简介：

简介：摘要目的探究在安全、可接受的不同波长激光信号作用下小鼠螺旋神经节细胞信号转导功能的反应。方法离体培养小鼠螺旋神经节细胞，给予特异性荧光指示剂染色标记、光学显微镜下形态观察、钙离子Fura-2荧光激发、在成像视野中选取形态结构完整的测试细胞以及固定光纤等处理，采用可见光（波长450 nm）和近红外光（波长808 nm、1 065 nm）三种波长的激光信号对螺旋神经节细胞分别辐照，用钙离子成像仪对细胞内钙离子浓度进行监测。结果小鼠螺旋神经节细胞在波长450 nm激光辐照下细胞内钙离子浓度明显上升，而在其他两种波段的激光照射下，螺旋神经节细胞未呈现钙离子浓度的明显变化。螺旋神经节细胞这种反应的强弱与光纤所处位置有关，越靠近光纤口的细胞产生的钙离子浓度变化越明显，而远离光纤口的细胞，尽管发生钙离子浓度变化的次数基本一致，但每一次变化的幅度较弱。结论小鼠螺旋神经节细胞在光信号作用下具有诱发信号转导反应的可能，而且该反应具有激光波长选择性。

简介：摘要细胞死亡是生命活动中一个非常重要的事件，真核生物可因物理损伤刺激导致细胞死亡，因特异信号通路介导的程序性细胞死亡近年来得到越来越多的关注。目前程序性细胞死亡主要存在以下3种方式：凋亡(apoptosis)、程序性坏死(necroptosis)、细胞焦亡(pyroptosis)。程序性坏死和细胞焦亡是近年来才发现的新的细胞程序性死亡方式，在细菌或病毒感染宿主细胞过程中起着关键作用。这两种细胞死亡都是细胞裂解型死亡，但其信号通路存在明显差异。本文就这两种程序性细胞死亡的形态学特征、信号转导通路及其在病原体感染过程中的作用等方面的研究进展作一综述。

简介：摘要目的探讨宫颈鳞状细胞癌组织中细胞外信号调节激酶（ERK）1/2、p-ERK 1/2的表达在新辅助化疗疗效预测中的价值。方法选取2016年5月至2018年5月四川省巴中市中心医院就诊的57例患宫颈鳞状细胞癌并行新辅助化疗患者，统计分析治疗期间不良反应发生情况；比较宫颈鳞状细胞癌组织治疗前后ERK 1/2、p-ERK 1/2表达变化情况，分析ERK 1/2、p-ERK 1/2表达水平与新辅助化疗有效率的关联。结果治疗后有效率为68.42%（39/57），不良反应发生率为24.56%（14/57）；治疗前ERK1/2阳性率为87.72%（50/57），治疗后ERK 1/2阳性率为31.58%（18/57），差异有统计学意义（P<0.01）；治疗前p-ERK 1/2阳性率为75.44%（43/57），治疗后p-ERK 1/2阳性率为19.30%（11/57），差异有统计学意义（P<0.01）；治疗前ERK 1/2阳性组治疗后有效率为53.12%（17/32），治疗前ERK 1/2阴性组治疗后有效率为88.00%（22/25），两者比较差异有统计学意义（P<0.05）。治疗前p-ERK 1/2阳性组治疗后有效率为60.47%（26/43），治疗前p-ERK 1/2阴性组治疗后有效率为13/14，两者比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论宫颈鳞状细胞癌组织中ERK 1/2、p-ERK 1/2能预测新辅助化疗疗效。

