简介：摘要目的探讨氧化应激刺激下心肌细胞释放外泌体对巨噬细胞极化的影响及其机制。方法取H9C2心肌细胞，采用随机数字表法分为0 µmol/L组、100 µmol/L组、200 µmol/L组、300 µmol/L组，分别用相应浓度H2O2处理后，各组使用细胞增殖-毒性检测试剂盒（cell counting kit-8, CCK-8）检测细胞活力，Western blot法检测细胞活化形式胱天蛋白酶-3（cleaved-caspase-3）、B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2, Bcl-2）、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白（B-cell lymphoma-2-associated X protein, Bax）水平变化，流式细胞术检测细胞凋亡情况，根据检测结果选用最适处理浓度进行后续实验。另取H9C2心肌细胞，参考经典的超速离心法，提取正常心肌细胞来源外泌体（normal cardiomyocyte-derived exosomes, NC-exo）及氧化应激心肌细胞来源外泌体（oxidative stress cardiomyocyte-derived exosomes, H-exo），透射电镜观察外泌体形态，Western blot法检测外泌体标志蛋白。激光共聚焦显微镜下观察巨噬细胞对外泌体摄取内化情况。选取正常培养巨噬细胞，按随机数字表法分为对照1组（NC1组）、脂多糖1组（LPS1组）、正常心肌细胞来源外泌体预处理+脂多糖组（LPS+NC-exo组）、氧化应激心肌细胞来源外泌体预处理+脂多糖组（LPS+H-exo组）。LPS1组LPS处理6 h, LPS+NC-exo组、LPS+H-exo组分别加入NC-exo、H-exo预处理24 h再进行LPS处理6 h, NC1组不进行处理。使用Western blot法检测诱导型一氧化碳合酶（inducible nitric oxide synthase, iNOS）、精氨酸酶-1（arginase-1, Arg-1）、CD86、CD206水平，使用实时荧光定量聚合酶链式反应（real time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR）方法检测IL-6、TNF-α、趋化因子-10（chemokine-10, CXCL-10) mRNA水平。采用RT-qPCR方法检测外泌体miRNA表达量。另取巨噬细胞按随机数字表法分为对照2组（NC2组）、脂多糖2组（LPS2组）、过表达阴性对照+脂多糖组（LPS+mimic-NC组）、过表达miR-106b-5p+脂多糖组（LPS+106b-mimic组）。LPS2组LPS处理6 h，LPS+mimic-NC组、LPS+ 106b-mimic组则分别使用转染试剂mimic-NC、106b-mimic转染24 h再进行LPS处理6 h，NC2组不进行处理。检测iNOS、Arg-1、CD86、CD206水平及IL-6、TNF-α、CXCL-10的mRNA表达水平。结果与0 µmol/L组比较，100 µmol/L组、200 µmol/L组、300 µmol/L组凋亡相关蛋白Bax、cleaved-caspase-3水平升高（P<0.05），Bcl-2水平下降（P<0.05），细胞活力下降（P<0.05），细胞凋亡率上升（P<0.05）。经比较，200 µmol/L作为适宜浓度用于后续实验。通过显微镜观察，正常心肌细胞表现为梭形，而200 µmol/L H2O2处理后心肌细胞皱缩变形死亡。透射电镜观察可见提取的纳米颗粒呈现圆形并具有双层膜结构，将荧光标记的外泌体加入巨噬细胞中共同培养24 h，可见大量外泌体能够被巨噬细胞摄取。与NC1组比较，LPS1组、LPS+NC-exo组、LPS+ H-exo组iNOS、CD86蛋白水平升高（P<0.05），Arg-1、CD206蛋白水平下降（P<0.05），IL-6、TNF-α、CXCL-10 mRNA水平升高（P< 0.05）；与LPS1组比较，LPS+H-exo组iNOS、CD86蛋白水平升高（P<0.05），Arg-1、CD206蛋白水平下降（P<0.05），IL-6、TNF-α、CXCL-10 mRNA水平升高（P<0.05），而LPS+NC-exo组与LPS1组差异无统计学意义（P>0.05）。与NC-exo比较，H-exo中miR-106b-5p表达升高（P<0.05）。与NC2组比较，LPS2组、LPS+mimic-NC组、LPS+106b-mimic组iNOS、CD86蛋白水平升高（P< 0.05），Arg-1、CD206蛋白水平下降（P<0.05），IL-6、TNF-α、CXCL-10 mRNA水平升高（P<0.05）；与LPS2组比较，LPS+106b-mimic组iNOS、CD86蛋白水平升高（P<0.05），Arg-1、CD206蛋白水平下降（P<0.05），IL-6、TNF-α、CXCL-10 mRNA水平升高（P< 0.05），而LPS+mimic-NC组与LPS2组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论来源于氧化应激心肌细胞的高表达miR-106b-5p的外泌体促进巨噬细胞发生M1型极化。

