简介:摘要目的构建小鼠CXCR3的重组腺病毒载体。方法应用RT-PCR方法从小鼠脑组织中扩增分离CXCR3基因,经双酶切位点插入腺病毒载体pacAd5中,经氨苄青霉素抗性筛选、酶切及DNA测序方法验证目的基因。采用Lipofectamine?2000将重组腺病毒载体CXCR3/pacAd5转染HEK293AD细胞,包装、扩增后测定病毒滴度。结果RT-PCR方法获得1.1Kb目的基因CXCR3,经氨苄青霉素抗性筛选的重组克隆经酶切及DNA测序证实为目的基因。重组CXCR3/pacAd5转染HEK293AD细胞后获得包装及扩增,病毒滴度达1.8×108PFU/ml。结论本研究成功构建小鼠CXCR3的重组腺病毒载体CXCR3/pacAd5,可用于进一步研究CXCR3参与多种疾病转归的分子免疫机制。
简介:摘要目的探讨经开胸心肌内注射腺病毒载体转染大鼠心肌的可行性。方法将16只成年雄性SD大鼠行开胸心肌内注射腺病毒载体,术前和术后第5天进行超声心动图检查,评估心功能。术后第5天切取心肌标本制作冰冻切片,观察心肌组织转染情况;分离心肌细胞,测定细胞转染率。结果超声心动图检查示注射前和注射5天后心功能未见明显变化。心肌组织冰冻切片检查示可见弥散的绿色荧光,转染面积百分比达(5.13±0.90)%;分离心肌细胞转染率测定示可见散在的绿色荧光,转染率达(5.20±1.95)%。结论通过开胸心肌内注射腺病毒载体转染大鼠心肌安全、经济、可行,可作为心脏疾病转基因治疗研究的首选方法。