简介：摘要目的探讨Beclin1对肺癌细胞紫杉醇耐药的影响及其分子机制。方法人非小细胞肺癌A549和小鼠LLC Lewis肺癌细胞采用梯度递增法建立紫杉醇耐药细胞株A549/DOX和LLC/DOX。采用蛋白质免疫印迹(Western blot)分析耐药和非耐药细胞株Beclin1蛋白表达水平。采用对照慢病毒和Beclin1慢病毒感染A549/DOX和LLC/DOX，建立A549/DOX组、A549/DOX/Beclin1组、LLC/DOX和LLC/DOX Beclin1组，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色、克隆形成实验和体外移植瘤分析紫杉醇对4组细胞增殖的影响。采用流式细胞仪分析紫杉醇对4组细胞凋亡的影响；Western blot分析4组细胞凋亡和自噬相关蛋白表达水平。计量资料比较采用t检验。结果A549/DOX组和LLC/DOX组细胞48 h吸光度(A)值(1.63±0.05、1.72±0.13)明显高于A549/DOX/Beclin1组和LLC/DOX Beclin1组(1.09±0.13、1.21±0.06)，差异有统计学意义(t＝9.895、9.624，P<0.05)。EdU染色结果显示，A549/DOX组和LLC/DOX组细胞EdU染色阳性率[(93.71±2.81)%、(95.29±3.54)%]明显高于A549/DOX/Beclin1组和LLC/DOX Beclin1组[(62.14±7.52)%、(70.14±6.09)%]，差异有统计学意义(t＝10.410、9.435，P<0.05)。克隆形成实验结果显示，A549/DOX组和LLC/DOX组细胞克隆形成数量[(115.43±10.75)、(142.57±23.71)个]明显高于A549/DOX/Beclin1组和LLC/DOX Beclin1组[(71.57±7.98)、(86.14±3.13)个]，差异有统计学意义(t＝8.667、6.224，P<0.05)。A549/DOX组和LLC/DOX组细胞肿瘤体积[(823.71±44.89)、(1 144.86±106.45) mm3]明显高于A549/DOX/Beclin1组和LLC/DOX Beclin1组[(585.57±41.80)、(774.14±48.95) mm3]，差异有统计学意义(t＝8.667、6.224，P<0.05)。A549/DOX组和LLC/DOX组肿瘤重量[(2.53±0.27)、(2.87±0.41) g]明显高于A549/DOX/Beclin1组和LLC/DOX Beclin1组[(1.15±0.09) g、(1.46±0.13) g]，差异有统计学意义(t＝12.660、8.730，P<0.05)。A549/DOX组和LLC/DOX组细胞凋亡水平[(33.16±3.31)%、(29.32±3.62)%]明显低于A549/DOX/Beclin1组和LLC/DOX Beclin组细胞[(56.00±3.87)%、(62.05±4.15)%]，差异有统计学意义(t＝12.660、8.730，P<0.05)。A549/DOX和LLC/DOX细胞p62蛋白表达水平(2.82±0.19、2.59±0.33)明显高于A549/DOX/Beclin1组和LLC/DOX Beclin1组p62蛋白表达水平(1.01±0.10、1.21±0.10)，差异有统计学意义(t＝22.400、10.500，P<0.05)。A549/DOX组和LLC/DOX组细胞半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3蛋白表达水平(0.65±0.12、0.78±0.06)明显低于A549/DOX/Beclin1组和LLC/DOX Beclin1组(1.49±0.14、1.56±0.12)，差异有统计学意义(t＝11.470、15.280，P<0.05)。结论Beclin1通过调节细胞凋亡和自噬，介导肺癌细胞对紫杉醇的耐药性。

