简介：姚开虎副研究员非常高兴邀清到意大利佛罗伦萨大学附属AnnaMeyer儿童医院ChiaraAzzari教授来北京儿童医院做学术访问，在您的“侵袋性细菌感染的分子学诊断：一个有川的临床一具”的报告中谈到采用分子诊断方法评估意大利肺炎链球菌疾病负担的工作，这些经验对中国开展相关工作具有很好的借鉴意义。

简介：利用分子生物学中的聚合链式反应（PCR）方法对毛皮中的貂基因成分进行鉴定检测研究。研究设计了貂线粒体基因特异性引物和探针,优化了PCR反应体系和条件,采用了普通PCR和实时荧光PCR（RT-PCR）两种PCR检测方法进行比较。结果表明,设计的引物和探针在9份貂肉样品中通用性好,在兔、狐狸和貉子等10种其他物质中特异性良好,在于貂毛皮的PCR鉴定检出率为100%。但是在实时荧光PCR检测方法对样品的前处理要求比较高,检出率低于普通PCR检测方法,只有不到66.7%,对于市场上的貂毛皮鉴定检测,还是普通PCR方法比较好。

简介：摘要目的建立武乡病毒(wuxiang virus, WUXV)的实时荧光定量TaqMan反转录聚合酶链式反应(real-time RT-PCR)检测方法。方法从GenBank中下载WUXV的全部基因序列，使用MEGA-X完成多序列比对分析，选择针对S段基因高保守区设计的引物和探针，分别对检测反应的特异性、灵敏性和稳定性进行评价。结果建立的方法可以特异性地检测WUXV，并且与多种虫媒病毒无交叉反应；反应的灵敏度较高，最低检测下限为1 pfu/ml；同一样品重复检测循环阈值(Ct)的批间变异系数均小于1.00%；用本研究建立的TaqMan RT-PCR检测30批白蛉核酸样本，其中7批出现WUXV阳性扩增曲线。结论本研究建立了灵敏度高、特异性强、重复性好的TaqMan RT-PCR方法可用于WUXV的大批量样本筛查。

简介：近年来，海豚链球病已给我国及世界罗非鱼养殖带来了巨大的经济损失。为建立特异、敏感、快速的罗非鱼海豚链球菌PCR诊断方法，根据NCBI数据库已公布的海豚链球菌基因序列，设计合成种特异性引物CM1／CM2，进行海豚链球菌特异基因片段的PCR扩增试验、反应条件的优化及不同检测材料的比较。同时测试了方法的特异性和敏感性，对不同养殖鱼场的10份临床样品进行了检测。试验结果表明，引物CM1／CM2可以扩增到与预计大小相符的870bp海豚链球菌特异性基因片段；PCR反应与鮰爱德华氏细菌、Ⅰ型荧光假单胞菌、点状产气单胞菌点状亚种、鳗弧菌、温和气单胞菌、肠型点状产气单胞菌、柱状黄杆菌、嗜水气单胞菌和河弧菌水产常见病原菌均无交叉反应；能够检测的最低细菌数为20～30个海豚链球菌；同时，该PCR可以直接从病鱼的脑、肝脏、肾脏及脾脏组织扩增出特异性目的片段；临床菌株检测结果与基于菌株16srRNA基因序列系统进化分析结果一致。由于病鱼内脏组织总DNA、菌落及菌液可直接用于该PCR扩增，最大限度缩短了整个检测时间及降低了检测成本。方法的建立为致病性海豚链球菌检测提供了一种简便、快速的途径，具有较好的应用前景。

简介：摘 要：气溶胶传播途径被世卫组织认为是造成大面积病毒传播的主要原因。且封闭空间内空气流通较弱，携带有病毒颗粒的气溶胶可以更长时间悬浮于空气中，从而易导致更高的病毒感染率。开发针对人员密集场所的一体化全自动的快速实时监测系统，将有望实现空气中病毒颗粒的高效富集和快速实时监测，遏制疫情蔓延。项目的成功实施，不仅可以有效解决环境病毒难以实时检测的问题，填补环境病毒检测领域的市场空白，而且可以促进核酸检测和气体检测设备跨行业的融合发展，催化相关技术领域的快速产业化发展。

简介：

简介：目的建立梅毒螺旋体的荧光定量PCR检测方法。方法依据梅毒螺旋体（Treponemapallidum，TV）DNA多聚酶I（polA）基因序列，设计MGB—Taqman探针和PCR引物，对TPPA法检测到的不同国家和人种梅毒螺旋体抗体阳性患者和阴性人员血液样本进行检测，验证该PCR方法的灵敏度和特异性，以及2种检测方法的一致性。结果PCR产物测序证实新建的荧光PCR方法可以扩增到梅毒螺旋体polA基因区200bp长DNA片段。该方法特异性强、灵敏度高，可检出每微升血液中10拷贝梅毒DNA。在31例TPPA法检测结果为阳性的样本中，有21例为PCR阳性。证明其中10例TPPA法阳性为非现行感染，可能不具有传染性。统计分析表明该荧光PCR方法与TPPA方法对不同国家和种族人群检测结果未出现显著差异。结论新建的荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性好，可排除TPPA法阳性梅毒患者中非现行感染的旅行者，是适用于不同地区和种族的旅行者进行梅毒检测的新方法。

