简介：对木头开发和形成的分子的生物研究是相关基因的发现的最近的年，而是步里的焦点，他们在木头性质的控制的函数是慢的。它在另外的工具上的高产量能力，敏感，和可靠性的优点为调查能够的基因表示patternsis开发了的microarraytechniquewith很快assaying几千基因。在这研究，从开发白杨木部纸巾的二个cDNA图书馆准备的cDNAmicroarray从Populusdeltoides的主要的茎在不同高度在不成熟的木部纸巾习惯于试金基因表示模式(15?岁)，它被证实有不同木头性质(microfibrillar角度，木质的密度)旁边X光检查。有在薄片之间的微分表示侧面的274个抄本外面被屏蔽，并且单个克隆受到5定序。用生物信息的分析，我们识别了可以影响白杨木头性质的候选人基因，许多哪个属于各种各样规章并且信号transduction基因家庭例如锌手指蛋白质抄写因素，DNA有约束力的抄写因素，乙烯反应因素等等。结果建议这些基因可以调整涉及木头形成的酶。进一步的工作将被执行克隆这些基因并且决定他们怎么影响白杨木头性质。

简介：Phytohormoneabscisicacid(ABA)wascriticalformanyplantgrowthanddevelopmentalprocessesincludingseedmaturation,germinationandresponsetoenvironmentalfactors.WiththepurposetodetectthepossibleABArelatedsignaltransductionpathways,wetriedtoisolateABA-regulatedgenesthroughcDNAmacroarraytechnologyusingABA-treatedriceseedlingasmaterials(undertreatmentfor2,4,8and12h).Of6144cDNAclonestested,37differentialclonesshowinginductionorsuppressionforatleastonetime,wereisolated.Ofthem30and7wereup-ordown-regulatedrespectively.Sequenceanalysesrevealedthattheputativeencodedproteinswereinvolvedindifferentpossibleprocesses,includingtranscription,metabolismandresistance,photosynthesis,signaltransduction,andseedmaturation.6cDNAcloneswerefoundtoencodeproteinswithunknownfunctions.RegulationbyABAof7selectedclonesrelatingtosignaltransductionormetabolismwasconfirmedbyreversetranscriptionPCR.Inaddition,somecloneswerefurthershowntoberegulatedbyotherplantgrowthregulatorsincludingauxinandbrassinosteroid,which,however,indicatedthecomplicatedinteractionsofplanthormones.PossiblesignaltransductionpathwaysinvolvedinABAwerediscussed.

简介：FemaleinflorescenceofBetulaplatyphyllawassampledatanintervalofeachtwodaystoanalyzethebackgroundofgeneexpressioninfloralphase.OnthebasisofSMARTstrategy,thedrivercDNAwasobtainedfromtotalRNAofthelastsampleandthetestercDNAwasfromthatoftheothersbyRT-PCRwhichweresubsequentlyusedtoconstructasubtractedcDNAlibrary.TheresultoftheESTs(expressionsequencetags)blastXshowedthatthegenesinthesubtractedcDNAlibrarycouldbemainlyclusteredinto5groupsrelatedtometabolism,transportationandsignaltransduction,cellcycle,stressresponse,andregulation.Therelationshipbetweengeneexpressionanddevelopmentwasalsodiscussed.

简介：Objective:Toclonemultidrugresistance(MDR)relatedgenesinlungadenocarcinomacelllines.Methods:ThedifferentiallyexpressedcDNAfragmentsbetweenA549andA549DDPcellswereanalyzedbymRNAdifferentialdisplayPCR(DDRT-PCR).ThefragmentsthusobtainedwerefurtheranalyzedbyDNAsequencingandNorthernblotting.Results:ThreedifferentiallyexpressedcDNAfragmentswereobtainedandconfirmedbyNorthernblot.Sequenceanalysisrevealedthattwoofthemwerenovelandonewas100%identicalwithICEgene.Conclusion:AnalyzingdifferentiallyexpressedfragmentbetweenA549andA549DDPcellsmaybehelpfulforfindingnewMDRrelatedgenes.ThedrugresistanceofA549DDPcellsmayberelatedtotheinhibitionordown-regulationofICEgene.