简介：摘要目的探讨含溴结合域蛋白4(BRD4)抑制剂对野生型Kras分化型甲状腺癌(DTC)的影响及其机制。方法选取DTC细胞株KrasWT TPC-1，构建基因突变型KrasG12D TPC-1细胞。采用CCK-8法检测BRD4抑制剂JQ-1对KrasWT TPC-1细胞增殖活力的影响。用0.2 μmol/L JQ-1处理KrasWT TPC-1细胞(JQ-1组)，另设阴性对照(NC)组，分别采用Transwell侵袭实验、流式细胞术检测JQ-1对KrasWT TPC-1细胞侵袭和凋亡的影响；检测JQ-1对BRD4、miR-106b-5p、P21表达的影响，以及P21抑制剂UC2288对P21、BRD4表达的影响。将KrasWT TPC-1细胞分为JQ-1+NC-OE组、JQ-1+p21-OE组(过表达p21)及JQ-1+p21-OE+miR-106b-5p mimic组(同时过表达p21和miR-106b-5)，检测各组细胞增殖、侵袭及凋亡情况。将TPC-1细胞分为KrasWT组、KrasWT+JQ-1组、KrasG12D组及KrasG12D+JQ-1组，检测各组细胞增殖、侵袭及凋亡情况。结果JQ-1以剂量和时间依赖方式抑制KrasWT TPC-1细胞的增殖活力。在NC组和JQ-1组中，细胞侵袭数分别为124.67±9.61、82.67±8.02，细胞凋亡率分别为(5.91±0.34)%、(10.33±1.10)%，差异均具有统计学意义(t＝5.812，P＝0.004；t＝6.653，P＝0.003)。JQ-1显著抑制KrasWT TPC-1细胞中BRD4及miR-106b-5p的表达并促进P21的表达。UC2288显著抑制P21表达，但对BRD4表达无显著影响。JQ-1+NC-OE组、JQ-1+p21-OE组及JQ-1+p21-OE+miR-106b-5p mimic组中，KrasWT TPC-1细胞24 h增殖活力分别为0.46±0.03、0.35±0.04、0.44±0.03(F＝8.720，P＝0.017)，JQ-1+p21-OE组较JQ-1+NC-OE组显著降低(P<0.05)；3组细胞侵袭数分别为83.00±9.17、56.67±6.03、79.67±10.07(F＝8.347，P＝0.018)，JQ-1+p21-OE组较JQ-1+NC-OE组显著减少(P＝0.009)；3组细胞凋亡率分别为(10.00±0.49)%、(15.39±1.14)%、(10.32±0.80)%(F＝37.764，P<0.001)，JQ-1+p21-OE组较JQ-1+NC-OE组显著增加(P<0.001)；JQ-1+p21-OE+miR-106b-5p mimic组与JQ-1+NC-OE相比，细胞增殖活力、侵袭数及凋亡率差异均无统计学意义(均P>0.05)。在KrasWT组、KrasWT+JQ-1组、KrasG12D组及KrasG12D+JQ-1组中，24 h细胞增殖活力分别为0.50±0.05、0.39±0.04、0.68±0.08、0.64±0.05(F＝17.776，P<0.001)，与KrasWT组相比，KrasWT+JQ-1组增殖活力显著降低，KrasG12D组增殖活力显著升高(均P<0.05)；各组细胞侵袭数分别为129.33±11.50、86.00±9.54、161.67±13.01、146.33±13.20(F＝22.598，P<0.001)，与KrasWT组相比，KrasWT+JQ-1组侵袭数显著降低(P＝0.002)，KrasG12D组侵袭数显著增加(P＝0.010)；各组细胞凋亡率分别为(6.17±0.50)%、(10.42±0.73)%、(3.43±0.47)%、(3.41±0.32)%(F＝119.170，P<0.001)，与KrasWT组相比，KrasWT+JQ-1组中细胞凋亡率显著增加(P<0.001)，KrasG12D组凋亡率显著降低(P<0.001)；KrasG12D+JQ-1组细胞增殖活力、侵袭数及凋亡率与KrasG12D组相比差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论BRD4抑制剂能够通过调节BRD4/miR-106b-5p/P21分子轴，特异性抑制Kras野生型DTC的发展，而对Kras突变型DTC肿瘤细胞的增殖、侵袭和凋亡无显著影响。