简介：目的:观察自噬相关基因Beclin1在银杏酮酯(Ginkgobilobaextract,GBE50)改善衰老大鼠学习记忆中的作用。方法:采用出生24h内乳鼠的海马组织,提取海马神经元,H2O2建立神经元衰老模型,免疫荧光方法鉴定神经元纯度,并用GBE50和阳性对照药银杏叶提取物(EGB761)预处理,免疫印迹方法检测Beclin1蛋白水平。21月龄大鼠随机分为模型组、GBE50组和EGB761组,1月龄大鼠作为正常组,其中正常组和模型组用1%羧甲基纤维素钠灌胃,GBE50组和EGB761组分别每日予100mg/kg的药物灌胃。疗程60d,结束后避暗实验检测大鼠学习记忆,Real-timePCR方法检测海马Beclin1mRNA表达,Westernblot方法检测海马Beclin1、LC3-Ⅱ和SynapsinⅠ蛋白表达。结果:(1)细胞实验结果显示,光镜下观察培养6~7d时海马神经元逐渐成熟,免疫荧光鉴定神经元纯度达到90%以上;GBE50组和EGB761组的衰老海马神经元中Beclin1蛋白表达明显增加(P<0.05)。(2)动物实验结果显示,GBE50组和EGB761组大鼠避暗实验潜伏期明显较模型组延长,海马Beclin1mRNA和蛋白表达及LC3-Ⅱ和SynapsinⅠ蛋白表达均明显高于模型组(P<0.05)。结论:GBE50改善衰老相关学习记忆的作用,可能与其上调海马Beclin1表达有关。

简介：摘要目的研究自噬相关蛋白Beclin1在喉鳞癌组织中的表达与意义。方法应用免疫组织化的方法检测Beclin1在声带息肉及喉鳞癌组织中的表达水平。结果在喉鳞癌组织中Beclin1的表达高于声带息肉组织，差异有统计学意义（P<0.05）。结论Beclin1在喉鳞癌组织中表达降低，可能参与喉癌的发生发展过程。

简介：目的观察Beclin1降低局部晚期结肠癌患者死亡风险的机制。方法收集中山大学肿瘤防治中心腹科1997年1月至2003年8月有完整随访资料的104例ⅢB期（T3～T4N1M0）结肠癌根治术后石蜡包埋组织标本及临床资料，采用免疫组化方法及免疫荧光染色技术检测自噬相关关键蛋白Beclin1在ⅢB期结肠癌中的异常表达情况，并把增殖细胞核抗原（PCNA）与Beclin1行免疫荧光双染，观察它们共表达情况。结果Beclin1蛋白表达于肿瘤细胞膜、胞质和（或）细胞核，正常黏膜缺乏Beclin1表达。肿瘤组织Beclin1阳性率为83.7%（87/104），癌旁正常肠黏膜组织Beclin1免疫染色阴性；Beclin1表达者的5年生存率较高（69.8%vs.47.1%，P＝0.034）。Beclin1高表达的肿瘤细胞PCNA低表达，同时Beclin1低表达的肿瘤细胞PCNA高表达。结论Beclin1降低局部晚期结肠癌死亡风险的机制之一是抑制肿瘤细胞周期的进行及细胞的增殖分化，Beclin1可作为局部晚期结肠癌分子靶向治疗的靶标。可通过细胞株及动物模型进一步证实其机制。

简介：摘要目的探讨自噬标志基因Beclin1过表达对黑素瘤SK-MEL-2细胞生物学行为的影响。方法Western印迹技术检测黑素瘤细胞A375、SK-MEL-2中Beclin1的蛋白表达水平，选取低表达Beclin1蛋白的SK-MEL-2细胞株作为研究对象，将细胞分为空白组、阴性对照组、实验组，空白组不作处理，阴性对照组转染pcDNA.3.1/myc-His（-）A，实验组转染pcDNA3.1-Beclin1质粒。培养一定时间后，采用CCK8法分析Beclin1对细胞增殖的影响；Transwell实验和细胞划痕实验观察Beclin1过表达对SK-MEL-2细胞侵袭和迁移能力的影响。采用重复测量方差分析和完全随机设计方差分析检验各组间的指标差异，组间比较采用LSD-t检验。结果SK-MEL-2细胞Beclin1蛋白相对表达水平（0.037 ± 0.010）显著低于A375细胞（0.670 ± 0.150），F = 46.62，P<0.05。实验组Beclin1蛋白相对表达水平（0.32 ± 0.04）显著高于阴性对照组（0.06 ± 0.02）和空白组（0.07 ± 0.02），均P<0.05。CCK8实验结果显示，不同组间、不同时间细胞增殖率差异均有统计学意义（F组间 = 1 077.36，F时间 = 4 903.04，均P<0.05），组别和时间之间有交互作用（F交互 = 205.20，P<0.05）。Transwell实验显示，24 h后实验组高倍（× 200）视野下穿过小室的细胞数（18.67 ± 1.19）明显低于阴性对照组（87.89 ± 6.05）和空白组（86.78 ± 5.93），均P<0.05；划痕实验中24、48 h时实验组细胞迁移距离均显著低于空白组和阴性对照组（P<0.05）。结论Beclin1过表达可显著抑制SK-MEL-2细胞的增殖、侵袭和迁移。