简介：摘要目的探讨海藻糖A对骨肉瘤细胞增殖转移能力抑制作用及其机制。方法将骨肉瘤细胞(上海传秋生物科技有限公司提供)分别分为4组。空白组细胞不使用药物干预，低、中、高剂量组细胞分别采用含0.25、0.50、1.00 μmol/L海藻糖A的培养基培养干预不同时间，检测细胞增殖、转移以及相关蛋白表达。然后分别在4组细胞中5.00 μmol/L转化生子因子-β(TGF-β)培养24 h再次检测细胞存活率、转移以及相关蛋白表达。采用方差检验及t检验。结果空白组细胞增殖抑制率(0%)、转移抑制率(0%)显著低于药物干预组[(62.45±23.54)%、(84.15±20.10)%，t＝14.111、7.959，P<0.05]，差异有统计学意义，N-钙黏蛋白(N-cadherin)、编码锌指蛋白转录因子(Snail)、锌指转录因子(Slug)、波形蛋白(Vimentin)(100%、100%、100%、100%)表达量显著高于治疗组[低剂量组：(72.56±12.25)%、(65.34±10.56)%、(70.41±16.96)%、(71.45±18.96)%；中剂量组：(62.36±10.58)%、(53.47±9.85)%、(51.89±18.47)%、(42.47±9.56)%；高剂量组：(21.17±8.56)%、(19.19±5.56)%、(17.49±6.25)%、(10.77±3.25)%，t＝8.246、9.163、8.035、7.441，P<0.05]，差异均有统计学意义；各干预组细胞随着药物浓度升高存活率(15.25%、28.22%、39.45%)、转移抑制率显著升高(10.36%、18.45%、45.25%，t＝8.644、8.603，P<0.05)，差异有统计学意义，N-cadherin、Snail、Slug、Vimentin表达量显著下降。各组细胞在接受TGF-β干预后增殖抑制率和转移抑制率均显著下降，上述蛋白表达量显著升高。结论海藻糖A可以有效抑制骨肉瘤细胞增殖转移，其作用与抑制TGF-β/Smad2/3信号通路相关。

简介：摘要角膜盲约占我国不可逆盲疾病患者总数的40%，Stevens－Johnson综合征及瘢痕类天疱疮等疾病是导致角膜盲的主要原因之一。自体及异体角膜移植术已在临床应用获得一定成功，但仍存在诸多问题。目前治疗上述角膜疾病的重要方式是通过直接或体外培养的方式移植自体或异体的角膜缘上皮干细胞。相关信号通路，如Wnt信号通路、Notch信号通路及STAT信号通路等对角膜缘上皮干细胞的体外培养具有重要影响，可与多种因子相作用调节角膜缘上皮干细胞的增生、分化及静止的动态平衡。双眼均存在角膜缘干细胞缺乏的患者可有望通过体外培养的方式诱导自体其他干细胞，如间充质干细胞、口腔黏膜上皮干细胞、人胚胎干细胞、牙髓干细胞等，向角膜样上皮干细胞分化而重建眼表。(国际眼科纵览，2020, 44: 42-46)

简介：摘要目的探讨程序性细胞死亡因子4(PDCD4)对肝癌细胞核因子(NF)-κB信号通路的影响。方法收集2017年3月至2020年3月期间在新乡医学院第一附属医院进行治疗的78例肝癌患者的外周血，分离血清和有核细胞。使用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测78例患者的肝癌组织及正常癌旁组织的PDCD4蛋白表达，使用酶联免疫吸附法测定肝组织内肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和NF-κB水平。PDCD4蛋白表达采用χ2检验，细胞存活率、克隆形成率、凋亡率、肝组织内TNF-α和NF-κB水平比较采用t检验，对PDCD4蛋白表达与TNF-α和NF-κB水平的相关性行Pearson相关分析。结果PDCD4蛋白表达在肝癌组织中的阳性表达率为46.15%，但在同一患者的癌旁组织中阳性表达率为100.00%，癌旁组织高于肝癌组织，差异有统计学意义(χ2＝17.783，P<0.05)。肝癌细胞中转染PDCD4过表达载体的细胞存活率为(61.27±4.18)%、克隆成形率为(66.42±8.94)%，均低于对照组，且PDCD4组的细胞凋亡率为(28.66±4.20)%，高于对照组，差异有统计学意义(t1＝3.815，t2＝1.676，t3＝2.626，P<0.05)。肝癌组肝组织的TNF-α为(204.18±32.17) ng/g，NF-κB水平为(93.19±26.56) ng/g，均高于癌旁组织，差异有统计学意义(t1＝5.095，t2＝5.461，P<0.05)。Pearson相关分析显示，肝癌患者的肝组织PDCD4蛋白表达与TNF-α和NF-κB水平均呈负相关(r1＝0.531，r2＝0.791，P<0.05)。结论PDCD4能够干预肝癌细胞NF-κB信号通路的活化，抑制生长，促进凋亡。