简介：摘要目的探讨miR-196a-5p、miR-105-5p在良、恶性肺结节患者血清中的表达水平差异及其在恶性肺结节中的诊断价值。方法分析癌症基因组图谱(TCGA)数据库中肺腺癌、肺鳞状细胞癌癌组织以及癌旁组织miRNA表达水平，筛选癌组织与癌旁组织相比表达水平差异明显的miRNA作为目的miRNA。选取2019年6月至2020年7月在山东省潍坊市人民医院就诊的72例肺结节患者。使用qRT-PCR法检测肺结节患者血清中目的miRNA的表达水平，使用受试者工作特征(ROC)曲线比较目的miRNA与肿瘤标志物Cyfra21-1、NSE、CEA在恶性肺结节中的诊断价值。结果经筛选确定的目的miRNA为miR-196a-5p、miR-105-5p。纳入良性肺结节组患者26例，恶性肺结节组患者46例。良、恶性结节组血清miR-196a-5p水平[M(P25，P75)]分别为0.63(0.09，2.15)、1.93(0.93，4.97)，miR-105-5p水平分别为2.03(0.54，7.95)、10.65(5.94，18.39)。与良性肺结节组相比，恶性肺结节组血清miR-196a-5p、miR-105-5p水平升高，差异具有统计学意义(Z＝-3.083，P＝0.002；Z＝-4.092，P<0.001)。良、恶性结节组血清Cyfra21-1水平分别为2.48(1.84，3.78)、2.20(1.47，3.32)μg/L；NSE水平分别为15.58(12.45，18.95)、14.43(12.07，17.87)μg/L；CEA水平分别为1.16(0.55，2.11)、1.17(0.61，1.68)μg/L。良、恶性肺结节组血清Cyfra21-1、NSE、CEA水平差异均不具有统计学意义(Z＝-1.161，P＝0.246；Z＝-0.305，P＝0.761；Z＝-0.271，P＝0.786)。联合miR-196a-5p、miR-105-5p在诊断恶性肺结节中的曲线下面积(AUC)为0.762，敏感性为89.1%，特异性为61.5%，高于联合肿瘤标志物Cyfra21-1、NSE、CEA在诊断恶性肺结节中的价值(AUC为0.591，敏感性为58.7%，特异性为64.5%)。结论联合血清miR-196a-5p、miR-105-5p可辅助诊断恶性肺结节，具有较高的诊断价值。

简介：摘要目的通过采集肿瘤患者放疗前后外周血，探讨照射对人外周血血清miR-150-5p、miR-23a-3p表达的影响，以期为寻找辐射生物标志物提供科学依据。方法以2021年10月至2022年3月63例行放疗的肿瘤患者为研究对象，采用实时荧光定量PCR(qPCR)方法，检测患者放疗前后外周血血清miR-150-5p与miR-23a-3p的相对表达水平。比较两种miRNAs放疗前后在患者外周血血清中的差异表达变化，分析其与肿瘤类型等因素的关系。结果放疗后，患者外周血血清miR-150-5p与miR-23a-3p的相对表达量明显低于放疗前(t＝4.97，Z＝－2.77，P<0.05)。不同的肿瘤类型中，乳腺癌、食管癌和其他消化道肿瘤患者放疗后miR-150-5p的相对表达量降低(t＝3.47、2.47、2.87，P<0.05)，消化道肿瘤患者放疗后miR-23a-3p相对表达量下降(Z＝－1.99，P<0.05)。在放疗前、后miR-150-5p的表达改变均不受性别、年龄、化疗和肿瘤类型等因素影响(P>0.05)，而miR-23a-3p的表达改变在放疗后受性别、年龄和化疗等因素影响(t＝2.04、－3.34、－2.29，P<0.05)。结论放疗可影响肿瘤患者血清中miR-150-5p的表达，其有作为辐射生物学标志物的潜力。

简介：

简介：摘要目的探讨糖尿病肾病(DN)患者的血清miR-135-5p及miR-337-5p表达及其临床意义。方法选取2018年1月至2020年12月本院收治的105例2型DN患者和60例体检正常者(对照组)。根据尿白蛋白排泄率(UAER)将105例2型DN患者分为早期DN组57例(UAER为20~200 μg/min)和临床期DN组48例(UAER>200 μg/min)。比较各组血清miR-135-5p及miR-337-5p表达水平，应用多因素logistic回归分析影响DN发生的危险因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-135-5p及miR-337-5p表达水平在诊断DN中的价值。结果DN组的血清miR-135-5p及miR-337-5p表达水平均明显高于对照组(均P<0.001)。临床期DN组的血清miR-135-5p及miR-337-5p表达水平均明显高于早期DN组(均P<0.001)。多因素logistic回归分析显示，血清miR-135-5p及miR-337-5p表达水平升高是影响DN发生的独立危险因素(均P<0.001)。ROC曲线分析显示，miR-135-5p及miR-337-5p两项联合诊断DN的曲线下面积最大(AUC＝0.948，95%CI：0.887~0.995)，其灵敏度为97.2%，特异度为85.0%。结论DN患者的血清miR-135-5p及miR-337-5p表达水平明显升高，两项联合检测对DN诊断具有较好的价值。

