±3.13)个]，差异有统计学意义(t＝8.667、6.224，P<0.05)。A549/DOX组和LLC/DOX组细胞肿瘤体积[(823.71±44.89)、(1 144.86±106.45) mm3]明显高于A549/DOX/Beclin1组和LLC/DOX Beclin1组[(585.57±41.80)、(774.14±48.95) mm3]，差异有统计学意义(t＝8.667、6.224，P<0.05)。A549/DOX组和LLC/DOX组肿瘤重量[(2.53±0.27)、(2.87±0.41) g]明显高于A549/DOX/Beclin1组和LLC/DOX Beclin1组[(1.15±0.09) g、(1.46±0.13) g]，差异有统计学意义(t＝12.660、8.730，P<0.05)。A549/DOX组和LLC/DOX组细胞凋亡水平[(33.16±3.31)%、(29.32±3.62)%]明显低于A549/DOX/Beclin1组和LLC/DOX Beclin组细胞[(56.00±3.87)%、(62.05±4.15)%]，差异有统计学意义(t＝12.660、8.730，P<0.05)。A549/DOX和LLC/DOX细胞p62蛋白表达水平(2.82±0.19、2.59±0.33)明显高于A549/DOX/Beclin1组和LLC/DOX Beclin1组p62蛋白表达水平(1.01±0.10、1.21±0.10)，差异有统计学意义(t＝22.400、10.500，P<0.05)。A549/DOX组和LLC/DOX组细胞半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3蛋白表达水平(0.65±0.12、0.78±0.06)明显低于A549/DOX/Beclin1组和LLC/DOX Beclin1组(1.49±0.14、1.56±0.12)，差异有统计学意义(t＝11.470、15.280，P<0.05)。结论Beclin1通过调节细胞凋亡和自噬，介导肺癌细胞对紫杉醇的耐药性。

简介：摘要目的探讨自噬标志基因Beclin1过表达对黑素瘤SK-MEL-2细胞生物学行为的影响。方法Western印迹技术检测黑素瘤细胞A375、SK-MEL-2中Beclin1的蛋白表达水平，选取低表达Beclin1蛋白的SK-MEL-2细胞株作为研究对象，将细胞分为空白组、阴性对照组、实验组，空白组不作处理，阴性对照组转染pcDNA.3.1/myc-His（-）A，实验组转染pcDNA3.1-Beclin1质粒。培养一定时间后，采用CCK8法分析Beclin1对细胞增殖的影响；Transwell实验和细胞划痕实验观察Beclin1过表达对SK-MEL-2细胞侵袭和迁移能力的影响。采用重复测量方差分析和完全随机设计方差分析检验各组间的指标差异，组间比较采用LSD-t检验。结果SK-MEL-2细胞Beclin1蛋白相对表达水平（0.037 ± 0.010）显著低于A375细胞（0.670 ± 0.150），F = 46.62，P<0.05。实验组Beclin1蛋白相对表达水平（0.32 ± 0.04）显著高于阴性对照组（0.06 ± 0.02）和空白组（0.07 ± 0.02），均P<0.05。CCK8实验结果显示，不同组间、不同时间细胞增殖率差异均有统计学意义（F组间 = 1 077.36，F时间 = 4 903.04，均P<0.05），组别和时间之间有交互作用（F交互 = 205.20，P<0.05）。Transwell实验显示，24 h后实验组高倍（× 200）视野下穿过小室的细胞数（18.67 ± 1.19）明显低于阴性对照组（87.89 ± 6.05）和空白组（86.78 ± 5.93），均P<0.05；划痕实验中24、48 h时实验组细胞迁移距离均显著低于空白组和阴性对照组（P<0.05）。结论Beclin1过表达可显著抑制SK-MEL-2细胞的增殖、侵袭和迁移。