简介：目的：克隆COPS3基因cDNA,构建其原核融合蛋白表达载体并表达和鉴定。方法：从培养的人骨肉瘤细胞系SOSP-9607细胞中提取总RNA,经RT-PCR获得COPS3基因。将该基因克隆到pGEM-T-Easy载体中,酶切及测序鉴定。将COPS3基因插入pET28a融合蛋白表达载体中,IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE分析。免疫印迹法鉴定COPS3蛋白的表达。结果：cDNA测序证明,获得了COPS3基因cDNA,其序列与Genebank中报道序列完全一致。酶切分析表明,成功构建了含COPS3基因的pET28a融合蛋白表达载体。SDS-PAGE以及免疫印迹法鉴定分析表明,COPS3蛋白获得高效表达,分子质量为51Ku,表达量约占菌体总蛋白的30%。结论：成功克隆和表达了COPS3cDNA。

简介：TherootofPanaxginsengplantundergoesaspecificdevelopmentalprocesstobecomeabiosynthesisandaccumulationtissueforginsenosides.Toidentifyandanalyzegenesinvolvedinthebiosynthesisofginsenoside,weconstructedandcharacterizedafull-lengthcDNAlibraryfor6-year-oldNorthAmericanginseng.ThetiterofprimarycDNAlibraryis1.2×106pfu/mL,thetiterofamplifiedlibraryis2.6×1010pfu/mLandtherateofrecombinantisabove86%.Theinsertsizerangesfrom0.3to2.0kb.Sequencingresultsshowthat18of58genesarehighhomologoustothegenes(GBR5,GBR3andGBR1)knowninGenBank,whichareinvolvedinbiosynthesisofginsenosideinNorthAmericanginsengplant;16of58genesarenovelgenes.Thefull-lengthcDNAlibraryofNorthAmericanginsengroottissuesisessentialforthecloningofgenesknownanditisalsoaninitialkeyforthescreeningandcloningofnewgenes.

简介：Objective:Toanalyzethechangesofgeneexpressioninphenylbutyrateinduceddifferentiationofgliomacells.Methods:Theexpressionlevelsof14000genesingliomacellsbeforeandafterinducementwithsodiumphenyl-butyratefor2hor6dayswereevaluatedbycDNAarraytechniqueandprovedbymulti-dotblotting.Results:expressionof98genesingliomacellsshowedchangesaftertheinducement.Somegenesinvolvedintranscriptionandtranslationandsomeoncogenesaredown-regulated,whilesomegeneinvolvedindifferentiationorapoptosisareup-regulated.18unknownexpressionsequencingtag(EST)changedtoo.Conclusion:Ageneexpressionprofileassociatedwithdifferentiationofgliomacellswasestablished.

简介：Throughexploitingthehighhomologyofcerealcropgenes,membranouscDNAmicroarrayscontaining3311uniquericetranscripts(including1639cndosperm-derivedtranscriptsand1672maturestem-derivedtranscripts)wereusedformonitoringtheexpressionprofilesofl-leafstageseedlingsof4cerealcropspecies:rice,maize,sorghumandbarley.Afterhybridizingwith[P]labeledprobes,73.6%ofthearrayedgenesgeneratedreliablesignalsinallofthefourcerealcrops.Furtheranalysisrevealedthatamongthearrayedgenes,ahigherpercentageoftheendosperm-derivedtranscripts(86.6%)expressedthanthatofthematurestem-derivedgenes(60.9%),indicatingthatmostoftheendospermexpressedgenesfunctionedinyoungseedlingswhilcconsiderableamountofmaturestemtissueexpressedgenesdidnotexpress.Theseresultsalsoinferredthatsomegenesmightfunctiononlyatcertaindevelopmentalstages.Bycomparingtheobtainedprofdes,84geneswereidentifiedconstantlyexpressedinallthefourcerealcrops.Manyhousekeepinggenes,suchaspolyubiquitin,ubiquitinconjugatingenzymeandribosomalproteinswereincludedinthiscatalogue.Theexperimentalsoidentified14riceseedlingspecificallyexpressedgenes,including3bioticandabioticstressinducedgenesand1apoptosissuppressorencodinggeneBaxinhibitor-1.Thisinvestigationprovidedinvaluableinformationforcomparativegenomicsofgramineaemembers.

简介：Twostarch-branchingenzyme(SBE)inrice,isknowntobeakeyenzymeinamylopectinbiosynthesis.ThecDNAoftwoSBE(starch-branchingenzyme)genesSheIandShedencodingSBEⅠandSBEⅢ(twomajorisoformsinrice)wereclonedbyanimprovedRT-PCRtechnique,fromatemplatecDNAlibray,derivedfromthetotalmRNAsextractedfromtheimmatureseedsofajaponicariceWuyunjing7.DNAsequenceanalysisshowedthatthesizeoftheclonedSheIandShedcDNAswere2490and2481bplong,respectively,includingtheirentirecodingsequences.ComparisonanalysisindicatedthatthenucleotidesequenceofShe3wasthesameasthatofshed(GenbankAccessionNo.D16201)asreportedpreviously.Therewereonlyfourbase-pairsdifference,whichresultedinchangesoftwodeducedaminoacidsbetweentheclonedShe1cDNAandthereportedshe1(GenbankAccessionNo.D11082).TheclonedSheIandShedcDNAsmakeitpossibletoimprovericestarchqualitythroughgeneticengineering.