简介：摘要MicroRNA(miRNA)通过抑制靶基因的表达而促进或抑制细胞的生理进程，对细胞生长、分化、运动和凋亡加以调控。miR-146b-5p(miR-146b)是miR-146家族成员之一，是固有免疫和适应性免疫中的关键调控因子，在肿瘤的发生发展中同样发挥至关重要的作用。miR-146b在不同肿瘤的进程中发挥促癌或者抑癌等截然不同的作用，甚至在相同肿瘤中也可表现出明显的异质性作用，文章将对miR-146b在恶性肿瘤中作用的研究进展进行综述和讨论，为探究miR-146b对恶行肿瘤的确切作用提供新的研究思路，同时也为进一步研究miRNAs对肿瘤的调控机制提供理论基础。

简介：【摘要】本研究首先分析了miR-15b-5p在胃癌细胞中的表达、HDGF在胃癌细胞中的表达，然后探讨了miR-15b-5p对胃癌细胞增殖的抑制、HDGF对胃癌细胞增殖的抑制、miR-15b-5p靶向HDGF对胃癌细胞增殖的抑制。

简介：摘要目的研究miR-106a-5p对鼻咽癌细胞SUNE2增殖和迁移的影响。方法将体外培养的鼻咽癌细胞SUNE2分成对照组（细胞未做任何处理）、Anti-NC组（转染阴性对照抑制剂）、Anti-miR-106a-5p组（转染miR-106a-5p抑制剂）、后期实验另设Anti-miR-106a-5p-inhibitor+si-NC组（转染miR-106a-5p抑制剂、siRNA阴性对照）、Anti-miR-106a-5p-inhibitor+si-PTEN组（转染miR-106a-5p抑制剂、PTEN siRNA），采用Realtime PCR测定miR-106a-5p表达，MTT法检测增殖，Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力变化，用Western blot方法测定vimentin、E-cadherin蛋白表达。在线靶基因预测软件预测miR-106a-5p的靶基因可能为PTEN，双荧光素酶报告系统鉴定miR-106a-5p和PTEN的靶向关系。两组间比较用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。结果与正常鼻咽上皮细胞NP69比较，鼻咽癌细胞CNE-2、HK1、SUNE2中miR-106a-5p水平（1.00±0.11比1.84±0.13、2.19±0.14、2.87±0.25）升高，差异具有统计学意义（P < 0.05）。与对照组、Anti-NC组比较，Anti-miR-106a-5p组鼻咽癌细胞miR-106a-5p水平（1.00±0.10、0.99±0.12比0.76±0.08）降低，OD值（0.56±0.05、0.57±0.04比0.32±0.02），细胞侵袭数[（128.47±11.65）个、（129.84±10.93）个比（85.12±6.75）个]，迁移数[（182.51±14.81）个、（180.68±17.64）个比（122.01±11.62）个]，vimentin蛋白表达水平（0.84±0.09、0.82±0.07比0.30±0.05）降低，E-cadherin蛋白表达水平（0.29±0.04、0.28±0.05比0.76±0.08）升高，差异具有统计学意义（P均< 0.05）。与Anti-miR-106a-inhibitor+si-NC组比较，Anti-miR-106a-inhibitor+si-PTEN组细胞OD值（0.33±0.03比0.52±0.05）、侵袭数[（84.16±5.91）个比（105.79±8.63）个]、迁移数[（118.42±10.25）个比（164.28±12.05）个]、vimentin蛋白表达水平（0.34±0.06比0.68±0.05）均升高，E-cadherin蛋白表达水平（0.72±0.06比0.29±0.05）降低，差异具有统计学意义（P均< 0.05）。结论miR-106a-5p可通过靶向调控PTEN抑制鼻咽癌细胞SUNE2增殖和迁移潜能。

简介：摘要目的阐明miR-106b在结直肠癌细胞放射敏感性中的作用及机制。方法构建稳定过表达和干扰miR-106b结直肠癌细胞系，通过免疫荧光和平板克隆实验探讨miR-106b对结直肠癌细胞放射敏感性的影响；Western blot检测Caspase-3和γ-H2AX的表达；生物信息学预测miR-106b下游调控的靶基因，双荧光素酶报告系统、荧光定量PCR及Western blot进一步验证。在稳定过表达miR-106b的结直肠癌细胞系中转染pCDNA3.0-PTEN，探讨细胞放射敏感性变化，明确miR-106b是否通过靶向调控PTEN增加结直肠癌细胞放射抵抗。结果在结直肠癌细胞系过表达miR-106b，经过同等条件的照射处理后，与对照组相比，过表达miR-106b组细胞存活分数升高，放射抵抗增强(P<0.05)，Caspase-3及γ-H2AX表达降低。在稳定过表达miR-106b的细胞中上调PTEN后能逆转miR-106b引起的放射抵抗。结论miR-106b通过靶向抑制PTEN从而诱导结直肠癌细胞放射抵抗，预示着miR-106b-PTEN位点可能为临床提高结直肠癌放疗效果寻找相关靶点提供理论依据。