简介：

简介：摘要目的探讨自噬相关分子Beclin1和LC3在糖尿病足多重耐药金黄色葡萄球菌感染中的作用。方法选取2017年3月至12月间杭州市余杭区第一人民医院收治的金黄色葡萄球菌感染的糖尿病足患者62例为糖尿病足感染组，同期在本院就诊的足部烧伤患者38例为对照组。分离、鉴定金黄色葡萄球菌并进行药敏试验，根据耐药情况将糖尿病足感染组患者进一步分为多重耐药组、非多重耐药组。免疫组化法检测足部创面肉芽组织中Beclin1和LC3表达水平，免疫荧光双染色法检测巨噬细胞中LC3表达水平。结果糖尿病足感染组患者糖化血红蛋白、白细胞计数、红细胞沉降率明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。糖尿病足感染组62例患者中检出多重耐药金黄色葡萄球菌30例(48.39%)；对照组38例患者中检出多重耐药金黄色葡萄球菌2例(5.26%)；糖尿病足感染组多重耐药金黄色葡萄球菌检出率明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。多重耐药组患者白细胞计数、中性粒细胞比率、C反应蛋白水平明显高于非多重耐药组，差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化检测显示，糖尿病足感染组创面肉芽组织中Beclin1、LC3表达水平明显低于对照组，差异有统计学意义(P<0.01)；多重耐药组患者创面肉芽组织中Beclin1、LC3表达水平明显低于非多重耐药组患者，差异有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光双染色检测显示，糖尿病足感染组患者创面肉芽组织中LC3、CD14共表达强度明显低于对照组。结论金黄色葡萄球菌感染的糖尿病足患者创面肉芽组织中Beclin1、LC3表达明显下降，且多重耐药金黄色葡萄球菌感染者下降更明显；糖尿病足患者金黄色葡萄球菌多重耐药性的发生与发展可能与自噬水平减弱有关。

简介：摘要目的探讨自噬相关分子Beclin1和LC3在糖尿病足多重耐药金黄色葡萄球菌感染中的作用。方法选取2017年3月至12月间杭州市余杭区第一人民医院收治的金黄色葡萄球菌感染的糖尿病足患者62例为糖尿病足感染组，同期在本院就诊的足部烧伤患者38例为对照组。分离、鉴定金黄色葡萄球菌并进行药敏试验，根据耐药情况将糖尿病足感染组患者进一步分为多重耐药组、非多重耐药组。免疫组化法检测足部创面肉芽组织中Beclin1和LC3表达水平，免疫荧光双染色法检测巨噬细胞中LC3表达水平。结果糖尿病足感染组患者糖化血红蛋白、白细胞计数、红细胞沉降率明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。糖尿病足感染组62例患者中检出多重耐药金黄色葡萄球菌30例(48.39%)；对照组38例患者中检出多重耐药金黄色葡萄球菌2例(5.26%)；糖尿病足感染组多重耐药金黄色葡萄球菌检出率明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。多重耐药组患者白细胞计数、中性粒细胞比率、C反应蛋白水平明显高于非多重耐药组，差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化检测显示，糖尿病足感染组创面肉芽组织中Beclin1、LC3表达水平明显低于对照组，差异有统计学意义(P<0.01)；多重耐药组患者创面肉芽组织中Beclin1、LC3表达水平明显低于非多重耐药组患者，差异有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光双染色检测显示，糖尿病足感染组患者创面肉芽组织中LC3、CD14共表达强度明显低于对照组。结论金黄色葡萄球菌感染的糖尿病足患者创面肉芽组织中Beclin1、LC3表达明显下降，且多重耐药金黄色葡萄球菌感染者下降更明显；糖尿病足患者金黄色葡萄球菌多重耐药性的发生与发展可能与自噬水平减弱有关。