简介：

简介：目的：构建莱芜猪肝脏组织全长cDNA文库,以便研究与莱芜猪优良性状相关的基因。方法：采用改良的异硫氰酸酸胍一步法制备总RNA;利用SMART技术,以PrimeScript反转录酶逆转录合成第一链cDNA,通过LD-PCR扩增获得cDNA双链;经蛋白酶K消化和CHROMASPIN-400柱分级分离后,收集500bp以上的cDNA片段,并与pMD18-T载体连接,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,建成原始文库;随机挑取单菌落,用HindⅢ和EcoRⅠ进行双酶切鉴定重组子插入片段大小。结果：经鉴定,原始文库的滴度为2.8×105cfu/mL,重组率约为98%,插入片段大小为0.5～2kb,平均插入片段长度大于1kb。结论：建立的cDNA文库质量良好,可以用于目的基因的筛选。

简介：Themultiplexpolymerasechainreaction(PCR)techniquewasappliedtodetecttheSARS-CoV(severeacuterespiratorysyndrome-associatedcoronavirus)specifictargetcDNAfragmentsinthepresentstudy.ThetargetcDNAfragmentsofSARS-CoVweresynthesizedartificiallyaccordingtothegenomesequenceofSARS-CoVinGenBanksubmittedbyTheChineseUniversityofHongKong,andwereusedassimulatedpositivesamples.FiveprimersrecommendedbyWorldHealthOrganization(WHO)wereusedtoamplifythefragmentsbysinglePCRandmultiplexPCR.ThreetargetcDNAfragments(121,182and302bp),aswellasthethreedifferentcombinationsofanytwoofthesefragments,wereamplifiedbysinglePCR.ThecombinationofthesethreefragmentswasamplifiedbymultiplexPCR.TheresultsindicatedthatthemultiplexPCRtechniquecouldbeappliedtodetecttheSARS-CoVspecifictargetcDNAfragmentssuccessfully.

简介：目的：构建应用于酵母双杂交系统的羽衣甘蓝柱头cDNA文库。方法：以羽衣甘蓝S13-bS13-b自交不亲和系为材料，提取柱头的总RNA，用亲和层析法分离纯化mRNA，利用CytoTrapXR建库试剂盒构建羽衣甘蓝柱头cDNA文库。结果：羽衣甘蓝柱头cDNA原始文库的库容量为2．5×10^5；扩增后文库的库容量约为4×10^8，重组率为96％，插入片段大小为0．4～3kb，平均长度在0．8kb左右。结论：构建了应用于酵母双杂交系统的羽衣甘蓝自交不亲和系柱头的cDNA文库，为探讨芸苔属植物自交不亲和的分子机理奠定了基础。

简介：为研究黄金茶出芽早的分子机制，本研究采用SMART-RACE技术，获得了与解除休眠相关的转录因子CsDAM2基因的全长eDNA序列，并进一步对该氨基酸序列进行了生物信息学分析。研究发现CsDAM2基因全长为1386bp，序列分析表明，该序列含有一个完整的编码区，大小为657bp，编码区GC含量为50．45％。此编码区可以编码分子量为24．86kD的亲水性蛋白，该蛋白由218个氨基酸组成，理论等电点（pI）为8．96。黄金茶CsDAM2蛋白有11个磷酸化位点，属跨膜蛋白，与毛白杨DAM3的相似性为71％，与已登录茶树MADS．box蛋白的一致性为35％。本研究为进一步揭示黄金茶春芽萌发早的分子机制提供了理论依据。

简介：胰岛素样生长因子2（insuline-likegrowthfactors2,IGF2）在脊椎动物的生长和发育中具有十分重要的作用.本研究利用分子克隆技术,从泰国斗鱼（Bettasplendens）雄鱼的肝脏组织中克隆鉴定出泰国斗鱼IGF2cDNA开放阅读框序列全长989bp,其中开放阅读框为629bp,共编码209个氨基酸残基.通过多重序列比对分析,泰国斗鱼IGF2的氨基酸序列与其他鱼类的IGF2具有较高的同源性,显示出序列的保守性.此外,利用RT-PCR检测IGF2在泰国斗鱼雌雄个体不同组织中的表达,结果表明IGF2在泰国斗鱼各组织中的表达具有显著的组织表达差异性,同样也存在着性别表达差异性.本研究结果为深入研究泰国斗鱼的igf2基因在生长发育中的调控机理提供研究基础.