简介：摘要目的探讨自噬相关分子Beclin1和LC3在糖尿病足多重耐药金黄色葡萄球菌感染中的作用。方法选取2017年3月至12月间杭州市余杭区第一人民医院收治的金黄色葡萄球菌感染的糖尿病足患者62例为糖尿病足感染组，同期在本院就诊的足部烧伤患者38例为对照组。分离、鉴定金黄色葡萄球菌并进行药敏试验，根据耐药情况将糖尿病足感染组患者进一步分为多重耐药组、非多重耐药组。免疫组化法检测足部创面肉芽组织中Beclin1和LC3表达水平，免疫荧光双染色法检测巨噬细胞中LC3表达水平。结果糖尿病足感染组患者糖化血红蛋白、白细胞计数、红细胞沉降率明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。糖尿病足感染组62例患者中检出多重耐药金黄色葡萄球菌30例(48.39%)；对照组38例患者中检出多重耐药金黄色葡萄球菌2例(5.26%)；糖尿病足感染组多重耐药金黄色葡萄球菌检出率明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。多重耐药组患者白细胞计数、中性粒细胞比率、C反应蛋白水平明显高于非多重耐药组，差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化检测显示，糖尿病足感染组创面肉芽组织中Beclin1、LC3表达水平明显低于对照组，差异有统计学意义(P<0.01)；多重耐药组患者创面肉芽组织中Beclin1、LC3表达水平明显低于非多重耐药组患者，差异有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光双染色检测显示，糖尿病足感染组患者创面肉芽组织中LC3、CD14共表达强度明显低于对照组。结论金黄色葡萄球菌感染的糖尿病足患者创面肉芽组织中Beclin1、LC3表达明显下降，且多重耐药金黄色葡萄球菌感染者下降更明显；糖尿病足患者金黄色葡萄球菌多重耐药性的发生与发展可能与自噬水平减弱有关。

简介：摘要目的探讨自噬相关分子Beclin1和LC3在糖尿病足多重耐药金黄色葡萄球菌感染中的作用。方法选取2017年3月至12月间杭州市余杭区第一人民医院收治的金黄色葡萄球菌感染的糖尿病足患者62例为糖尿病足感染组，同期在本院就诊的足部烧伤患者38例为对照组。分离、鉴定金黄色葡萄球菌并进行药敏试验，根据耐药情况将糖尿病足感染组患者进一步分为多重耐药组、非多重耐药组。免疫组化法检测足部创面肉芽组织中Beclin1和LC3表达水平，免疫荧光双染色法检测巨噬细胞中LC3表达水平。结果糖尿病足感染组患者糖化血红蛋白、白细胞计数、红细胞沉降率明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。糖尿病足感染组62例患者中检出多重耐药金黄色葡萄球菌30例(48.39%)；对照组38例患者中检出多重耐药金黄色葡萄球菌2例(5.26%)；糖尿病足感染组多重耐药金黄色葡萄球菌检出率明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。多重耐药组患者白细胞计数、中性粒细胞比率、C反应蛋白水平明显高于非多重耐药组，差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化检测显示，糖尿病足感染组创面肉芽组织中Beclin1、LC3表达水平明显低于对照组，差异有统计学意义(P<0.01)；多重耐药组患者创面肉芽组织中Beclin1、LC3表达水平明显低于非多重耐药组患者，差异有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光双染色检测显示，糖尿病足感染组患者创面肉芽组织中LC3、CD14共表达强度明显低于对照组。结论金黄色葡萄球菌感染的糖尿病足患者创面肉芽组织中Beclin1、LC3表达明显下降，且多重耐药金黄色葡萄球菌感染者下降更明显；糖尿病足患者金黄色葡萄球菌多重耐药性的发生与发展可能与自噬水平减弱有关。

简介：摘要目的观察慢性氟中毒大鼠肝脏微管相关蛋白1轻链3（LC3）B、P62、Beclin1的蛋白和mRNA表达，探讨自噬在氟中毒肝损伤发病机制中的作用。方法采用成组设计，54只SD大鼠，按照体重（100 ~ 120 g）采用随机数字表法分为9组，每组6只，雌雄各半，分别为对照组（NC组）、低氟组（LF组）、高氟组（HF组）、NC +雷帕霉素（RAP）组、LF + RAP组、HF + RAP组、NC +氯喹（CQ）组、LF + CQ组、HF + CQ组。NC组饮用自来水（氟离子浓度< 0.5 mg/L），LF和HF组分别饮用氟离子浓度为5.0、50.0 mg/L含氟水；NC + RAP、LF + RAP、HF + RAP组分别以相应的饮水饲养3个月后经腹腔每天注射1.5 mg/kg RAP，共10 d；NC + CQ、LF + CQ、HF + CQ组分别以相应的饮水饲养3个月后经腹腔每天注射60 mg/kg CQ，共10 d。采集各组大鼠四肢骨、24 h尿液，检测骨氟、尿氟含量；苏木素-伊红染色法观察肝组织形态学变化；免疫组织化学法、实时荧光定量PCR法检测肝脏LC3B、P62、Beclin1蛋白和mRNA表达情况。结果染氟后，与NC组比较[（0.03 ± 0.00）mg/kg、（0.34 ± 0.08）mg/L]，HF组骨氟[（3.86 ± 0.08）mg/kg]、尿氟含量[（1.11 ± 0.16）mg/L]均较高（P均< 0.05）。光镜下，NC组大鼠肝组织小叶结构清晰，肝索排列整齐，细胞结构正常，LF、HF组出现不同程度的肝细胞水肿；给予RAP后，与相应染氟组比较，肝细胞形态未见明显变化；给予CQ后，与相应染氟组比较，可见肝细胞明显水肿，随染氟浓度增加水肿程度加重。与NC组比较，HF组LC3B、Beclin1蛋白表达量较高（P均< 0.05），P62蛋白表达量较低（P < 0.05）。腹腔注射RAP后，与LF组比较，LF + RAP组LC3B、P62蛋白表达量较低（P均< 0.05）；与HF组比较，HF + RAP组LC3B、Beclin1蛋白表达量较低（P均< 0.05）。腹腔注射CQ后，与LF组比较，LF + CQ组P62蛋白表达量较高（P < 0.05）；与HF组比较，HF + CQ组P62蛋白表达量较高（P < 0.05）。结论早期（3个月）氟摄入可促进大鼠肝细胞自噬，引起肝细胞水肿，RAP有类似作用；CQ可能通过抑制肝细胞自噬而诱导肝脏损伤。

