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  • 简介:目的构建GATA-3特异性短发RNA(shRNA)逆转录病毒表达载体。方法设计、合成两对GATA-3编码基因的反向重复序列,中间插入9个碱基的短发,经退火形成互补双链,再克隆至逆转录病毒载体RNAi-RelypSIREN-RetroQ。结果构建的重组逆转录病毒载体可以被限制性内切酶BamHI,EcoRI切开,电泳可显示相应条带,经测序其序列与设计的一致。结论成功构建GATA-3特异性shRNA逆转录病毒载体RetmQ/GATA-3/shRNA,为进一步进行肿瘤细胞GATA-3基因沉默的研究奠定了基础。

  • 标签: 转录因子 肿瘤细胞 培养的 RNA干扰 遗传载体
  • 简介:目的构建表达靶向抑制survivin基因的三个短发结构(shRNA)的RNA干扰载体,使其在胶质瘤细胞发挥干扰效应。方法在survivin全长序列中选取设计3条19个核苷酸靶序列,2条反向重复序列,间以9个核苷酸的茎环序列,加上对应酶切位点,形成3条shRNA的DNA模板,分别克隆到3个干扰载体pG1,pG2和pG3上;采用分布酶切连接的方法,分别将U6启动子以及下游的后2个shRNA模板酶切下来,依次连接到pG1对应酶切位点,构建出含有3条shRNA模板且能独立编码shRNA的重组干扰载体pGenesil-survivin,测序鉴定;将干扰质粒导入到胶质瘤细胞U251,分别采用RT-PCR以及WesternBloting从mRNA和蛋白水平检测干扰后效果。结果重组的干扰载体含有3条正确的shRNA模板:RT-PCR以及WesternBlotting检测显示,survivin的mRNA转录水平以及蛋白水平的表达均得到显著抑制。结论编码3条shRNA的干扰载体pGenesil-survivin介导的RNA干扰技术(RNAi)可以显著的靶向抑制survivin基因在人胶质瘤细胞U25l中的表达。

  • 标签: 短发夹RNA SURVIVIN基因 神经胶质瘤
  • 简介:目的应用短发RNA(shorthairpinRNA,shRNA)抑制乳腺癌MDA—MB-231细胞胰岛素样生长因子1型受体(typeIinsulin—likegrowthfactorreceptor,IGF-1R)的表达,探讨IGF~1R对乳腺癌体外增殖和迁移的作用。方法构建携带有绿色荧光蛋白报告基因的IGF-1RshRNA质粒载体,脂质体介导转染MDAMB-231细胞,通过倒置荧光显微镜检测转染效率,CCK-8法检测细胞增殖能力,体外迁移实验检测细胞迁移能力。细胞增殖实验结果的组间比较采用重复测量方差分析和多元方差分析,RT—PCR定量结果和迁移实验结果的组间比较采用单因素方差分析。结果成功构建IGF-1RshRNA质粒载体,转染效率为55%~60%。IGF-1RshRNA转染MDA—MB-231细胞后,MDA—MB-231细胞IGF-1RmRNA与蛋白表达水平显著下降;细胞体外增殖和迁移能力受到显著抑制(P均〈O.05)。结论IGF-1RshRNA表达质粒可以有效抑制MDA—MB-231细胞IGF-1R的表达,显著抑制乳腺癌细胞的体外增殖和迁移能力。

  • 标签: 胰岛素样生长因子1型受体 乳腺肿瘤 短发夹RNA RNA干扰
  • 简介:目的建立小鼠支气管哮喘模型,采用T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3(Tim-3)特异短发RNA(shRNA)沉默外周血单个核细胞(PBMCs)中Tim-3的表达,探讨Tim-3对辅助性T细胞1(Th1)和Th17细胞分化的影响。方法用卵白蛋白(OVA)致敏并激发建立哮喘小鼠模型,分离哮喘小鼠PBMCs,用Tim-3特异的shRNA片段沉默哮喘小鼠PBMCs中高表达的Tim-3基因。Real—timePCR和Westernblot检测Tim-3的表达,流式细胞分析技术(FACS)检测Thl和Thl7的比例;ELISA检测细胞培养上清液中干扰素-γ(IFN-γ),白介素4(IL-4),和白介素.17(IL-17)的水平。结果哮喘组小鼠PBMCs中Tim-3mRNA表达明显升高;使用特异Tim-3shRNA沉默哮喘小鼠PBMCs后,沉默组PBMCs中Th1细胞比例显著升高,Th17细胞比例显著下降,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P〈0.01);沉默组PBMCs培养上清液中IFN-1明显升高,IL-17明显降低,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P〈0.05),IL-4水平无明显变化。结论特异Tim-3shRNA有效地沉默了Tim-3的表达,Tim-3表达的改变影响了T细胞的分化。

