简介:摘要目的探讨HOXC10在胃癌中的作用及其与幽门螺杆菌(H.Pylori)感染的关系。方法mRNA芯片筛选H.Pylori感染胃上皮腺癌细胞系AGS的上调基因,并通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)验证HOXC10的表达差异。免疫组织化学检测H.Pylori感染对胃癌组织HOXC10表达的影响,并在GEO数据集中分析HOXC10与胃癌预后的关系。HOXC10小干扰RNA(siRNA)转染AGS细胞转染后,流式细胞术、细胞计数试剂盒(CCK-8)、Tanswell和成球实验评估H.Pylori对胃癌细胞凋亡、周期、增殖、侵袭、迁移和干性的影响。通过Kaplan-Meier方法及Log-rank(Mantel-Cox)生存期检验进行生存分析。两组间比较采用t检验,多组间比较采用方差分析并用Neuman-Keuls检验进行两组间比较。结果H.Pylori感染AGS细胞后mRNA芯片分析表明HOXC10表达显著上调,并且在胃癌细胞和临床组织中采用RT-qPCR、Western blot和免疫组织化学法也进一步证明H.Pylori感染可导致HOXC10表达上调(t=12.480、3.916,P<0.01)。此外,GEO数据集(GSE19188和GSE31210)分析显示HOXC10高表达与胃癌患者不良预后相关。siRNA沉默HOXC10表达能明显阻断H.Pylori感染对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的促进作用(t=8.818、15.920,P<0.01);并逆转H.Pylori感染对AGS细胞顺铂耐药性的增强作用[半数抑制浓度(IC50):1.550 mg/L比5.442 mg/L,t=1.342,P<0.01]。成球实验和周期分析结果表明沉默HOXC10表达能显著抑制H.Pylori诱导形成的胃癌干细胞并导致S期阻滞(t=7.528,P<0.01),进而降低H.Pylori介导的胃癌细胞顺铂耐药。结论H.Pylori可通过上调HOXC10促进胃癌细胞增殖、侵袭和迁移,并抑制S期阻滞,导致胃癌细胞顺铂耐药。
简介:摘要目的探讨HOXC8在食管癌中的表达情况及其可能参与的信号通路。方法从癌症和肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库中下载并预处理食管癌数据集的mRNA表达RNA-Seq数据及临床预后相关数据,进行差异表达基因分析,并绘制火山图和热图,对筛选出的差异表达基因进行可视化。以HOXC8表达量的中位数为界将食管癌患者分为高表达组和低表达组,使用Kaplan-Meier法进行生存分析。然后使用GSEA 4.0.1软件进行基因集富集分析,同时进行多GSEA富集分析的图形绘制。结果对161例食管癌组织和11例癌旁组织的mRNA表达数据进行差异表达分析后,共筛选出3 454个差异表达基因,其中有2 317个上调的基因和1 137个下调的基因,聚类分析结果显示,差异表达可以把食管癌与癌旁组织有效区分开,说明上述差异表达结果具有很好的准确性。差异分析和配对差异分析结果显示,HOXC8在食管癌中显著高表达,与癌旁组织的差异具有统计学意义(t=5.333,P<0.001;t=3.101,P=0.007)。删除生存时间<30 d的样本后,共有107例样本,HOXC8高表达患者(n=54)的预后更差,中位生存时间为553 d(95%CI为396~710),HOXC8低表达患者(n=53)的中位生存时间为784 d(95%CI为62~1 506),差异有统计学意义(χ2=4.153,P=0.042),提示HOXC8为癌基因。GSEA分析结果显示,HOXC8高表达样本富集了细胞周期、剪接体等相关基因集,而HOXC8低表达样本则富集了磷脂酰肌醇信号通路等相关基因集。结论HOXC8在食管癌中显著高表达,且HOXC8高表达的患者预后更差,其可能通过参与细胞周期、剪接体、磷脂酰肌醇信号通路等调节食管癌的发生发展。
简介:摘要目的探讨胶质瘤干细胞(GSCs)微环境中恶变巨噬细胞(tMΦ)的脂代谢特征及其相关分子调控机制,为靶向tMΦ的精准治疗提供实验依据。方法实验采用巨噬细胞(MΦ)、tMΦ细胞株(包括tMΦ1、tMΦ2),通过检测细胞内的三酰甘油(TG)和总胆固醇(TC)的水平分析tMΦ的脂代谢特征,采用蛋白质免疫印迹(Western blot)实验检测调控脂代谢的关键分子钙调蛋白(CaM)、载脂蛋白E(ApoE)、激素敏感性三酰甘油脂肪酶(HSL)、肝X受体(LXR)的表达水平。构建tMΦ的差异表达长链非编码RNA(lncRNA)表达谱,选择HOXC-AS3为研究对象。建立HOXC-AS3过表达和低表达的tMΦ细胞株。采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测上调、沉默HOXC-AS3后tMΦ内CaM的表达水平。通过克隆形成实验观察HOXC-AS3沉默后tMΦ的集落形成能力,以Transwell实验检测其侵袭能力,通过建立在体移植瘤小鼠模型观察其致瘤能力。