简介：摘要目的观察慢性氟中毒大鼠肝脏微管相关蛋白1轻链3（LC3）B、P62、Beclin1的蛋白和mRNA表达，探讨自噬在氟中毒肝损伤发病机制中的作用。方法采用成组设计，54只SD大鼠，按照体重（100 ~ 120 g）采用随机数字表法分为9组，每组6只，雌雄各半，分别为对照组（NC组）、低氟组（LF组）、高氟组（HF组）、NC +雷帕霉素（RAP）组、LF + RAP组、HF + RAP组、NC +氯喹（CQ）组、LF + CQ组、HF + CQ组。NC组饮用自来水（氟离子浓度< 0.5 mg/L），LF和HF组分别饮用氟离子浓度为5.0、50.0 mg/L含氟水；NC + RAP、LF + RAP、HF + RAP组分别以相应的饮水饲养3个月后经腹腔每天注射1.5 mg/kg RAP，共10 d；NC + CQ、LF + CQ、HF + CQ组分别以相应的饮水饲养3个月后经腹腔每天注射60 mg/kg CQ，共10 d。采集各组大鼠四肢骨、24 h尿液，检测骨氟、尿氟含量；苏木素-伊红染色法观察肝组织形态学变化；免疫组织化学法、实时荧光定量PCR法检测肝脏LC3B、P62、Beclin1蛋白和mRNA表达情况。结果染氟后，与NC组比较[（0.03 ± 0.00）mg/kg、（0.34 ± 0.08）mg/L]，HF组骨氟[（3.86 ± 0.08）mg/kg]、尿氟含量[（1.11 ± 0.16）mg/L]均较高（P均< 0.05）。光镜下，NC组大鼠肝组织小叶结构清晰，肝索排列整齐，细胞结构正常，LF、HF组出现不同程度的肝细胞水肿；给予RAP后，与相应染氟组比较，肝细胞形态未见明显变化；给予CQ后，与相应染氟组比较，可见肝细胞明显水肿，随染氟浓度增加水肿程度加重。与NC组比较，HF组LC3B、Beclin1蛋白表达量较高（P均< 0.05），P62蛋白表达量较低（P < 0.05）。腹腔注射RAP后，与LF组比较，LF + RAP组LC3B、P62蛋白表达量较低（P均< 0.05）；与HF组比较，HF + RAP组LC3B、Beclin1蛋白表达量较低（P均< 0.05）。腹腔注射CQ后，与LF组比较，LF + CQ组P62蛋白表达量较高（P < 0.05）；与HF组比较，HF + CQ组P62蛋白表达量较高（P < 0.05）。结论早期（3个月）氟摄入可促进大鼠肝细胞自噬，引起肝细胞水肿，RAP有类似作用；CQ可能通过抑制肝细胞自噬而诱导肝脏损伤。

简介：

简介：真核细胞的房间的最惹人注目的形态特征是各种各样的围住膜的分隔空间的存在。包括细胞器和短暂运输中介，这些分隔空间不是静态的。更确切地说，蛋白质和膜的动态交换被需要维持细胞的动态平衡。膜动员的最戏剧的例子之一在macroautophagy的过程期间被看见。Macroautophagy是为长寿蛋白质和细胞器的降级的主要细胞的小径。响应环境暗示，例如饥饿或应力的另外的类型，房间生产唯一的膜结构，phagophore.Thephagophore扣押它形成一个双膜cytosolic泡的细胞质，anautophagosome。在结束之后，autophagosome与溶酶体熔化或在酵母的一个液泡，它交付水疗院放射激光与它的货物，和产生大分子一起毁坏内部autophagosome膜回来被释放进cytosol因为reuse.Autophagy因此是正在骑车过程，允许房间熬过滋养的限制的时期；然而，它有一个更宽的生理的角色，参予开发和老化，并且另外在对病原体侵略，癌症和某些neurodegenerative的保护疾病。在许多情况中，autophagy的角色通过autophagy相关的蛋白质的研究被识别，Atg6/Beclin1。这蛋白质是类脂化合物kinase建筑群的部分，并且最近的研究建议它在协调autophagy并且在反对apoptosis的细胞的死亡过程的thecytoprotective功能起一个中央作用。这里，我们总结我们Atg6/Beclin的当前的知识1在在细胞的不同模型有机体和它的唯一的功能。