简介：摘要目的探讨血浆微小RNA-21-3p（miR-21-3p）和miR-551-5p表达水平对急性胰腺炎（AP）的诊断及预后预测的价值。方法采用前瞻性观察性研究，选择2017年1月1日至2019年12月31日海南省第三人民医院收治的AP患者作为研究对象。根据病情严重程度将患者分为轻症急性胰腺炎（MAP）组、中度重症急性胰腺炎（MSAP）组和重症急性胰腺炎（SAP）组，均于入院次日采集空腹静脉血，采用实时定量聚合酶链反应（PCR）检测血浆miR-21-3p及miR-551-5p表达水平。以患者康复出院或死亡作为研究终点。另外以同期50例健康体检者作为健康对照组。用受试者工作特征曲线（ROC）分析血浆miR-21-3p和miR-551-5p表达水平对SAP诊断及预后评估的价值。采用Pearson法分析SAP患者血浆miR-21-3p与miR-551-5p表达水平的相关性。结果共入选164例AP患者，其中MAP 72例，MSAP 47例，SAP 45例。SAP患者中存活27例，死亡18例；MAP组和MSAP组无死亡病例。AP患者血浆miR-21-3p、miR-551-5p表达水平均明显高于健康对照组〔miR-21-3p（2-ΔΔCt）：2.17±0.90比0.65±0.12，miR-551-5p（2-ΔΔCt）：1.80±0.73比0.42±0.08，均P<0.01〕；且随病情程度加重，患者血浆miR-21-3p、miR-551-5p表达水平逐渐升高（F值分别为11.635、10.204，均P<0.01），SAP组血浆miR-21-3p、miR-551-5p表达水平明显高于MSAP组和MAP组〔miR-21-3p（2-ΔΔCt）：3.16±1.08比1.85±0.71、1.70±0.64，miR-551-5p（2-ΔΔCt）：2.63±0.95比1.52±0.46、1.36±0.40，均P<0.01〕。ROC曲线分析显示，miR-21-3p与miR-551-5p联合诊断SAP的ROC曲线下面积（AUC）和95%可信区间（95%CI）明显高于miR-21-3p或miR-551-5p单项指标〔0.898（0.841～0.960）比0.820（0.763～0.882）、0.806（0.748～0.867），Z1＝4.480、Z2＝4.916，均P<0.05〕，其敏感度为90.7%，特异度为85.0%。SAP死亡组患者血浆miR-21-3p、miR-551-5p表达水平均明显高于存活组〔miR-21-3p（2-ΔΔCt）：3.75±1.17比2.66±0.87，miR-551-5p（2-ΔΔCt）：3.17±1.04比2.24±0.83，均P<0.01〕。ROC曲线分析显示，miR-21-3p与miR-551-5p联合预测SAP患者死亡的AUC和95%CI明显高于miR-21-3p或miR-551-5p单项指标〔0.933（0.875～0.996）比0.856（0.794～0.917）、0.816（0.759～0.874），Z1＝4.395、Z2＝5.520，均P<0.05〕，其敏感度为95.2%，特异度为87.5%。相关性分析显示，SAP患者血浆miR-21-3p与miR-551-5p表达水平呈显著正相关（r＝0.827，P<0.001）。结论血浆miR-21-3p和miR-551-5p表达水平升高与AP患者病情严重程度呈正相关，二者联合检测对SAP诊断和预后评估具有较好的价值。

