简介:摘要目的探讨交叉引物等温扩增技术在恶性疟疾快速检测中的应用效果,为交叉引物等温扩增技术在恶性疟疾快速检测中的应用提供理论依据。方法选取2014年5月-2016年7月在医院接受治疗的60例恶性疟疾患者作为此次研究对象,提取血液样品120份,每例2份,分为观察组和对照组,观察组采用交叉引物等温扩增技术进行检测,对照组采用胶体金技术检测,分析比较两组恶性疟疾原虫灵敏度和特异性检测情况,分析比较两组恶性疟疾原虫密度检测情况。结果观察组的灵敏度为71.7%,对照组为63.3%,观察组明显高于对照组,两组之间差异显著,具有统计学意义(P<0.05);两组的特异性检测都为100.00%,无差异,不具有统计学意义(P>0.05);恶性疟疾原虫密度区间为10-100、101-1000、1001-10000和10001-100000等,观察组检测情况明显高于对照组,两组之间差异显著,具有统计学意义(P<0.05)。结论交叉引物等温扩增技术在恶性疟疾快速检测中的应用效果显著,能很好的检测出恶性疟疾的灵敏度和特异性,筛选出感染恶性疟疾的患者,适应于恶性疟疾的快速检测。
简介:摘要目的评价快速重组酶介导的等温扩增技术(RAA)在采供血机构沙门菌生物学监测中的应用。方法加热快速裂解肠炎沙门菌标准菌株提取DNA,采用沙门菌RAA荧光型检测试剂在小型Genchek荧光检测仪内37 ℃条件下识别并扩增沙门菌的特异基因片段,20 min内实时读取荧光检测值,根据扩增曲线判定结果。评估RAA法的检测灵敏度,同时采用RAA法检测13个标准菌株和5个实验室分离的沙门菌株验证其特异性。采集51份样本,分别接种肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌标准菌株,以及无沙门菌污染的空白对照,营养琼脂平板培养48 h计数菌落数,同时采用国标GB 4789.4—2016的方法和RAA法进行沙门菌检测。结果RAA法在37 ℃ 20 min的条件下对肠炎沙门菌的最低检出限为1.9×102 CFU/mL,和非沙门菌无交叉反应。使用中消毒液和血液运输箱内壁沙门菌生物学的检测结果与国标法相同,Kappa值均为1。结论RAA技术可快速、灵敏、特异性地检测沙门菌,可应用于采供血机构沙门菌的生物学监测。
简介:摘要目的探讨噬菌体生物扩增法(Phab)快速检测痰标本中结核分支杆菌(MTB)的临床应用价值。方法应用Phab、改良罗氏培养法及厚涂片法共同检测419例痰标本。结果419例痰标本,噬菌体法检测132例阳性,阳性率31.50%(132/419);厚涂片法检测64例阳性,阳性率15.27%(64/419);改良罗氏培养法126例阳性,阳性率30.07%(126/419),P<0.01,三种方法的检出率有差异,且噬菌体法检测率最高。64例痰涂片阳性改良罗氏培养阳性标本噬菌体法检测60例阳性,阳性率93.75%;62例痰涂片阴性罗氏培养阳性标本噬菌体法检测46例阳性,阳性率74.19%;293例痰涂片阴性罗氏培养阴性标本中噬菌体法检测26例阳性,阳性率8.87%。结论Phab法检测测痰标本MTB具有较高的检出率,简便快速,不需要特殊仪器设备,费用低廉,可作为MTB检测快速筛选方法。
简介:目的:建立一种适合以红花cDNA为模板进行相关序列扩增多态性(SRAP)扩增的体系,筛选最佳的SRAP-PCR反应条件。方法:提取红花RNA并反转录成cDNA,以此为模板,使用正交设计表设计PCR反应中的3个重要因素Taq酶、三磷酸脱氧核苷(dNTPs)、引物的反应浓度。随后设计Mg^2+的反应浓度以及模板含量,分别进行单因素试验。结果:本研究建立的红花cDNA-SRAP扩增条件为:25μL反应体系中含模板cDNA20ng,1×PCR缓冲液2.5mmol/L,Mg^2+2.0mmol/L,TaqDNA聚合酶0.04U/μL,dNTPs0.2mmol/L,引物0.2μmol/L。优化后扩增结果稳定性好,条带清晰,多态性好。结论:该体系为红花功能基因的研究奠定了基础。
简介:测定我国小型猪来源的猪内源性反转录病毒(PERV)3"LTR,以便于PERV全基因的克隆和分析。用cDNA末端快速扩增(RACE)技术,从五指山猪外周血淋巴细胞mRNA中扩增到PERV-3"LTR,并克隆入pGEM-Teasy载体,将阳性克隆进行序列测定和同源性分析。测序结果显示该克隆3’端的尾部有一个由12个A组成的poly(A)信号;其R区与PERV-MSL的R区(约64bp)基本一致,同源性分析表明其与PERV-MSL的3"LTR具有81%的序列同源性。说明成功扩增了我国五指山猪来源的PERV-3’LTR,将有利于PERV全基因的克隆。