简介：摘要Hippo信号通路是一种新型的、高度保守的哺乳动物信号通路，其核心成分的突变和表达改变在多种肿瘤细胞的侵袭、迁移及化疗耐药中发挥重要作用。喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma ，LSCC)是喉癌中最常见的病理学类型，严重危害人类健康及生存质量。近年的研究显示，Hippo信号通路与喉鳞状细胞癌的发生发展密切相关，该信号通路与其它信号通路以及非编码RNA之间的相互作用关系也逐渐得到揭示。针对Hippo通路的新药不断涌现，有望成为治疗SLCC的新策略。围绕着这几个方面，以下针对Hippo信号通路在喉鳞状细胞癌的最新研究进展做一综述。

简介：摘要口腔鳞状细胞癌（OSCC）是临床上最常见的头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）之一，目前主要采用手术治疗为主、放化疗为辅，多种治疗方式联合的综合治疗方式来应对，由于其术后可能局部复发、淋巴结转移，患者术后5年生存率仍然不足50%，因此仍然需要寻找新的治疗方案。Hippo信号通路在调控器官大小、细胞数量和调节组织稳态平衡，以及在肿瘤的发生、发展中都发挥着至关重要的作用。研究表明，Hippo信号通路在调控OSCC细胞的增殖、侵袭和转移、凋亡和维持肿瘤干细胞特性等生物学行为中亦发挥着非常重要的作用。因此，Hippo信号通路可能为OSCC的治疗提供新的靶点。本文综述了Hippo信号通路的组成、调节机制及Hippo信号通路在OSCC发生、发展中的研究进展，以期为OSCC的研究和防治提供更广阔的思路。

简介：摘要目的研究芬太尼对乳腺癌细胞干细胞特性（简称干性）的影响及分子机制。方法2018年1月至2019年10月采用人乳腺癌细胞系BT549作为体外研究对象，经0.01和0.10 μmol/L芬太尼处理后，通过成球能力实验和克隆形成能力实验检测乳腺癌细胞干性的变化；采用实时定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测干性相关转录因子性别决定区Y框蛋白2（Sox2）、八聚体结合转录因子4（Oct4）和Nanog mRNA表达水平；利用蛋白免疫印迹实验检测Wnt信号通路关键蛋白Wnt3a、磷酸化糖原合酶激酶-3β（p-GSK-3β）、糖原合酶激酶-3β（GSK-3β）、β-连环蛋白（β-catenin）的表达水平。下调Wnt3a后，再行蛋白免疫印迹实验和成球能力实验。结果0.01和0.10 μmol/L芬太尼处理的乳腺癌细胞球体直径、克隆形成率、Sox2 mRNA、Oct4 mRNA、Nanog mRNA、Wnt3a、p-GSK-3β、GSK-3β和β-catenin明显大于空白对照［（131.22 ± 1.06）和（636.37 ± 0.02） μm比（72.68 ± 0.13） μm、（41.33 ± 0.03）%和（60.58 ± 1.08）%比（20.93 ± 0.15）%、2.25 ± 0.20和3.82 ± 0.84比1.00、1.87 ± 1.06和3.35 ± 0.04比1.00、2.85 ± 0.03和4.36 ± 0.50比1.00、1.82 ± 0.03和2.57 ± 0.42比1.00、2.04 ± 0.13和2.81 ± 0.05比1.00、1.62 ± 0.17和2.93 ± 0.06比1.00、2.15 ± 0.02和3.54 ± 0.21比1.00］，0.10 μmol/L芬太尼处理的乳腺癌细胞各指标明显大于0.01 μmol/L芬太尼处理的乳腺癌细胞，差异有统计学意义（P<0.01）。干扰Wnt3a后，p-GSK-3β、GSK-3β、β-catenin、Sox2、Oct4和球体直径的表达明显低于空白对照［0.12 ± 0.05比1.00、0.53 ± 0.06比1.00和0.24 ± 0.21比1.00、0.28 ± 0.10比1.00和0.06 ± 0.01比1.00、（18.14 ± 0.30）μm比（74.32 ± 0.12）μm］，差异有统计学意义（P<0.01）。结论芬太尼通过激活Wnt3a/β-catenin信号通路促进乳腺癌细胞干性。