简介：为研究人血小板因子4(hPF4)的生物学性能和用于肿瘤生物治疗的可能性,运用反转录聚合酶链反应(RTPCR)从人红白血病细胞系HEL细胞总RNA中扩增出hPF4基因cDNA序列,将其克隆至pUC18载体中.序列分析证实克隆片段与文献报道的hPF4基因cDNA序列完全一致,说明已成功克隆到hPF4基因cDNA.

简介：为研究优质烟叶的分子基础,以翠碧一号不同生长时期的叶片为材料,CTAB法提取总RNA,利用SMART技术合成全长cDNA,之后按经修改的Clontech技术成功构建了烟草叶片全长cDNA文库。经鉴定,初级文库库容为3.85×10^6个克隆,重组率为100%,重组子插入片段集中在750-2000bp之间。随机挑取25个克隆测序后,经生物信息学分析表明,烟草上已经报道的基因占10条,11条为全长基因序列;20条序列有功能注释。综合分析表明,所构建的文库质量较高,达到了基因的分离、筛选和克隆的建库目的。

简介：硬酯酰辅酶A脱氢酶（Stearoyl-CoADesaturase,SCD）是参与脂肪酸脱氢反应的限速酶和关键酶,此酶编码基因SCD对增加膜磷脂的不饱和脂肪酸成分,提高细胞膜在低温下的流动性发挥重要作用,可能是抗寒过程中的关键基因成员。本研究采用cDNA末端快速扩增技术（RapidAmplificationsofcDNAEnds,RACE）克隆了鲤（Cyprinuscarpio）脑组织CcSCD基因的全长cDNA序列,采用实时荧光定量PCR技术检测该基因在低温（6℃）和常温（23℃）条件下的转录表达差异,对其蛋白编码序列的结构和功能进行了预测分析。结果显示,CcSCD基因cDNA全长2618bp,包含一个由324个氨基酸残基组成的长度为975bp的阅读框（ORF）;蛋白分子进化树显示鲤的SCD和草鱼（Ctenopharyngodonidella）的SCD蛋白同源性最高,相似性达88%;实时荧光定量结果表明,低温刺激下（6℃）,CcSCD基因表达水平是常温条件下（23℃）的13.9倍,差异非常显著（P〈0.01）。本研究旨在为今后构建表达载体,通过遗传操作等研究手段鉴定其抗寒功能奠定基础。

简介：利用反转录聚合酶链式反应的方法,以单引物R2为引物,从水稻伴生菌中克隆到了一cDNA片段,长1029bp,其中开放阅读框部分共编码220个aa.NCBI核苷酸序列同源性比对结果表明:开放阅读框部分与大肠杆菌、志贺菌和沙门氏菌有较高的同源性,但在3'非翻译区几乎没有同源性;多肽序列的同源性比对结果显示,R2在N-端比目前已知的四氢叶酸脱氢酶/环化酶多肽序列少50个aa,C-端少18个aa.通过http:∥www.fruitfly.org网站下的启动子预测软件未发现转录起始位点,在3'端也无AATAAA加尾信号,因此我们克隆的cDNA不是完整的基因序列.通过功能结构域预测和三维结构分析表明:R2存在多个功能结构域,即FolD、KOG4230、THF_DHG_CYH_C、KOG0089和THF_DHG_CYH,其中KOG0089和THFDHG_CYH_C为R2蛋白所包含的完整的功能结构域,晶体模型显示其分子表面凹凸不平,分子内存在间隙,总能为-5243.076kJ/mol,存在两个GROMOS程序修复点即Gly53和Gly187,有7个类似于Ala83和Leu86的锚定连接形成两个环状结构.

简介：目的：建立一种适合以红花cDNA为模板进行相关序列扩增多态性（SRAP）扩增的体系,筛选最佳的SRAP-PCR反应条件。方法：提取红花RNA并反转录成cDNA,以此为模板,使用正交设计表设计PCR反应中的3个重要因素Taq酶、三磷酸脱氧核苷（dNTPs）、引物的反应浓度。随后设计Mg^2＋的反应浓度以及模板含量,分别进行单因素试验。结果：本研究建立的红花cDNA-SRAP扩增条件为：25μL反应体系中含模板cDNA20ng,1×PCR缓冲液2.5mmol/L,Mg^2＋2.0mmol/L,TaqDNA聚合酶0.04U/μL,dNTPs0.2mmol/L,引物0.2μmol/L。优化后扩增结果稳定性好,条带清晰,多态性好。结论：该体系为红花功能基因的研究奠定了基础。