简介：对102份血清标本分别用PCR和ELISA方法检测HBV—DNA,HBsAg,抗—HBs,HBeAg,抗—HBe,抗—HBc（IgG）,抗—HBc（IgM）和Pre—S2。PCR检测结果表明:在HBsAg（+）血清中,HBV—DNA的检出率为70%。在HBeAg（+）血清中,HBV—DNA的检出率为100%。在抗—HBs（+）/抗—HBc（+）血清中,HBV—DNA的检出率为20%。因此大多数HBsAg携带者具有乙型肝炎病毒（HBV）传染性,抗—HBs（+）抗—HBc（+）血清不能排除HBV的传染性。

简介：摘要目的比较PCRHBV-DNA和ELISAHBsAg两种检测方法在检测内窥镜中HBV的检测情况，从而确定本次研究的试验方法。方法现场采集内窥镜各关键部位（镜身、孔道、活检钳）的样品207份，平均分成两份，按各自所用试剂盒的要求分别进行试验，比较两种试验的阳性检出率、一致性等试验评价指标。结果PCRHBV-DNA阳检率为27.54%、ELISAHBsAg阳检率为2.42%，经χ2检验，χ2=4.63P=0.031、一致性检验，kappa＝0.089,P=0.008，由此说明两种检验方法在内窥镜中痕量的HBV的检测过程中有显著性差异。结论PCRHBV-DNA对与内窥镜中痕量的HBV的检测试验方法优于ELISAHBsAg方法，在本次调查研究中应该采用PCRHBV-DNA的检测方法。

简介：目的：对目前最常用的检测微小RNA（miRNA）的茎环实时定量PCR法和PAP实时定量PCR法进行比较。方法：分别用茎环实时定量PCR法和PAP实时定量PCR法检测人乳腺癌细胞MCF-7中U6和23种miRNA的表达,利用定量PCR分析软件和琼脂糖凝胶电泳方法,将2种方法在引物设计难度、特异性与灵敏度,以及检测通量方面进行比较。结果：茎环法的特异性和灵敏度比PAP法高,但引物设计难度大,检测通量低;PAP法引物设计难度较低,检测通量较高,但特异性和灵敏度较差。结论：茎环法实时定量PCR适于有针对性地检测小规模miRNA,而PAP法则适于大规模miRNA筛选实验。

简介：目的建立登革病毒分子信标实时荧光PCR检测方法。方法针对登革病毒3’-UTR保守区设计引物和分子信标探针,构建阳性参考质粒,建立登革病毒分子信标实时荧光PCR检测方法。应用建立方法对血清标本进行检测,检测结果与TaqMan探针法进行比较。结果所建立的分子信标荧光PCR检测方法灵敏度达102copies/μL,与其它病毒无交叉反应;对70份血清标本检测结果与TaqMan探针法一致。结论所建立的分子信标荧光探针法具有较高的灵敏度和特异度。

简介：

简介：目的：建立一种灵敏度高、特异性好、精密度高、操作简便的荧光实时定量PCR技术，对临床标本中的TTVDNA进行定量检测。方法：设计针对TTV基因保守序列非转录区(UTR)的一对引物和一条荧光基团双标记探针。将PCR扩增所得的产物片段与PUCm—T载体连接并进行克隆，提取重组质粒以极限稀释法进行定量，作为定量检测的标准品。通过对重组质粒的测序来验证方法的特异性。通过与套式PCR—ELISA方法阳性检出率的比较，显示本方法学的高灵敏度。在临床研究中，通过对36例丙肝患者及123例不同血清标志物阳性的乙肝患者，166例健康体检者血清中TTVDNA的定量检测，评估TTVDNA在不同人群中检出阳性率的差异显著性。此外还观察了乙肝患者不同血清ALT水平组别TTVDNA阳性检出率的差别。结果：本方法检测TTV—DNA的灵敏度高于基于ORFl的普通套式PCR—ELISA方法，重组质粒测序结果显示方法有很好的特异性；通过重组质粒标本梯度稀释检测显示该方法的线性范围为10^2-7拷贝／ml；批间CV为13．2—16．0％，批内CV为6．5．0—11．3％。健康体检者、丙肝患者、乙肝患者三组人群的血清TTVDNA定量结果分别为10^4.11±0.97、10^3.91±1.07、10^3.89±0.99拷贝／ml；三组人群TTVDNA阳性检出率无差异显著性；且乙肝患者(TTVDNA+)血清ALT水平与TTVDNA载量无相关显著性(P>0．1)；乙肝患者血清ALT异常与正常两组TTVDNA阳性检出率无差异显著性(P>0．1)。结论：本方法操作简单、灵敏度高、特异性好、结果数据化，适合于临床实验室进行临床标本的TTV—DNA定量检测。