简介：摘要白细胞介素-6(IL-6)能修复多种组织损伤。IL-6信号通路中的关键转录因子——信号转导及转录活化因子3 (STAT3) 具有保护心脏的功能。研究发现，IL-6通过介导STAT3信号传导通路(IL-6/STAT3信号传导通路)，在心脏创伤、心肌炎、心脏衰竭等多种心脏疾病造成的损伤中发挥促进心脏修复的作用。深入研究IL-6/STAT3信号传导通路对心脏疾病有积极的治疗意义，现就该通路在心脏修复中的作用进展进行综述。

简介：摘要目的探讨双氢睾酮（DHT）对人外周血早期内皮祖细胞（PB-EPCs）增殖、迁移功能的影响及RhoA/ROCK信号通路在其中的作用。方法取健康成人外周血分离、培养出早期EPCs并鉴定。分别以不同浓度DHT(1、10、100 nmol/L)干预，得出最佳浓度和最佳作用时间后用于后续干预实验。分组：对照组、DHT、RhoA抑制剂C3 exoenzyme+DHT组、ROCK抑制剂Y-27632+DHT组。检测各组EPCs的增殖、迁移能力。ELISA法检测各组细胞上清液液中VEGF蛋白含量。结果DHT在一定范围内呈浓度-时间依赖性促进EPCs增值、迁移功能，分别在浓度为10 nmol/L和24 h达到最大作用效果。与单纯10 nmol/L的DHT刺激组相比，C3 exoenzyme[(0.22±0.02) vs (0.26±0.05),P>0.05]和Y-27632[(0.21±0.04) vs (0.26±0.05), P>0.05]能够减弱DHT诱导的EPCs增殖，但差异无统计学意义。DHT对EPCs迁移能力的促进作用可被C3 exoenzyme[(35.26±4.27) vs (46.92±5.46), P<0.05]和Y-27632[(33.61±5.33) vs (46.92±5.46), P<0.01]抑制。DHT对EPCs分泌VEGF能力的促进作用可被C3 exoenzyme[(116.75±7.42) vs (156.80±21.74), P<0.05]和Y-27632[(121.73±5.33) vs (156.80 ±21.74), P<0.01]抑制。结论DHT呈一定的浓度-时间依赖性促进EPCs的增殖、迁移以及VEGF的表达，其中RhoA/ROCK信号通路参与调控了此过程。

简介：摘要肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导蛋白（TWEAK）是肿瘤坏死因子（TNF）超家族成员，通过作用于唯一受体成纤维细胞生长因子14 （Fn14）调控细胞的增殖、分化和迁移等多种生命活动。近来研究表明，TWEAK/Fn14信号可以作用于多种干细胞，如肝干细胞、神经干细胞和间充质干细胞等，通过影响其增殖与分化的能力，干预组织的修复与再生。对该领域的研究进行综述，将有助于揭示TWEAK/Fn14信号调控干细胞增殖与分化的作用与机制，并为干细胞在疾病发生机制等基础研究、细胞治疗和组织工程等临床医学研究提供新的方向。

简介：摘要目的观察钠钾ATP酶抑制剂哇巴因抑制肝癌HepG2细胞的增殖和分裂效果，并探讨其作用机制。方法不同浓度（0.1、1.0、10.0 μmol/L）哇巴因作用HepG2细胞24 h，以HepG2细胞为对照组，通过细胞活力检测试剂盒（CCK-8法）检测哇巴因对HepG2细胞增殖的抑制作用，细胞免疫荧光共定位（ICC法）检测细胞染色体分离状态，Western印迹检测极光激酶A（AURKA）、雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、p-mTOR、促分裂原活化蛋白激酶（ERK）、p-ERK蛋白表达。结果0.1、1、10 μmol/L哇巴因作用细胞24 h后，细胞生长抑制率分别为（23.50±4.57）%、（49.80±5.32）%和（72.10±5.62）%，与对照组相比差异均有统计学意义，抑制效果呈现浓度依赖性（F=32.8，均P<0.05）；细胞免疫荧光共定位显示，1 μmol/L哇巴因作用细胞24 h后，染色体分离发生障碍。与对照组相比，加药组细胞纺锤体直径显著较低，差异有统计学意义（t=9.58，P<0.05）。Western印迹结果显示，1 μmol/L哇巴因作用HepG2细胞24 h后，与对照组相比，AURKA、p-mTOR、p-ERK表达较低（F=16.26，8.32，33.59；P<0.05），哇巴因可阻抑肝癌细胞在裸鼠体内生长（F=370.20，P<0.05）。结论哇巴因通过阻遏激光激酶信号途径，诱发肝癌HepG2细胞染色体分裂障碍、抑制肝癌细胞生长。