  • 标签: 哮喘 TIM-3 RNA沉默 T细胞 小鼠
  • 简介:母亲有着一头浓密乌黑的长发,尽管岁月的风霜早已在她的脸上印刻下了皱纹,但是,母亲的长发却依然呈现出一种纯朴的美丽来。每日清晨,母亲喜欢立在晨曦中,用木梳轻轻地梳理她的长发,随后,再熟练地编成一个麻花形的

  • 标签: 母亲 紫色 饰品 西安
  • 简介:所有的事情都是有关联的,疯子叔叔的钱包掉下来,我就变成了残疾人。“不是吧!”八号床的米奇诧异地说,“谁的钱包能有那么重呀?”我白了他一眼:“笨蛋!”然后继续讲我的故事。

  • 标签: 小鱼 残疾人 钱包
  • 简介:道路用语“发夹弯”(Hairpinturn)指道路如同发夹,十分弯曲,呈现U形,通常出现于山区。比赛赛车时,常见数个发夹弯的设计,考验选手过弯的驾车能力,若速度没有控制好,很容易偏离车道而出事。

  • 标签: 道路 赛车 驾车
  • 简介:王老师为了辨别她的三个女学生谁更聪明些,采用了以下的方法:事先准备好5个发夹,其中3个是黑的,2个是白的。她先把这些发夹让三个学生都看了看,然后让她们闭上眼睛,她在每个人的头上都戴了一个发夹。实际上王老师给每个人戴的都是黑色发夹,而将白色发夹藏了起来。最后再让她们睁开眼睛,判断自己头上戴的发夹是什么颜色。

  • 标签: 女学生 老师 眼睛 个人
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  • 简介:国王有七个女儿,这七位美丽的公主是国王的骄傲。她们那一头乌黑亮丽的长发远近皆知,所以国王送给她们每人一百个漂亮的发夹。有一天早上,大公主醒来,一如往常地用发夹

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  • 简介:浅安是在两校的联谊活动上认识眠眠的。联谊会上,同学们都很活跃地展示自己,跳舞,唱歌,或者是跟身旁的人留联系方式,聊天,甚至还有两位学霸型人才当场开始讨论一道数学题的N种解答方式。

  • 标签: 联谊活动 联系方式 联谊会 数学题
  • 简介:我的写作感想我是个天生爱做梦、爱幻(huan)想的人。因为妈妈没空每天帮我扎小辫(bian),所以从小到大我一直留着短发,特羡(xian)慕(mu)那些有一头长发飘飘的女孩,能别着闪亮的发夹,于是就有了《神奇的蝴蝶发夹》这个故事。假日里,看了一部动画片,听了一声音乐会,于是又有了《音乐会》这篇小作。老师说过,随时记录自己的感想,善于搜集生活中的点点滴滴。写作文就有话可讲了。真的,同学们不妨也试试,这一招可灵了!

  • 标签: 蝴蝶 数学 动画片 口算 作文 生活中
  • 简介:<正>阳光灿烂,心情愉快的日子里,一切都是美好的。时尚的发型,精美的发饰,最新最具个性的发型变化,打破了传统发式的格局,装点亮丽人生。无论您是长发还是

  • 标签: 发饰
  • 简介:以前,我有一头乌黑光滑的长发,每次我扎好辫子,戴上头花,大家都夸我像个小公主。可是后来妈妈硬是给我剪了短发,同学们都说我像老太婆一样难看,

  • 标签: 光滑 同学 小学 成圆 心情 快乐
  • 简介:本人女生是也,皮肤黑黑的,声音也偏粗犷,看起来有点像男生,但我还是想说,人家还是有一颗女生的心啊!就拿这个假期来说吧,和爸妈出去吃饭,本来一桌人吃得其乐融融,跟我没啥关系,正当我埋头大吃的时候,只听见一个第一次见面的叔叔说:“来,这个小伙子,多吃点肉,你太瘦了。”

  • 标签: 中学生 语文学习 阅读知识 课外阅读
  • 简介:早晨,我正坐在教室里看书,后桌的姚欣岚来了。她走过我身边时,神秘地对我说:'我剪短发了。'啊,剪了短发的她会是什么样的呢?我心里充满了好奇,站起来猛地摘下她的帽子,让她露出'庐山真面目'。我这一摘不要紧,她'啊——'的一声尖叫,羞得连忙将头埋到书桌上,再也不敢看人。她这一声尖叫,将所有同学的目光吸引过来。同学们对她指指点点,笑得前仰后合。

  • 标签: 剪短发