简介：目的研究Beclin-1在肾癌中的表达及其临床意义。方法通过免疫组化检测肾癌中自噬相关基因Beclin-1的表达情况,初步探讨Beclin-1在肾癌组织中表达情况。并分析Beclin-1表达与肾癌复发及生存时间的相关性;多因素分析探讨其是否为肾癌预后的独立危险因素。结果对133例肾癌及12癌旁组织进行检测,肾癌组织中Beclin-1基因表达水平明显低于癌旁组织（P〈0.05）。Beclin-1基因阴性肾癌患者的复发率明显高于Beclin-1基因阳性患者（P=0.041）;Beclin-1阳性肾癌患者总体生存率明显高于Beclin-1阴性肾癌患者（P=0.008）。多因素分析显示,Beclin-1,肿瘤分级、分期及淋巴结转移与否是肾癌复发、死亡的独立预后因素。结论Beclin-1低表达是肾癌预后不良的独立危险因素,它可能成为肾癌个体化治疗的潜在靶点。

简介：摘要目的探讨微小RNA(miRNA，miR)-1290靶向Beclin 1对食管癌增殖、凋亡和迁移的影响及其分子机制。方法收集2016年12月到2019年6月河南省人民医院收治的98例食管癌组织和癌旁组织，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析miR-1290表达；采用慢病毒感染Eca-109食管癌细胞，建立miR-1290敲降细胞系和对照细胞系，分别为实验组和对照组。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力，采用流式细胞术检测细胞凋亡能力；采用Transwell分析细胞迁移能力。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-1290的靶基因；采用蛋白质印迹法(Western blot)分析miR-1290靶蛋白表达水平。组间数据比较采用t检验。结果与癌旁组织(1.23±0.19)比较，食管癌组织miR-1290表达水平(3.01±0.22)显著增加，差异有统计学意义(t＝2.091，P<0.05)。与对照组细胞(1.89±0.17)比较，实验组细胞吸光度值(1.08±0.12)显著下降，差异有统计学意义(t＝2.817，P<0.05)。与对照组细胞凋亡率[(5.49±1.25)%]比较，实验组细胞凋亡率[(29.21±3.84)%]显著增加，差异有统计学意义(t＝4.219，P<0.05)。与对照组细胞迁移数量[(139.28±18.62)个]比较，实验组细胞迁移数量[(84.59±8.59)个]显著下降，差异有统计学意义(t＝3.188，P<0.05)。生物信息学和双荧光素酶报告基因显示Beclin 1是miR-1290的靶基因。与癌旁组织(1.09±0.19)比较，食管癌组织中Beclin 1蛋白表达水平(0.41±0.15)显著下降，差异有统计学意义(t＝3.001，P<0.05)。与对照组细胞(0.51±0.11)比较，实验组细胞Beclin 1蛋白表达水平(0.98±0.20)显著增加，差异有统计学意义(t＝2.018，P<0.05)。结论miR-1290通过靶向调控Beclin 1的表达促进食管癌细胞增殖、凋亡和迁移。

简介：背景:离心运动会导致骨骼肌自噬水平改变,使骨骼肌超微结构发生改变,影响骨骼肌正常的收缩活动。目的:观察离心运动后不同时程骨骼肌细胞自噬的情况及Omi/Beclin-1信号通路的变化,以探究运动对骨骼肌自噬的影响及可能机制。方法:将32只健康雄性大鼠分为安静对照组(8只),离心运动组(24只)。离心运动组完成一次性跑台运动(坡度为-16°,速度为16m/min,时间为90min),在运动后即刻、24h、48h取材(各8只),使用Westernblot方法检测各组不同时程Lc3-Ⅱ、Omi、HAX-1、Beclin-1蛋白表达水平。结果与结论:①离心运动后,Lc3-Ⅱ、Omi、Beclin-1蛋白表达显著升高;Lc3-Ⅱ和Omi蛋白表达在运动后即刻达到最高峰;Beclin-1在运动后24h到达峰值;②离心运动后,HAX-1蛋白表达显著降低,在24h达到最低,之后开始恢复;运动后48h与安静组相比差异无显著性意义;③结果显示:离心运动可以导致骨骼肌细胞自噬增强,可能通过上调Omi/Beclin-1信号通路所致。