简介：摘要目的探讨脑源性神经营养因子(BDNF)对罗哌卡因诱导的神经细胞损伤的保护作用及其机制。方法(1)实验一：分别用0、1、2、3、4、5 mmol/L罗哌卡因刺激人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y 48 h，于显微镜下观察各组细胞的形态变化，采用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞的活性情况，采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况，采用免疫组化染色检测各组细胞中蛋白激酶B(Akt)、增殖细胞核抗原(PCNA)阳性细胞的表达。(2)实验二：分别用0、1、3、5、7 mmol/L罗哌卡因刺激SH-SY5Y细胞48 h，采用MTT法检测各组细胞的活性情况并计算出罗哌卡因的半抑制浓度(IC50)。将SH-SY5Y细胞分为对照组(磷酸盐缓冲液刺激48 h)、罗哌卡因组(IC50浓度罗哌卡因刺激48 h)、BDNF+罗哌卡因组(20 μg/L BDNF刺激2 h+IC50浓度罗哌卡因刺激48 h)、Akt信号通路激活剂SC79+罗哌卡因组(5 mg/L SC79刺激2 h+IC50浓度罗哌卡因刺激48 h)、BDNF+Akt信号通路抑制剂API-2+罗哌卡因组(20 μg/L BDNF及10 μmol/L API-2刺激2 h+IC50浓度罗哌卡因刺激48 h)，于显微镜下观察各组细胞的形态变化，采用MTT法检测各组细胞的活性情况，采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况，采用免疫组化染色检测各组细胞中Akt、PCNA阳性细胞的表达，采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blotting检测各组细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3) mRNA及蛋白的表达，采用Western blotting检测各组细胞中Akt、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)蛋白的表达。结果(1)实验一：与0 mmol/L罗哌卡因组比较，1、2、3、4、5 mmol/L罗哌卡因组的细胞活性明显降低，细胞凋亡率明显升高，Akt、PCNA阳性细胞数明显降低，差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)实验二：与对照组比较，罗哌卡因组的细胞活性明显降低，细胞凋亡率明显升高，Akt、PCNA阳性细胞数明显降低，Bcl-2 mRNA及蛋白的表达均明显降低，Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白的表达均明显升高，p-Akt、p-PI3K蛋白的表达均明显降低，差异均有统计学意义(P<0.05)。与罗哌卡因组比较，BDNF+罗哌卡因组、SC79+罗哌卡因组的细胞活性明显升高，细胞凋亡率明显降低，Akt、PCNA阳性细胞数明显升高，Bcl-2 mRNA及蛋白的表达明显升高，Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白的表达明显降低，p-Akt、p-PI3K蛋白的表达明显升高，差异均有统计学意义(P<0.05)。与BDNF+罗哌卡因组、SC79+罗哌卡因组比较，BDNF+API-2+罗哌卡因组的细胞活性明显降低，细胞凋亡率明显升高，Akt、PCNA阳性细胞数明显降低，Bcl-2 mRNA及蛋白的表达明显降低，Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白的表达明显升高，p-Akt、p-PI3K蛋白的表达明显降低，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论BDNF可通过激活Akt信号通路减轻罗哌卡因引起的神经细胞损伤，从而调节神经细胞的增殖和凋亡。