简介：摘要目的探讨AP患者血清miR-148a-3p和miR-551b-5p的表达水平及其临床价值。方法选取2017年1月至2020年9月间儋州市人民医院收治的152例AP患者的临床资料，根据病情严重程度将患者分为MAP组(70例)、MSAP组(40例)和SAP组(42例)，SAP组又根据患者预后情况分成生存组(25例)和死亡组(17例)。另选取50例体检健康者作为对照组。于患者发病当天采集空腹静脉血，采用实时定量PCR法检测各组血清miR-148a-3p和miR-551b-5p表达水平。绘制受试者工作特征曲线(ROC)，计算曲线下面积(AUC)，分析血清miR-148a-3p和miR-551b-5p表达水平对SAP预后判断的价值。采用Pearson法分析SAP患者血清miR-148a-3p与miR-551b-5p表达水平的相关性。结果AP组患者血清miR-148a-3p和miR-551b-5p表达水平均明显高于对照组(3.18±1.27比0.96±0.28，1.94±0.85比0.51±0.12，P值均<0.001)。SAP组血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表达水平均明显高于MSAP组、MAP组(4.36±1.70比2.84±1.10、2.50±0.92，2.80±1.04比1.68±0.53、1.42±0.45，P值均<0.001)。死亡组血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表达水平均明显高于生存组(5.30±1.95比3.47±1.40，3.62±1.37比2.08±0.91，P值均<0.001)。ROC曲线分析显示，miR-148a-3p与miR-551b-5联合判断SAP预后的AUC值明显高于miR-148a-3p、miR-551b-5p单项指标[0.943(95%CI0.886～0.997)比0.860(95%CI0.797～0.924)、0.822(95%CI0.765～0.880)]，其灵敏度为98.3%，特异度为84.6%。相关分析显示，SAP患者血清miR-148a-3p与miR-551b-5p表达水平呈正相关(r＝0.835，P<0.001)。结论AP患者血清miR-148a-3p及miR-551b-5p表达水平明显升高，两者联合检测对判断SAP患者预后具有较好的价值。

简介：摘要目的探讨长链非编码RNA（lncRNA）CDKN2B-AS1靶向miR-98-5p对肺癌A549细胞增殖、侵袭的影响。方法体外培养肺癌A549细胞，分为对照组、pcDNA组（转染pcDNA）、CDKN2B-AS1组（转染pcDNA CDKN2B-AS1）和双转染组（转染pcDNA CDKN2B-AS1、pcDNA miR-98-5p）。检测A549细胞中CD-KN2B-AS1、miR-98-5p表达及PCNA、MMP-9蛋白表达，检测A549细胞活性、克隆数、克隆形成率、侵袭细胞数。结果与pcDNA组相比，CDKN2B-AS1组A549细胞中CDKN2B-AS1表达水平[（2.14±0.14）vs （1.03±0.10）]、各时间点的细胞OD值、细胞克隆数[（314.60±18.13）个比（220.08±12.46）个]、克隆形成率[（85.81±3.06）% vs （60.03±2.85）%]、侵袭细胞数[（233.30±18.98）个vs （140.84±12.30）个]及细胞中PCNA[（0.78±0.08）vs （0.48±0.07）]、MMP-9蛋白表达[（0.75±0.06）vs （0.38±0.06）]水平显著升高（均P<0.05），miR-98-5p表达水平[（0.23±0.03）vs （0.99±0.09）]显著降低（P<0.05）；与CDKN2B-AS1组相比，双转染组A549细胞中CD-KN2B-AS1表达水平差异无统计学意义（P>0.05），miR-98-5p表达水平显著升高（P<0.05），各时间点的细胞OD值、细胞克隆数、克隆形成率、侵袭细胞数及细胞中PCNA、MMP-9蛋白表达水平均显著降低（P<0.05）。结论lncRNA CDKN2B-AS1通过靶向抑制miR-98-5p表达对肺癌A549细胞增殖、侵袭具有促进作用。

简介：摘要目的阐释miR-340-5p对HBV复制的影响及其调控机制，并为HBV感染后的生物标志物和治疗用药提供新的策略。方法在肝癌细胞HepG2.2.15中转染miR-340-5p的模拟物(340-mimic)和抑制剂(340-inhibitor)及其对应的阴性对照。通过ELISA检测上清中HBeAg和HBsAg的水平变化。同时收取细胞，提取RNA和壳体化DNA，并采用qRT-PCR分别检测HBV总RNA和pgRNA的水平及HBV DNA拷贝数的变化；分子克隆构建STAT3的过表达质粒pEF-flag-stat3，通过qRT-PCR和western blot对STAT3的mRNA和蛋白表达加以验证；此外，共转染miR-340-5p的模拟物和pEF-flag-stat3后通过northern blot，qPCR和ELISA对HBV的复制情况进行检测。结果miR-340-5p过表达后，HBV转录生成总RNA和逆转录模板pgRNA的水平明显下降至对照组的45.89%、61.46% (P＝0.001、P＝0.003)；壳体化DNA的合成及HBeAg和HBsAg的分泌水平分别受到72.46%、18.27%、14.42%的抑制( P<0. 001、P<0. 001、P＝0.005)；干扰内源性miR-340-5p则与对照组相比分别增加44.02%、45.56%、22.66%、11.85%、14.04%(P＝0. 009、P＝0. 01、P＝0. 011、P＝0.013、P＝0.027)。相比之下在此基础上过表达信号转导和转录激活因子(STAT)3能够减弱被miR-340-5p抑制的HBV复制。进一步的实验结果也表明STAT3对HBV的复制有促进作用。结论miR-340-5p能够通过靶向作用于STAT3抑制其转录和翻译进而抑制HBV的复制。