对与HOXC-AS3脂代谢相关的结合蛋白进行蛋白组学分析,应用RNA免疫共沉淀实验验证二者是否可形成复合体,进一步通过qRT-PCR、Western blot实验分析HOXC-AS3对其结合蛋白的调控作用。结果tMΦ中的TC、TG含量及CaM、ApoE、HSL、LXR蛋白的表达水平均高于正常MΦ(均P<0.01)。LncRNA表达谱结果提示,与正常MΦ相比,HOXC-AS3在tMΦ1、tMΦ2中均呈高表达。克隆形成实验结果表明,沉默HOXC-AS3后的tMΦ1、tMΦ2(sh-HOXC-AS3组)的克隆数目明显少于空转染对照组(sh-NC组)(均P<0.01);Transwell实验结果表明,sh-HOXC-AS3组tMΦ1、tMΦ2的穿膜细胞数少于sh-NC组(均P<0.01);致瘤实验结果表明,sh-HOXC-AS3组小鼠的移植瘤体积均小于sh-NC组(均P<0.01)。qRT-PCR结果提示,过表达HOXC-AS3可上调tMΦ中CaM的表达,而沉默HOXC-AS3可下调tMΦ中CaM的表达(均P<0.01)。蛋白组学分析结果提示,与HOXC-AS3相关性最高的脂代谢相关蛋白为hnRNPA1。RNA免疫共沉淀结果证实,hnRNPA1与HOXC-AS3可形成复合体,沉默hnRNPA1后tMΦ内的CaM表达下调(均P<0.01),而沉默tMΦ内的HOXC-AS3后,hnRNPA1基因和蛋白水平的变化均无统计学意义(均P>0.05)。结论tMΦ中的脂代谢合成水平高于正常MΦ,其机制可能为HOXC-AS3通过与hnRNPA1的结合,从而影响脂代谢分子CaM的表达,进而调控tMΦ的脂代谢重塑。靶向HOXC-AS3可抑制tMΦ在GSCs微环境的增殖和侵袭,HOXC-AS3可能为提高脑胶质瘤免疫治疗效果的潜在靶点。
简介:摘要目的探讨胶质瘤干细胞(GSCs)微环境中恶变巨噬细胞(tMΦ)的脂代谢特征及其相关分子调控机制,为靶向tMΦ的精准治疗提供实验依据。方法实验采用巨噬细胞(MΦ)、tMΦ细胞株(包括tMΦ1、tMΦ2),通过检测细胞内的三酰甘油(TG)和总胆固醇(TC)的水平分析tMΦ的脂代谢特征,采用蛋白质免疫印迹(Western blot)实验检测调控脂代谢的关键分子钙调蛋白(CaM)、载脂蛋白E(ApoE)、激素敏感性三酰甘油脂肪酶(HSL)、肝X受体(LXR)的表达水平。构建tMΦ的差异表达长链非编码RNA(lncRNA)表达谱,选择HOXC-AS3为研究对象。建立HOXC-AS3过表达和低表达的tMΦ细胞株。采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测上调、沉默HOXC-AS3后tMΦ内CaM的表达水平。通过克隆形成实验观察HOXC-AS3沉默后tMΦ的集落形成能力,以Transwell实验检测其侵袭能力,通过建立在体移植瘤小鼠模型观察其致瘤能力。对与HOXC-AS3脂代谢相关的结合蛋白进行蛋白组学分析,应用RNA免疫共沉淀实验验证二者是否可形成复合体,进一步通过qRT-PCR、Western blot实验分析HOXC-AS3对其结合蛋白的调控作用。结果tMΦ中的TC、TG含量及CaM、ApoE、HSL、LXR蛋白的表达水平均高于正常MΦ(均P<0.01)。LncRNA表达谱结果提示,与正常MΦ相比,HOXC-AS3在tMΦ1、tMΦ2中均呈高表达。克隆形成实验结果表明,沉默HOXC-AS3后的tMΦ1、tMΦ2(sh-HOXC-AS3组)的克隆数目明显少于空转染对照组(sh-NC组)(均P<0.01);Transwell实验结果表明,sh-HOXC-AS3组tMΦ1、tMΦ2的穿膜细胞数少于sh-NC组(均P<0.01);致瘤实验结果表明,sh-HOXC-AS3组小鼠的移植瘤体积均小于sh-NC组(均P<0.01)。qRT-PCR结果提示,过表达HOXC-AS3可上调tMΦ中CaM的表达,而沉默HOXC-AS3可下调tMΦ中CaM的表达(均P<0.01)。蛋白组学分析结果提示,与HOXC-AS3相关性最高的脂代谢相关蛋白为hnRNPA1。RNA免疫共沉淀结果证实,hnRNPA1与HOXC-AS3可形成复合体,沉默hnRNPA1后tMΦ内的CaM表达下调(均P<0.01),而沉默tMΦ内的HOXC-AS3后,hnRNPA1基因和蛋白水平的变化均无统计学意义(均P>0.05)。结论tMΦ中的脂代谢合成水平高于正常MΦ,其机制可能为HOXC-AS3通过与hnRNPA1的结合,从而影响脂代谢分子CaM的表达,进而调控tMΦ的脂代谢重塑。靶向HOXC-AS3可抑制tMΦ在GSCs微环境的增殖和侵袭,HOXC-AS3可能为提高脑胶质瘤免疫治疗效果的潜在靶点。
简介:目前,据日本《东洋经济》预测,今后10年将取得飞跃性发展的10大技术是:1.便携式信息机器2.燃料电池汽车3.使用电脑的高科技农业4.上网定购高品质、低价位商品5.步入虚拟生活时代
简介:上期讲到,小雄他们穿过暗道来到了一个大厅,大厅里的景象让众人目瞪口呆!这时,一向不讨人喜欢的西单不知被什么东西叮了一下,便神色恍惚地离开了众人……