简介：摘要目的探讨亚砷酸钠（NaAsO2）暴露对小鼠淋巴结血管内皮细胞系SVEC4-10细胞中核因子E2相关因子2（Nrf2）信号通路转录活性的影响。方法采用细胞体外培养方法，分别以不同剂量NaAsO2[0（对照）、2、5、10、20、50、100、150 μmol/L]处理SVEC4-10细胞24 h，四唑化合物（MTS）法检测细胞活性。时间-效应关系研究分别以5 μmol/L NaAsO2处理SVEC4-10细胞0（对照）、2、6、12 h。剂量-效应关系研究分别以0（对照）、2、5、10 μmol/L NaAsO2处理SVEC4-10细胞6 h。采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测Nrf2信号通路相关基因Nrf2、谷氨酰半胱氨酸连接酶催化亚单位（Gclc）、谷氨酰半胱氨酸连接酶修饰亚单位（Gclm）、醌氧化还原酶1（Nqo1）、金属硫蛋白1（Mt1）mRNA水平。采用SVEC4-10细胞建立Nrf2基因稳转沉默（Nrf2-KD）细胞，分别以0（对照）、10、20 μmol/L NaAsO2处理干扰对照（scramble，SCR）细胞和Nrf2-KD细胞16 h，流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果MTS检测结果显示，对照组，2、5、10、20、50、100、150 μmol/L NaAsO2处理组细胞活性分别为（100.00 ± 19.53）%、（98.18 ± 9.85）%、（96.09 ± 30.04）%、（90.64 ± 8.74）%、（59.75 ± 12.09）%、（35.43 ± 8.58）%、（26.35 ± 5.89）%、（17.54 ± 4.48）%，不同剂量组间细胞活性比较差异有统计学意义（F = 18.30，P < 0.05）；且20、50、100、150 μmol/L NaAsO2处理组细胞活性显著低于对照组（P均< 0.05）。时间-效应关系研究结果显示，对照组，2、6、12 h处理组组间Nrf2、Gclc、Gclm、Nqo1、Mt1 mRNA水平比较差异有统计学意义（F = 56.69、85.28、90.82、80.46、758.60，P均< 0.05）；随着砷暴露时间的延长，Nrf2、Gclc、Gclm、Mt1 mRNA水平先上升后下降，Nqo1 mRNA水平不断上升；其中，Nrf2 mRNA水平在2 h达到峰值，Gclc、Gclm、Mt1 mRNA水平在6 h达到峰值，Nqo1 mRNA水平在12 h达到峰值。剂量-效应关系研究结果显示，对照组，2、5、10 μmol/L NaAsO2处理组组间Nrf2、Gclc、Gclm、Nqo1、Mt1 mRNA水平比较差异有统计学意义（F = 68.39、72.26、30.41、397.00、28.88，P均< 0.05）；随着砷暴露剂量增加，Nrf2、Gclc、Gclm、Nqo1、Mt1 mRNA水平有所上升，其中Nrf2 mRNA水平在5 μmol/L剂量时达到峰值，Gclc、Gclm、Nqo1、Mt1 mRNA水平在10 μmol/L剂量时达到峰值。细胞凋亡检测结果显示，对照组，10、20 μmol/L NaAsO2处理组组间SCR、Nrf2-KD细胞凋亡率比较差异有统计学意义（F = 8.18、9.66，P均< 0.05）；与对照组比较，20 μmol/L NaAsO2处理组SCR、Nrf2-KD细胞凋亡率升高（P均< 0.05）；且20 μmol/L NaAsO2处理组Nrf2-KD细胞凋亡率高于同剂量组的SCR细胞（P < 0.05）。结论NaAsO2暴露引起小鼠淋巴结血管内皮细胞系SVEC4-10细胞Nrf2信号通路活化，激活适应性抗氧化反应，改变转录活性；而Nrf2的沉默使SVEC4-10细胞对NaAsO2毒性更为敏感。

简介：摘要目的研究NVP-TNKS656对肝细胞癌(HCC)细胞系生长的影响以及相应分子机制。方法采用2.5、5、10.0 μmol/L剂量NVP-TNKS656处理5种HCC细胞系，选取HLE及HLF细胞系，分为四组：二甲基亚砜(DMSO)组、NVP-TNKS656 2.5.0 μmol/L组、NVP-TNKS656 5.0 μmol/L组和NVP-TNKS656 10 μmol/L组，细胞培养48 h进行后续实验。采用结晶紫染色法计数细胞克隆形成数目；蛋白质印迹法检测是相关蛋白(YAP)、血管动蛋白样1(AMOTL1)、血管动蛋白样2(AMOTL2)蛋白表达水平；实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测YAP及其下游结缔组织生长因子(CTGF)和富含半胱氨酸的血管生成诱导剂61(Cyr61)的mRNA表达；采用双荧光素酶报告基因检测转录增强因子域家族(TEAD)荧光素酶活性。结果在HLE、HLF、Huh7、MHCC97-H、MHCC97-L细胞系中，NVP-TNKS656以剂量依赖的方式抑制了5种HCC细胞系的生长，DMSO对照组与不同剂量给药组间细胞克隆形成计数均差异有统计学意义(F＝90.46、68.58、191.8、114.6、201.4，均P<0.05)。在HLE和HLF细胞系中，NVP-TNKS656可呈剂量依赖性显著降低YAP蛋白水平，降低YAP下游靶基因CTGF(HLE细胞分别为1.02±0.02、0.90±0.03、0.57±0.02、0.38±0.03，HLF细胞分别为0.98±0.03、0.86±0.02、0.66±0.02、0.43±0.01)及Cyr61(HLE细胞分别为1.00±0.01、0.86±0.02、0.74±0.03、0.44±0.03，HLF细胞分别为0.99±0.02、0.87±0.01、0.72±0.02、0.54±0.01)的表达(均P<0.05)，并抑制YAP/TEAD荧光素酶分子的活性。同时NVP-TNKS656以剂量依赖的方式上调了YAP的两个主要负调控因子，即AMOTL1/2蛋白，促进HLE和HLF细胞的凋亡。结论NVP-TNKS656可以通过稳定AMOTL1/2下调YAP下游靶基因从而抑制HCC的增殖，可能成为治疗HCC的潜在药物。