简介：Themechanismofhealtheffectscausedbyorganohalogenpollutants,e.g.,toxinsfromelectronicwaste(e-waste),ispoorlyunderstood.WesupposedthatmicroRNAs(miRNAs),animportantpost-transcriptionalregulator,couldplayaroleinthisprocess.Inthisstudy,fastingperipheralbloodsampleswerecollectedfromresidentslivingatane-wastesiteinnorthernChinaandanearbyreferencepopulation.Concentrationsofe-wasterelatedorganohalogenpollutantsinplasmafromtheexposuregroupwerehigherthanthecorrespondingmeasurementinthereferencegroup.Correspondingly,sixtymiRNAsinplasmashowed>2-foldchangebetweenthetwogroupsinmicroarrayanalysis.Amongthem,miR-125a-5pwasconfirmedtobeupregulatedbyqRT-PCRanditsvalidatedtargetswereenrichedinresponsestoxenobioticsandcancerrelatedpathways.Furthermore,significantpositivecorrelationswerefoundbetweenlevelsofmiR-125a-5pinplasmaandreactiveoxygenspecies(ROS)inpolymorphonuclearneutrophilleukocytes(P<0.05).Theseevidencessuggestedoxidativestressmightbeanintermediatebetweene-wasterelatedPOPsexposureandalterationofplasmamiRNA.

简介：摘要目的通过对已验证的hsa-miR-204-5p靶基因的提取和功能富集分析，为进一步探究其生物学功能及调控机制提供数据支持和理论指导。方法应用mirTarBase和TarBase数据库提取已被验证过的hsa-miR-204-5p靶基因，取其交集，将集合基因分别进行GO富集分析和Pathway富集分析。结果miR-204-5p在多物种间具有较高保守性。在MirTarBase和TarBase数据库中分别得到398个和600个靶基因，重叠获得85个共有靶基因，其中同时被qPCR、Westernblot、Reporterassay进行过检测的靶基因为15个。GO分析得到13个基因的生物进程信息、12个基因的细胞组分信息、12个基因的分子功能信息。Pathway分析显示靶基因富集于线粒体通路。结论hsa-miR-204-5p的靶基因主要富集于凋亡相关进程及通路，与多种肿瘤生物学进程密切相关。

简介：目的：构建miR-15a-5p和miR-16-5p的荧光素酶报告载体,利用此载体分析并验证miR-15a-5p和miR-16-5p与CCND1基因3＇-UTR区域的确切结合位点,探讨miR-15a-5p和miR-16-5p与CCND1基因的相互作用关系。方法：通过Pubmed和miRBase数据库分别寻找到CCND1基因3＇-UTR区域碱基序列和miR-15a-5p、miR-16-5p的碱基序列。找出理论结合位点后,构建荧光素酶报告载体,并用荧光素酶报告基因方法验证miR-15a-5p和miR-16-5p与CCND1基因之间的作用关系。结果：通过基因测序表明,本实验成功构建了CCND1a/Ma和CCND1b/Mb荧光素酶报告基因表达载体。将上述载体应用于荧光素酶报告基因实验,结果发现CCND1b组的荧光素酶表达强度显著降低,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：miR-15a-5p和miR-16-5p与CCND1基因的3＇-UTR区域存在结合位点,其具体结合位置在CCND1b区。这在理论上意味着miR-15a-5p和miR-16-5p可以抑制CCND1基因的表达。

简介：摘要目的探讨miR-187-5p通过RANKL/NFκB信号通路对骨质疏松症中破骨细胞活性的影响及机制分析。方法使用小鼠巨噬细胞264.7细胞株（RAW246.7），设置正常组（con）、核因子κB配体的受体激活子（receptor activator of nuclear factor-κBligand，RANKL）诱导的骨质疏松症组（RANKL-induced OP）、阴性对照（mimic negative control，mimic NC）、OP+miR-187-5p模拟物（OP+miR-187-5p mimic），通过细胞计数试剂盒（the cell counting kit 8，CCK8）检测破骨细胞的增殖水平，RT-qPCR检测TRAPmRNA、miR-187-5p表达水平，免疫印迹检测p65和TNFα蛋白表达。最后，通过双荧光素酶报告基因（dual luciferase reporter assays）检测miR-187-5p和p65间的相互作用。结果RAW264.7细胞转染miR-187-5p后，OP组的细胞增殖水平和TRAP mRNA水平显著高于con组（P=0.008、0.017），OP+miR-187-5p mimic组细胞增殖水平和TRAP mRNA水平显著低于OP+miR-187-5p NC组（P=0.023、0.037）。而miR-187-5p在OP组显著低于con组（P=0.031），转染miR-187-5p mimic后升高其表达水平（P=0.041）。此外，OP组的p65和TNFα蛋白水平明显高于con组（P=0.034; P=0.024），OP+miR-187-5p mimic组的p65和TNFα蛋白水平显著低于OP+miR-187-5p NC组（P=0.028；P=0.036）。同时OP组的p65显著高于con组（P=0.039），OP+miR-187-5p mimic组的p65基因水平明显高于OP+miR-187-5p NC（P=0.025）。双荧光素酶报告分析，miR-187-5p与p65间存在靶向关系。结论miR-187-5p通过抑制NFκB信号通路抑制破骨细胞的活性。