简介：摘要目的探讨微小RNA(miRNA，miR)-1290靶向Beclin 1对食管癌增殖、凋亡和迁移的影响及其分子机制。方法收集2016年12月到2019年6月河南省人民医院收治的98例食管癌组织和癌旁组织，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析miR-1290表达；采用慢病毒感染Eca-109食管癌细胞，建立miR-1290敲降细胞系和对照细胞系，分别为实验组和对照组。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力，采用流式细胞术检测细胞凋亡能力；采用Transwell分析细胞迁移能力。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-1290的靶基因；采用蛋白质印迹法(Western blot)分析miR-1290靶蛋白表达水平。组间数据比较采用t检验。结果与癌旁组织(1.23±0.19)比较，食管癌组织miR-1290表达水平(3.01±0.22)显著增加，差异有统计学意义(t＝2.091，P<0.05)。与对照组细胞(1.89±0.17)比较，实验组细胞吸光度值(1.08±0.12)显著下降，差异有统计学意义(t＝2.817，P<0.05)。与对照组细胞凋亡率[(5.49±1.25)%]比较，实验组细胞凋亡率[(29.21±3.84)%]显著增加，差异有统计学意义(t＝4.219，P<0.05)。与对照组细胞迁移数量[(139.28±18.62)个]比较，实验组细胞迁移数量[(84.59±8.59)个]显著下降，差异有统计学意义(t＝3.188，P<0.05)。生物信息学和双荧光素酶报告基因显示Beclin 1是miR-1290的靶基因。与癌旁组织(1.09±0.19)比较，食管癌组织中Beclin 1蛋白表达水平(0.41±0.15)显著下降，差异有统计学意义(t＝3.001，P<0.05)。与对照组细胞(0.51±0.11)比较，实验组细胞Beclin 1蛋白表达水平(0.98±0.20)显著增加，差异有统计学意义(t＝2.018，P<0.05)。结论miR-1290通过靶向调控Beclin 1的表达促进食管癌细胞增殖、凋亡和迁移。

简介：摘要目的探讨手足口病(HFMD)患儿Beclin-1、细胞色素C(CytC)表达水平及其临床意义。方法将60例HFMD患儿分为普通型组和重症组，每组30例；选取泌尿外科收治的行包皮环切术且无基础疾病的30例患儿作为对照组。检测患儿治疗前后血清Beclin-1、CytC、S100B蛋白水平；检测重症HFMD患儿治疗前后脑脊液Beclin-1、CytC水平。采用受试者操作特征曲线(ROC曲线)评价Beclin-1和CytC对重症HFMD的预测效能。结果重症HFMD患儿血清Beclin-1、CytC水平较其他2组显著升高(P<0.01)；普通型组患儿血清Beclin-1、CytC水平较对照组明显升高(P<0.01)。与治疗前相比较，重症及普通型组HFMD患儿血清Beclin-1、CytC水平显著下降(P<0.05)。重症HFMD患儿脑脊液Beclin-1、CytC水平较普通型组显著升高(P<0.01)，治疗进入恢复期后脑脊液Beclin-1、CytC水平较治疗前显著降低(P<0.01)。血清Beclin-1、CytC水平与S100B蛋白水平呈正相关。当血清CytC在38.785 ng/ml时其Youden值最大，为0.533，其对重症HFMD预测的灵敏度为56.67%，特异度为96.67%。血清Beclin-1在6.560 ng/ml时其Youden值最大，为0.467，其对重症HFMD预测的灵敏度为46.67%，特异度为100.00%。两个指标并联检测的灵敏度为76.67%，特异度为96.67%，对预测重症HFMD的价值最高。结论血清Beclin-1、CytC有助于判断HFMD病情轻重及治疗效果；二者并联检测对重症HFMD的预测价值更高。