简介：摘要目的探讨手足口病(HFMD)患儿Beclin-1、细胞色素C(CytC)表达水平及其临床意义。方法将60例HFMD患儿分为普通型组和重症组，每组30例；选取泌尿外科收治的行包皮环切术且无基础疾病的30例患儿作为对照组。检测患儿治疗前后血清Beclin-1、CytC、S100B蛋白水平；检测重症HFMD患儿治疗前后脑脊液Beclin-1、CytC水平。采用受试者操作特征曲线(ROC曲线)评价Beclin-1和CytC对重症HFMD的预测效能。结果重症HFMD患儿血清Beclin-1、CytC水平较其他2组显著升高(P<0.01)；普通型组患儿血清Beclin-1、CytC水平较对照组明显升高(P<0.01)。与治疗前相比较，重症及普通型组HFMD患儿血清Beclin-1、CytC水平显著下降(P<0.05)。重症HFMD患儿脑脊液Beclin-1、CytC水平较普通型组显著升高(P<0.01)，治疗进入恢复期后脑脊液Beclin-1、CytC水平较治疗前显著降低(P<0.01)。血清Beclin-1、CytC水平与S100B蛋白水平呈正相关。当血清CytC在38.785 ng/ml时其Youden值最大，为0.533，其对重症HFMD预测的灵敏度为56.67%，特异度为96.67%。血清Beclin-1在6.560 ng/ml时其Youden值最大，为0.467，其对重症HFMD预测的灵敏度为46.67%，特异度为100.00%。两个指标并联检测的灵敏度为76.67%，特异度为96.67%，对预测重症HFMD的价值最高。结论血清Beclin-1、CytC有助于判断HFMD病情轻重及治疗效果；二者并联检测对重症HFMD的预测价值更高。

简介：目的：研究Beclin1在MG132抗OVCAR3卵巢癌细胞中的变化及作用。方法：OVCAR3细胞经小同浓度MG132处理24h后，MTT法检测细胞存活率，Westernblot法检测自噬相关Beclin1蛋白的变化。采用细胞转染技术过表达卵巢癌细胞中Beclin1，MG132处理24h后，MTT法检测细胞存活率；Hoechst33258进行核染色观察染色质浓缩和核碎片等凋亡特征性形态学改变。采用shRNA技术下调OVCAR3细胞的Beclin1表达，MG132处理细胞，AO染色观察酸性自噬泡的形成。结果：与空白对照组比较，1、2、5和10μmol/L浓度的MG132作用24h均能明显抑制OVCAR3细胞的生长（均P〈0．05），5μmol／L浓度接近半抑制率；而且5μmol／L和10μmol／L浓度的MG132作用24h能显著诱导OVCAR3细胞的Beclin1蛋白水平下降（P=0．001）。与卒质粒转染组对比，过表达Beclin1的卵巢癌细胞在MG132处理后核的凋亡明显增加；细胞存活率明显降低，（P=0．00089）。下调卵巢癌细胞中Beclin1表达后，MG132诱导的酸性囊泡蓄积无改变。结论：MG132使OVCAR3细胞中Beelin1降低，Beclin1具有增强MG132抗OVCAR3的作用，但该怍用与自噬无关。