简介：目的建立基于TaqMan探针技术的皮炎外瓶霉荧光定量PCR检测方法.方法通过对皮炎外瓶霉ITS区域基因组序列（GenBank：JN675373.1）进行分析,设计合成特异性引物和荧光标记探针,优化荧光定量PCR反应条件.以临床标本中分离的皮炎外瓶霉为阳性菌株,及其他种类真菌和细菌作为阴性对照菌株,从特异性、敏感性及重复性方面对该方法检测效果进行评价.结果该研究设计的引物和探针能扩增皮炎外瓶霉特异性序列.临床分离得到的皮炎外瓶霉在反应中有明显扩增曲线,而甄氏外瓶霉、棘状外瓶霉、烟曲霉、白色念珠菌、新生隐球菌、马内菲青霉等20株菌在CT值≤38范围内均未有扩增;利用基因重组构建的标准品完成了标准曲线的绘制,在1.0×103～1.0×107拷贝数（Cp）内具有良好的线性关系（R2=1.000）,最低可检出量为10Cp/μL.结论成功建立了荧光定量PCR检测皮炎外瓶霉方法,该法特异度强、敏感度高、重复性好,将有助于临床皮炎外瓶霉感染的早期诊断和针对性治疗.

简介：建立了商业化种植的NeWLeaf-YTM转基因马铃薯的筛选检测和鉴定的PCR方法.该方法根据马铃薯自身patatin基因作为内源特异参照基因扩增216bp片段,检查模板DNA提取的质量,避免了假阴性结果;同时扩增FMV35S启动子基因225bp片段和PVY-cp基因161bp片段.PCR反应循环参数是94℃2min;94℃40s,55℃60s,72℃60s,35次循环;之后72℃延伸5min.本实验中的F-primer(PVY01-5′)/R-primer(PVY01-3′)引物是针对商业化种植的NewLeaf-YTM转基因马铃薯PVY-cp抗病毒基因而设计的,具有很强的特异性,可以达到对NeWLeaf-YTM转基因马铃薯鉴定的目的.

简介：目的：建立李痘病毒（PPV）特异、灵敏、快速的实时荧光定量RT-PCR检测方法,用于核果类种苗的健康评测及李痘病毒疫情监测。方法：根据PPV-D株系和PPV-M株系的外被蛋白（CP）基因保守序列,设计特异性引物和TaqMan探针,扩增全长CP基因片段,并将其克隆到pMD18-T载体上,构建质粒标准品,建立PPV的实时荧光定量RT-PCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进行评估。结果：此荧光定量RT-PCR方法对PPV检测呈现高灵敏度和高特异性,与马铃薯Y病毒和马铃薯X病毒无交叉反应,最低检出限可达1.6×10^2拷贝/μL,标准曲线的相关系数为0.99918。结论：建立了李痘病毒的荧光定量RT-PCR检测方法,可望应用于检验检疫部门对李痘病毒的快速检测

简介：建立一种检测HSV2的实时定量PCR,而实时定量PCR检测出HSV2DNA阳性标本有l9例,HSV2的FQPCR定量检测 

简介：为建立食品中副溶血性弧菌(VP)的PCR检测方法,选取tl基因作为靶序列设计一对引物,用该引物对14株从国内食品中分离的副溶血性弧菌(经传统方法验证)和30株非副溶血性弧菌进行PCR扩增,并用此方法对人工污染食品进行检测.扩增片段表现出极好的特异性,对人工污染的冷冻虾仁、沙丁鱼的检出限为10CFU/g,且与传统方法结果吻合.该方法适宜于食品中副溶血性孤菌的检测.

简介：犬细小病毒病感染是由犬细小病毒（cPv）引起犬只死亡的最重要传染病之一，目前诊断该病的方法主要是胶体金快速检测试板法，虽然检测方法较简便快速，但其敏感性较差。通过对NCBI网站GenBank发表的CPV-2基因组序列的分析，选择该病毒VP2基因保守序列设计引物，通过对阳性病料扩增及扩增产物测序，与NCBI发表的相关基因对比，同源性在99．8％-100％，成功建立了特异性、灵敏度高的PCR方法，最低只需2．5PgDNA模板。在对28例可疑CPV病例检测中，本方法检出25例阳性、3例阴性，阳性率为89．28％；胶体金检测板检测出20例阳性、8例阴性，阳性率为71．42％，证实PCR方法比胶体金检测更敏感。

简介：目的探讨生殖支原体在非淋菌性尿道炎(NGU)／粘液脓性宫颈炎(MPC)中的发病情况。方法应用聚合酶链反应对236例STD门诊的非淋菌性尿道炎(NGU)／粘液脓性宫颈炎(MPC)患者泌尿生殖道标本进行了生殖支原体的检测。结果生殖支原体的阳性检出率为17．8％。结论生殖支原体在性病高危人群中有一定发病率，可引起非淋菌性尿道炎(NGU)／粘液脓性寓颈炎(MPC)。