简介：摘要目的研究miR-520b在舌鳞状细胞癌（TSCC）中的表达，探讨其在TSCC侵袭转移过程中的作用及分子机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测TSCC组织及细胞系中miR-520b的表达；沉默或过表达TSCC细胞株SCC-9和UM1中miR-520b的表达后，实时荧光定量PCR检测细胞上皮-间质转化（EMT）相关基因表达；Transwell小室验证细胞侵袭转移能力改变；TOP/FO双荧光素酶报告基因系统、实时荧光定量PCR、Western blot等检测miR-520b表达对Wnt/β-catenin信号通路的影响；生物信息学、Western blot及双荧光素酶实验验证miR-520b调控Wnt/β-catenin信号通路的潜在靶基因Dickkopf 1（DKK1）。使用SPSS 21.0软件进行统计学分析，样本均数间比较采用Student′s t检验。结果与正常相邻组织（2.59±1.43）相比，miR-520b相对表达量在TSCC组织中显著上调（5.28 ± 1.63），差异有统计学意义（t = 16.04，P = 0.0005），并且与患者中更具侵袭性的TSCC表型正相关（5.81 ± 0.74 vs. 3.08 ± 0.89，t = 12.11，P = 0.0011）；过表达miR-520b促进TSCC细胞侵袭转移（SCC-9：110.8 ± 17.8 vs. 74.7 ± 9.8，tSCC-9 = 32.58，PSCC-9 = 0.0011；UM1：178.8 ± 39.7 vs. 90.3 ± 22.5，tUM1 = 99.67，PUM1 = 0.0002），低表达则相反（SCC-9：74.7 ± 9.8 vs. 30.9 ± 7.8，tSCC-9 = -31.47，PSCC-9 = 0.0024；UM1：90.3 ± 22.5 vs. 35.7 ± 10.6，tUM1 = -37.89，PUM1 = 0.0019）；此外，过表达miR-520b可靶向抑制DKK1，进而激活Wnt/β-catenin信号通路，促进TSCC细胞上皮-间质转化。结论MiR-520b在TSCC中高表达，可能通过抑制DKK1增强Wnt/β-catenin信号通路，促进TSCC侵袭转移。

简介：摘要目的探讨脂联素(AD)调控滑膜细胞产生炎性因子进而诱发骨关节炎(OA)。方法采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测刺激细胞的最适加药浓度；通过荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)通路标志基因如促分裂原活化的蛋白激酶(MEK)、丝裂原活化蛋白激酶(ERK1/2)的表达变化。蛋白质印迹法(Western blot)分析AD的刺激对ERK1/2、p38的磷酸化作用；酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定AD作用后滑膜细胞炎性因子的产量。多个样本比较采用单因素方差分析。结果AD(1 μg/ml)可显著对滑膜细胞产生增殖抑制作用(F＝136.900、11.930，P<0.05)；荧光定量PCR结果显示，与对照组比较，AD可上调MEK及ERK基因表达(1.026±0.072、2.926±0.158，t＝21.910，P<0.05；0.960±0.194、5.433±0.532，t＝15.810，P<0.05)；Western blot结果表明，与对照组比较，AD可刺激滑膜细胞增加ERK1/2、p38的磷酸化(0.488±0.083、1.152±0.050，t＝11.860，P<0.05；0.407±0.014、1.312±0.063，t＝24.370，P<0.05)；ELISA法结果显示，AD可显著促进由趋化蛋白引起的下游炎性因子如白细胞介素(IL)-1β、IL-6、基质金属蛋白酶(MMP)-3和MMP-13、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的产生[(15.077±0.884)、(69.947±2.950) pg/ml、(9.225±0.323)、(134.925±15.02) ng/ml、(93.055±6.073) pg/ml]，与对照组比较，差异有统计学意义(t＝3.239、4.838、5.312、4.366、3.292，P<0.05)，与抑制剂组比较，差异有统计学意义(t＝2.275、6.251、4.331、1.221、3.456，P<0.05)。结论AD可通过影响MAPK/ERK信号通路来增强滑膜细胞炎性因子的产生。