简介：摘要目的研究亚砷酸钠（NaAsO2）对人肝星状细胞（LX-2细胞）自噬蛋白微管相关蛋白轻链3（LC3）、Beclin-1的影响。方法体外培养LX-2细胞，使用红色荧光蛋白-绿色荧光蛋白-LC3（RFP-GFP-LC3）慢病毒稳定感染LX-2细胞，流式细胞术进行筛选和感染率测定。采用成组设计，用不同浓度NaAsO2[μmol/L：5.00（感染+高砷剂量组）、0.50（感染+中砷剂量组）、0.05（感染+低砷剂量组）、0.00（感染组）]孵育稳定感染LX-2细胞，构建体外肝纤维化模型，同时设立空白组。采用CCK-8法检测NaAsO2对LX-2细胞活性的影响；采用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法检测LC3、Beclin-1、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）mRNA和蛋白表达水平。结果RFP-GFP-LC3慢病毒稳定感染LX-2细胞后，流式细胞术测定RFP、GFP荧光，感染率在70%左右，荧光显微镜下观测RFP和GFP的荧光强度无显著性差异，稳定感染细胞株建立成功。NaAsO2处理24、48、72 h，与空白组比较，感染组细胞活性差异无统计学意义（P均> 0.05），其余各剂量组细胞活性均下降（P均< 0.05）。各组间LC3、Beclin-1、α-SMA mRNA和蛋白表达水平比较差异有统计学意义（F = 17.450、11.084，11.294、11.745，31.635、12.130，P均< 0.05）。LC3 mRNA水平，感染组、感染+高砷剂量组、感染+低砷剂量组（20.09 ± 6.50、36.57 ± 9.68、14.19 ± 6.17）高于空白组（1.25 ± 0.21，P均< 0.05），感染+高砷剂量组高于感染组（P < 0.05）；Beclin-1 mRNA水平，各组（22.46 ± 0.66、13.38 ± 2.27、20.80 ± 6.95、24.31 ± 7.09）高于空白组（1.10 ± 0.53，P均< 0.05）；α-SMA mRNA水平，感染+高砷剂量组、感染+中砷剂量组、感染+低砷剂量组（1.07 ± 0.27、1.65 ± 0.17、1.73 ± 0.26）高于空白组（0.60 ± 0.11）、感染组（0.31 ± 0.09，P均< 0.05）。LC3蛋白表达，感染组、感染+中砷剂量组、感染+低砷剂量组（0.20 ± 0.06、0.15 ± 0.00、0.16 ± 0.01）高于空白组（0.04 ± 0.01，P均< 0.05）；Beclin-1蛋白表达，感染+中砷剂量组、感染+低砷剂量组（0.83 ± 0.03、1.20 ± 0.02）高于空白组（0.25 ± 0.01，P均< 0.05），感染+低砷剂量组高于感染组（0.53 ± 0.03，P < 0.05）；α-SMA蛋白表达，感染+中砷剂量组、感染+低砷剂量组（0.78 ± 0.10、0.68 ± 0.06）高于空白组（0.40 ± 0.07）、感染组（0.48 ± 0.04，P均< 0.05）。结论NaAsO2可能通过促进LX-2细胞自噬水平影响砷致肝纤维化过程。

简介：目的：beclin1基因慢病毒表达载体稳定感染三阴性乳腺癌BT549细胞后,于短程低氧条件下探讨beclin1基因对上皮间质转化（EMT）的影响。方法用带有pLenO-GTPVector及pLenO-GTP-beclin1Vector的慢病毒以感染复数（MOI）为20分别感染BT549细胞,即实验对照组及实验组,未感染细胞作为空白对照。感染96h后用倒置荧光显微镜观察荧光,估计感染效率；用Westernblot法检测beclin1基因是否在BT549细胞中稳定表达；将各组细胞低氧培养12、24h后采用荧光定量PCR、Westernblot法及激光共聚焦显微镜检测EMT相关标志物；用Westernblot法检测低氧培养24h后的各组细胞Wnt/β-catenin信号通路的相关蛋白表达水平。用两样本t检验分析低氧时间对细胞EMT相关标志物的表达情况,余计量资料用方差分析进行统计。结果慢病毒感染BT549细胞96h后,感染效率约为100%,实验组beclin1蛋白高效稳定表达（F=107．200,P=0．000）；低氧条件下,相对于空白对照组、实验对照组,实验组细胞的上皮标志物E-cadherinmRNA和蛋白表达水平上调（12h：F=122．451、P=0．000,F=29．651、P=0．001；24h：F=108．783、P=0．000,F=41．232、P=0．000）,而间皮标志物N-cadherin、vimentin及fibronectin表达水平下调（12h：N-cadherinF=92．918、P=0．000、F=138．034、P=0．000,vimentinF=135．313、P=0．000、F=39．765、P=0．000,fibronectinF=144．275、P=0．000；24h：N-cadherinF=76．064、P=0．000、F=40．614、P=0．000,vimentinF=206．576、P=0．000、F=46．658、P=0．000,fibronectinF=411．405、P=0．000）；相对于低氧培养12h,各组细胞低氧培养24h后E-cadherin表达水平下调（空白对照组：t=4．266、P=0．013,t=11．235、P=0．000；实验对照组：t=10．463、P=0．000,t=4．092、P=0．009；实验组：t=28．208、P=0．000,t=7．262、P=0．001）,而N-cadherin（实验组除外）、vimentin和fibronectin表达水平上调（空白对�

简介：目的研究转染beclin-1基因对三阴性乳腺癌（TNBC）细胞BT-549在正常及低氧环境下的增殖抑制情况,促自噬和促凋亡作用,以及其对细胞迁移能力的影响。方法利用脂质体将真核载体pDS-RED-C1-beclin-1转染进入BT-549细胞作为实验组,空白组细胞和转染pDS-RED-C1空质粒的细胞分别作为空白对照组和阴性对照组,用RT-PCR检测转染后beclin-1mRNA表达,Westernblot检测转染后蛋白表达。在正常及低氧环境下分别培养后用四甲基偶氮唑盐（MTT）法测细胞增殖率,吖啶橙染色后用荧光显微镜观察细胞自噬情况,流式细胞仪检测细胞凋亡百分比。通过细胞划痕试验研究转染beclin-1基因对细胞迁移能力的影响。RT-PCR和Westernblot结果及MTT所测增殖率结果用单因素方差分析,自噬和凋亡的差异采用卡方检验分析。结果beclin-1基因被成功转染进细胞;转染后目的基因组beclin-1mRNA和蛋白表达均高于对照组,72h最明显。MTT测定结果：正常与低氧环境下实验组48h和72h增殖率均低于对照组（48hP1=0.002,P2=0.000;72hP1=0.006,P2=0.001;P1和P2分别为正常与低氧环境下统计结果）,beclin-1与低氧刺激有明显交互作用（P=0.016）,即二者能增强彼此对细胞增殖率的抑制作用。吖啶橙染色镜下观察正常和低氧环境下实验组自噬发生率明显高于空白对照组（P1=0.004,P2=0.001）,阴性对照组与空白对照组间差异无统计学意义（P〉0.050）。流式细胞仪检测正常和低氧环境下实验组凋亡发生率均高于空白对照组（P1=0.045,P2=0.008）。体外划痕试验发现转染beclin-1后细胞迁移能力降低。结论在正常和低氧环境下,转染beclin-1基因可抑制TNBC细胞BT-549增殖,促进细胞发生自噬及凋亡,并且降低其迁移能力。

简介：摘要目的探讨自噬相关基因Beclin-1、LC3和p62在食管鳞状细胞癌（ESCC）中的表达及意义。方法回顾性分析2015年1月至2016年12月解放军陆军第八十一集团军医院接受手术治疗的112例原发性ESCC患者的临床资料。免疫组织化学法检测112例ESCC组织及31例癌旁正常食管黏膜组织中Beclin-1、p62和LC3蛋白的表达情况，分析3种自噬相关标志物在ESCC中的表达及其与患者临床病理特征的关系。结果112例ESCC组织中Beclin-1、LC3和p62阳性表达率分别为32.14%（36/112）、37.50%（42/112）和63.39%（71/112），31例癌旁正常食管黏膜阳性表达率分别为61.29%（19/31）、64.52%（20/31）和32.26%（10/31），差异均有统计学意义（χ2值分别为8.715、7.216、9.584，均P<0.01）。Beclin-1、LC3在ESCC中的阳性表达率均低于癌旁正常食管黏膜，p62在ESCC中的阳性表达率则高于癌旁正常食管黏膜。Beclin-1表达与ESCC患者组织学分级、肿瘤浸润深度、TNM分期、是否存在淋巴结转移均有关（均P<0.05）；LC3表达与ESCC患者肿瘤浸润深度、TNM分期均有关（均P<0.01）；p62表达与ESCC患者是否存在淋巴结转移有关（P<0.01）。在ESCC中，LC3与Beclin-1的表达呈正相关（r＝0.731，P＝0.001），而与p62的表达呈负相关（r＝-0.215，P＝0.023）。结论自噬在ESCC的发生、发展中发挥一定作用，联合检测自噬相关基因Beclin-1、p62和LC3可辅助临床诊断并指导后续综合治疗。