简介：摘要目的研究亚砷酸钠（NaAsO2）对人肝星状细胞（LX-2细胞）自噬蛋白微管相关蛋白轻链3（LC3）、Beclin-1的影响。方法体外培养LX-2细胞，使用红色荧光蛋白-绿色荧光蛋白-LC3（RFP-GFP-LC3）慢病毒稳定感染LX-2细胞，流式细胞术进行筛选和感染率测定。采用成组设计，用不同浓度NaAsO2[μmol/L：5.00（感染+高砷剂量组）、0.50（感染+中砷剂量组）、0.05（感染+低砷剂量组）、0.00（感染组）]孵育稳定感染LX-2细胞，构建体外肝纤维化模型，同时设立空白组。采用CCK-8法检测NaAsO2对LX-2细胞活性的影响；采用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法检测LC3、Beclin-1、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）mRNA和蛋白表达水平。结果RFP-GFP-LC3慢病毒稳定感染LX-2细胞后，流式细胞术测定RFP、GFP荧光，感染率在70%左右，荧光显微镜下观测RFP和GFP的荧光强度无显著性差异，稳定感染细胞株建立成功。NaAsO2处理24、48、72 h，与空白组比较，感染组细胞活性差异无统计学意义（P均> 0.05），其余各剂量组细胞活性均下降（P均< 0.05）。各组间LC3、Beclin-1、α-SMA mRNA和蛋白表达水平比较差异有统计学意义（F = 17.450、11.084，11.294、11.745，31.635、12.130，P均< 0.05）。LC3 mRNA水平，感染组、感染+高砷剂量组、感染+低砷剂量组（20.09 ± 6.50、36.57 ± 9.68、14.19 ± 6.17）高于空白组（1.25 ± 0.21，P均< 0.05），感染+高砷剂量组高于感染组（P < 0.05）；Beclin-1 mRNA水平，各组（22.46 ± 0.66、13.38 ± 2.27、20.80 ± 6.95、24.31 ± 7.09）高于空白组（1.10 ± 0.53，P均< 0.05）；α-SMA mRNA水平，感染+高砷剂量组、感染+中砷剂量组、感染+低砷剂量组（1.07 ± 0.27、1.65 ± 0.17、1.73 ± 0.26）高于空白组（0.60 ± 0.11）、感染组（0.31 ± 0.09，P均< 0.05）。LC3蛋白表达，感染组、感染+中砷剂量组、感染+低砷剂量组（0.20 ± 0.06、0.15 ± 0.00、0.16 ± 0.01）高于空白组（0.04 ± 0.01，P均< 0.05）；Beclin-1蛋白表达，感染+中砷剂量组、感染+低砷剂量组（0.83 ± 0.03、1.20 ± 0.02）高于空白组（0.25 ± 0.01，P均< 0.05），感染+低砷剂量组高于感染组（0.53 ± 0.03，P < 0.05）；α-SMA蛋白表达，感染+中砷剂量组、感染+低砷剂量组（0.78 ± 0.10、0.68 ± 0.06）高于空白组（0.40 ± 0.07）、感染组（0.48 ± 0.04，P均< 0.05）。结论NaAsO2可能通过促进LX-2细胞自噬水平影响砷致肝纤维化过程。