简介：摘要目的探讨低氧环境下通过低氧诱导因子-1α（HIF-1α）调控Notch信号通路对人牙髓干细胞（HDPSC）成牙本质向分化能力的影响。方法组织块酶消化法培养HDPSC，给予氯化钴（CoCl2）诱导的化学性低氧环境，Western blot检测HIF-1α蛋白表达，茜素红染色检测细胞矿化结节形成能力，反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测Notch下游靶基因Hes1与成牙本质相关基因的表达；进一步加入Notch信号通路特异性阻断剂γ分泌酶抑制剂（GSI），观察以上指标的变化。报告基因方法检测HIF-1α对Notch信号通路的调控作用。采用R version 3.5.3软件进行统计分析，计量资料进行正态检验，多组间比较采用单因素方差分析（方差齐）或Kruskal-Wallis H检验（方差不齐），两两比较采用LSD-t检验（方差齐）或Mann-Whitney U检验（方差不齐）。结果（1）CoCl2诱导的低氧条件下HDPSC中的HIF-1α蛋白水平上调，Notch下游靶基因Hes1 mRNA相对表达量为1.46 ± 0.12，相比常氧组（1.06 ± 0.09）显著增高（t = -4.64，P = 0.012）；GSI处理阻断Notch信号通路后，低氧条件下HDPSC中HIF-1α蛋白水平下调，Hes1 mRNA相对表达量降低至0.82 ± 0.14，与处理前相比差异有统计学意义（t = 5.98，P = 0.004）；常氧条件下GSI处理后的HDPSC中HIF-1α蛋白水平也明显下调，Hes1 mRNA相对表达量（0.30 ± 0.09）相比处理前也显著降低（t = 10.08，P = 0.001）；（2）矿化诱导后的茜素红染色结果显示：低氧处理后，HDPSC细胞成牙本质分化能力下降；GSI处理后，成牙本质向分化能力增强。成骨/牙本质相关基因mRNA表达水平检测结果显示：低氧处理后，BSP、OCN和DSPP的mRNA相对表达量分别为0.53 ± 0.14、0.43 ± 0.20、0.48 ± 0.11，相比常氧组（1.21 ± 0.12、1.08 ± 0.19、1.03 ± 0.13）显著降低（tBSP = 6.30，PBSP = 0.003；tOCN = 4.07，POCN = 0.015；tDSPP = 5.67，PDSPP = 0.005）；GSI处理后，低氧条件下BSP、OCN和DSPP mRNA相对表达量分别为0.99 ± 0.13、1.09 ± 0.13、0.95 ± 0.16，与处理前相比显著增高（tBSP = -4.17，PBSP = 0.014；tOCN = -4.83，POCN = 0.012；tDSPP = -4.30，PDSPP = 0.017），常氧条件下BSP、OCN和DSPP mRNA相对表达量分别为1.73 ± 0.20、1.55 ± 0.08、1.52 ± 0.14，与处理前相比显著增高（tBSP = -3.84，PBSP = 0.027；tOCN = -3.99，POCN = 0.035；tDSPP = -4.43，PDSPP = 0.011）。（3）荧光素酶报告基因结果显示，HIF-1α可调控NICD启动子，使双荧光素酶相对表达活性为5.37 ± 0.12，与对照组（2.09 ± 0.15）相比显著增强（t = -28.92，P<0.001），提示HIF-1α可能使Notch信号通路激活。结论低氧引起HDPSC中HIF-1α升高并可能通过激活Notch信号通路抑制其成牙本质向分化能力。