简介:目的构建表达靶向抑制survivin基因的三个短发夹结构(shRNA)的RNA干扰载体,使其在胶质瘤细胞发挥干扰效应。方法在survivin全长序列中选取设计3条19个核苷酸靶序列,2条反向重复序列,间以9个核苷酸的茎环序列,加上对应酶切位点,形成3条shRNA的DNA模板,分别克隆到3个干扰载体pG1,pG2和pG3上;采用分布酶切连接的方法,分别将U6启动子以及下游的后2个shRNA模板酶切下来,依次连接到pG1对应酶切位点,构建出含有3条shRNA模板且能独立编码shRNA的重组干扰载体pGenesil-survivin,测序鉴定;将干扰质粒导入到胶质瘤细胞U251,分别采用RT-PCR以及WesternBloting从mRNA和蛋白水平检测干扰后效果。结果重组的干扰载体含有3条正确的shRNA模板:RT-PCR以及WesternBlotting检测显示,survivin的mRNA转录水平以及蛋白水平的表达均得到显著抑制。结论编码3条shRNA的干扰载体pGenesil-survivin介导的RNA干扰技术(RNAi)可以显著的靶向抑制survivin基因在人胶质瘤细胞U25l中的表达。
简介:国王有七个女儿,这七位美丽的公主是国王的骄傲。她们那一头乌黑亮丽的长发远近皆知,所以国王送给她们每人一百个漂亮的发夹。有一天早上,大公主醒来,一如往常地用发夹整
简介:<正>阳光灿烂,心情愉快的日子里,一切都是美好的。时尚的发型,精美的发饰,最新最具个性的发型变化,打破了传统发式的格局,装点亮丽人生。无论您是长发还是
简介:Heterogeneousnuclearribonucleoproteins(hnRNPs)arespliceosomalmacromolecularassemblagesandthusactivelyparticipateinpre-mRNAmetabolism.Theyarecomposedofevolutionarilyconservedandtandemlyrepeatedmotifs,wherebothRNA-bindingandprotein-proteinrecognitionoccurtoachievecellularactivities.Byyetunknownmechanisms,theseribonucleoprotein(RNP)particlesaretargetedbyautoantibodiesandhenceplaysignificantroleinavarietyofhumansystemicautoimmunediseases.Thisfeaturemakesthemimportantprognosticmarkersintermsofmolecularepidemiologyandpathogenesisofautoimmunity.SinceRNPdomainisoneofthemostconservedandwidespreadscaffolds,evolutionalysesoftheseRNA-bindingdomainscanprovidefurthercluesondisease-specificepitopeformation.ThestudypresentedhereinrepresentsasequencecomparisonofRNA-recognitionregionsofrecentlyclonedandcharacterizedhumanhnRNPA3withthoseofotherrelevanthnRNPA/B-typeproteins.Theirimplicationsinhumanautoimmunityareparticularlyemphasized.
简介:作为一个模式植物,烟草在植物分子生物学研究中发挥着重要的作用。总RNA的提取质量,对于基因表达、基因克隆、cDNA文库建立、RNA原位杂交以及转基因材料鉴定等分子生物学基础研究至关重要。尤其在进行基因克隆及cDNA文库时,只有高质量的RNA,才能保证cDNA第一链合成的完整性。由于烟草中糖类、蛋白质及次生代谢物的含量较高,因此,在应用TRIzolRNA提取试剂盒进行烟草总RNA提取时,所提取的RNA产物中的蛋白质及多糖等杂质含量偏高。因此,针对这一问题,我们对TRIzol法进行了改进,并获得了高质量的烟草总RNA。经琼脂糖电泳检测,利用该方法提取的烟草总RNA,条带清晰、无拖尾现象,28S与18S的比例约为2:1。紫外吸收值的测定表明,所提取的烟草总RNA的A260/A280的值基本达到了1.9以上,说明所提取的RNA的质量较高,可广泛应用于基因的克隆及基因的表达研究。
简介:Anincreasingnumberofstructuralhomologysearchtools,mostlybasedonprofilestochasticcontext-freegrammars(SCFGs)havebeenrecentlydevelopedforthenon-codingRNAgeneidentification.SCFGscanincludestatisticalbiasesthatoftenoccurinRNAsequences,necessarytoprofilespecificRNAstructuresforstructuralhomologysearch.Inthispaper,asuccinctstochasticgrammarmodelisintroducedforRNAthathascompetitivesearcheffectiveness.Moreimportantly,theprofilingmodelcanbeeasilyextendedtoincludepseudoknots,structuresthatarebeyondthecapabilityofprofileSCFGs.Inaddition,themodelallowsheuristicstobeexploited,resultinginasignificantspeed-upfortheCYKalgorithm-basedsearch.