简介：摘要目的探讨自噬相关基因Beclin-1、LC3和p62在食管鳞状细胞癌（ESCC）中的表达及意义。方法回顾性分析2015年1月至2016年12月解放军陆军第八十一集团军医院接受手术治疗的112例原发性ESCC患者的临床资料。免疫组织化学法检测112例ESCC组织及31例癌旁正常食管黏膜组织中Beclin-1、p62和LC3蛋白的表达情况，分析3种自噬相关标志物在ESCC中的表达及其与患者临床病理特征的关系。结果112例ESCC组织中Beclin-1、LC3和p62阳性表达率分别为32.14%（36/112）、37.50%（42/112）和63.39%（71/112），31例癌旁正常食管黏膜阳性表达率分别为61.29%（19/31）、64.52%（20/31）和32.26%（10/31），差异均有统计学意义（χ2值分别为8.715、7.216、9.584，均P<0.01）。Beclin-1、LC3在ESCC中的阳性表达率均低于癌旁正常食管黏膜，p62在ESCC中的阳性表达率则高于癌旁正常食管黏膜。Beclin-1表达与ESCC患者组织学分级、肿瘤浸润深度、TNM分期、是否存在淋巴结转移均有关（均P<0.05）；LC3表达与ESCC患者肿瘤浸润深度、TNM分期均有关（均P<0.01）；p62表达与ESCC患者是否存在淋巴结转移有关（P<0.01）。在ESCC中，LC3与Beclin-1的表达呈正相关（r＝0.731，P＝0.001），而与p62的表达呈负相关（r＝-0.215，P＝0.023）。结论自噬在ESCC的发生、发展中发挥一定作用，联合检测自噬相关基因Beclin-1、p62和LC3可辅助临床诊断并指导后续综合治疗。

简介：摘要老年男性右肺上叶3.5 cm×2.5 cm大小肿块，显微镜下示肿瘤由2种成分构成，主要以小到中等、蓝圆细胞片巢状分布为主，胞质较少，核呈泡状，核仁明显，另一部分肿瘤细胞透亮，2部分可见过渡，均异型性显著，核分裂象易见。免疫组织化学显示INI1（SMARCB1）缺失，BRG1（SMARCA4）未缺失，广谱细胞角蛋白（CKpan）、p40、细胞角蛋白（CK）5/6、p63、突触素均阳性，甲状腺转录因子1灶区阳性，CK7少量阳性，生长抑素受体2个别细胞阳性，CD56个别细胞阳性，Ki-67阳性指数50%。基因检测示INI1（SMARCB1）拷贝数异常以及EGFR、DIS3、BRIP1、HMCN1、PLCG2、RAD21、TSC2基因突变，病理诊断为INI1（SMARCB1）缺失低分化癌伴有鳞、腺及神经内分泌免疫表型。INI1（SMARCB1）蛋白是染色体重塑相关多聚体蛋白SWI/SNF的一个亚单位，SWI/SNF复合体缺失的未分化癌对传统化疗药物不敏感、预后差，但组蛋白甲基转移酶抑制剂治疗可能有效，而本例极易与低分化鳞癌、腺鳞癌混淆，故将INI1（SMARCB1）缺失的肿瘤识别出来十分必要。

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简介：摘要颅内黏液样间叶性肿瘤是一种罕见的肿瘤，分子遗传学伴EWSR1与CREB家族基因融合。本文报道1例9岁男性患儿，小脑占位性病变，肿瘤结节状生长，界限清楚，肿瘤细胞椭圆形、梭形或星芒状，疏密不等，大部分呈条索状或疏松网状分布于黏液性间质中，间质内可见“石棉样”纤维，局灶细胞较丰富，呈片状排列。免疫组织化学结果：波形蛋白阳性，结蛋白及CD68部分阳性，上皮细胞膜抗原及CD99弱阳性，胶质纤维酸性蛋白、Olig2、S-100蛋白、平滑肌肌动蛋白、p63、CD34等均阴性，p53野生型表达，热点区Ki-67阳性指数约20%。分子表型：荧光原位杂交检测到EWSR1基因分离，二代测序检测出EWSR1-CREB1及SELENOW-EWSR1融合基因。病理诊断为伴EWSR1-CREB1融合的颅内黏液样间叶性肿瘤。术后7个月，患者状态良好，无复发及转移。诊断时应与脑膜瘤、胶质瘤、伴EWSR1-CREB家族基因融合的其他肿瘤及骨外黏液样软骨肉瘤等形态相似的肿瘤鉴别。

简介：摘要免疫检查点抑制剂(ICI)的出现是肿瘤免疫治疗的重大突破，但其独特的作用机制也带来了许多免疫相关不良反应（irAE）。1型糖尿病（T1DM）是极为罕见的irAE之一，通过报道一例晚期肝恶性肿瘤患者在接受二线抗PD-1治疗后出现以血糖升高及高渗昏迷为初发症状的T1DM病例，并搜集回顾国内外相关文献，总结抗PD-1治疗诱发的T1DM的临床特征，以期达到早发现、早诊断、早治疗。

简介：无

简介：摘要患儿　男，3岁9月龄，以“排稀便10个月、间断抽搐4个月”就诊，经乳糜泻抗体、人类白细胞抗原（HLA）-DQ基因检测、十二指肠病理活检明确诊断为乳糜泻，予去麦麸类饮食以及对症营养治疗后好转。随访过程中出现多饮多尿，查血糖明显升高，尿糖、尿酮体阳性，诊断为乳糜泻合并1型糖尿病，给予对症补充胰岛素治疗。随访6年患儿血糖控制平稳，生长发育正常。

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简介：AbstractBackground:Emerging evidence indicates that the sineoculis homeobox homolog 1-eyes absent homolog 1 (SIX1-EYA1) transcriptional complex significantly contributes to the pathogenesis of multiple cancers by mediating the expression of genes involved in different biological processes, such as cell-cycle progression and metastasis. However, the roles of the SIX1-EYA1 transcriptional complex and its targets in colorectal cancer (CRC) are still being investigated. This study aimed to investigate the roles of SIX1-EYA1 in the pathogenesis of CRC, to screen inhibitors disrupting the SIX1-EYA1 interaction and to evaluate the efficiency of small molecules in the inhibition of CRC cell growth.Methods:Real-time quantitative polymerase chain reaction and western blotting were performed to examine gene and protein levels in CRC cells and clinical tissues (collected from CRC patients who underwent surgery in the Department of Integrated Traditional and Western Medicine, West China Hospital of Sichuan University, between 2016 and 2018, n = 24). In vivo immunoprecipitation and in vitro pulldown assays were carried out to determine SIX1-EYA1 interaction. Cell proliferation, cell survival, and cell invasion were determined using the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay, clonogenic assay, and Boyden chamber assay, respectively. The Amplified Luminescent Proximity Homogeneous Assay Screen (AlphaScreen) method was used to obtain small molecules that specifically disrupted SIX1-EYA1 interaction. CRC cells harboring different levels of SIX1/EYA1 were injected into nude mice to establish tumor xenografts, and small molecules were also injected into mice to evaluate their efficiency to inhibit tumor growth.Results:Both SIX1 and EYA1 were overexpressed in CRC cancerous tissues (for SIX1, 7.47 ± 3.54 vs.1.88 ± 0.35, t = 4.92, P = 0.008; for EYA1, 7.61 ± 2.03 vs. 2.22 ± 0.45, t = 6.73, P = 0.005). The SIX1/EYA1 complex could mediate the expression of two important genes including cyclin A1 (CCNA1) and transforming growth factor beta 1 (TGFB1) by binding to the myocyte enhancer factor 3 consensus. Knockdown of both SIX1 and EYA1 could decrease cell proliferation, cell invasion, tumor growth, and in vivo tumor growth (all P < 0.01). Two small molecules, NSC0191 and NSC0933, were obtained using AlphaScreen and they could significantly inhibit the SIX1-EYA1 interaction with a half-maximal inhibitory concentration (IC50) of 12.60 ± 1.15 μmol/L and 83.43 ± 7.24 μmol/L, respectively. Administration of these two compounds could significantly repress the expression of CCNA1 and TGFB1 and inhibit the growth of CRC cells in vitro and in vivo.Conclusions:Overexpression of the SIX1/EYA1 complex transactivated the expression of CCNA1 and TGFB1, causing the pathogenesis of CRC. Pharmacological inhibition of the SIX1-EYA1 interaction with NSC0191 and NSC0933 significantly inhibited CRC cell growth by affecting cell-cycle progression and metastasis.

简介：摘要帕金森病(PD)是世界上第二常见的神经退行性疾病，它的发病机制与线粒体功能障碍、氧化应激反应以及钙稳态失衡有关。近年来，PD与Ca2+的关系成为研究热点，钙稳态失衡可通过不同的途径导致PD。细胞内Ca2+水平取决于钙库操纵性钙内流(SOCE)，而SOCE由钙释放激活钙通道调节分子1(Orai1)、基质相互作用分子1(STIM1)及瞬时受体电位通道1(TRPC1)相互作用组成的功能复合体调节。常见的PD神经毒素可通过降低Orai1-STIM1-TRPC1复合体功能，损伤SOCE及其下游的信号通路选择性损伤多巴胺能神经元，并且Orai1-STIM1-TRPC1复合体可能通过作用于小胶质细胞以及内质网调控神经炎症、自噬现象以影响PD的发生发展。因此恢复Orai1-STIM1-TRPC1复合体表达及功能，维持钙稳态可能成为PD的有效治疗靶点。

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