简介：摘要目的探讨miR-20a-5p、赖氨酸脱甲基酶6B(KDM6B)在骨肉瘤组织中的表达及miR-20a-5p靶向KDM6B对骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭及肿瘤生长的影响。方法收集2017年1月至2019年3月在中国医科大学附属第一医院接受治疗的20例骨肉瘤患者的临床病理标本和癌旁组织，采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测组织中miR-20a-5p及KDM6B mRNA表达水平。将骨肉瘤MG63细胞分为空白对照组、mimic NC组、miR-20a-5p mimic组和NC＋空载体组、miR-20a-5p＋空载体组、miR-20a-5p＋KDM6B组，采用qRT-PCR检测各组细胞miR-20a-5p和KDM6B mRNA表达水平，蛋白质印迹法检测KDM6B蛋白的表达水平，CCK-8法、细胞划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。按照随机数字表法将裸鼠分为NC＋空载体组、miR-20a-5p＋空载体组和miR-20a-5p＋KDM6B组，每组各5只，采用裸鼠移植瘤模型检测肿瘤细胞的生长能力。结果骨肉瘤组织中miR-20a-5p mRNA相对表达量为0.55±0.27，癌旁组织为1.22±0.28，差异具有统计学意义(t＝7.701，P<0.001)；骨肉瘤组织中KDM6B mRNA相对表达量为1.66±0.19，癌旁组织为1.00±0.15，差异具有统计学意义(t＝12.219，P<0.001)。转染miR-20a-5p后，KDM6B mRNA和蛋白表达水平均随miR-20a-5p表达水平的升高而降低。转染miR-20a-5p 48 h后，空白对照组、mimic NC组、miR-20a-5p mimic组细胞增殖能力分别为0.83±0.04、0.81±0.03、0.52±0.01(F＝89.655，P<0.001)，与空白对照组、mimic NC组相比，miR-20a-5p mimic组均受到明显抑制(均P<0.001)；NC＋空载体组、miR-20a-5p＋空载体组、miR-20a-5p＋KDM6B组细胞增殖能力分别为0.83±0.05、0.52±0.01、0.67±0.05(F＝43.919，P<0.001)，与NC＋空载体组相比，miR-20a-5p＋空载体组受到明显抑制(P<0.001)，与miR-20a-5p＋空载体组相比，miR-20a-5p＋KDM6B组显著增强(P<0.001)。空白对照组、mimic NC组、miR-20a-5p mimic组划痕愈合率分别为(32.51±2.73)%、(30.26±3.22)%、(13.52±1.77)%(F＝46.314，P<0.001)，与空白对照组、mimic NC组相比，miR-20a-5p mimic组均显著降低(均P<0.001)；NC＋空载体组、miR-20a-5p＋空载体组、miR-20a-5p＋KDM6B组划痕愈合率分别为(31.34±3.11)%、(12.15±1.64)%、(28.93±2.89)%(F＝47.511，P<0.001)，与NC＋空载体组相比，miR-20a-5p＋空载体组显著降低(P<0.001)，与miR-20a-5p＋空载体组相比，miR-20a-5p＋KDM6B组显著增强(P＝0.001)。空白对照组、mimic NC组、miR-20a-5p mimic组穿膜细胞数分别为114±16、108±11和42±6(F＝36.282，P<0.001)，与空白对照组、mimic NC组相比，miR-20a-5p mimic组均显著减少(均P<0.001)；NC＋空载体组、miR-20a-5p＋空载体组、miR-20a-5p＋KDM6B组穿膜细胞数分别为143±11、39±4、139±12(F＝112.120，P<0.001)，与NC＋空载体组相比，miR-20a-5p＋空载体组显著减少(P<0.001)，与miR-20a-5p＋空载体组相比，miR-20a-5p＋KDM6B组显著增多(P<0.001)。NC＋空载体组、miR-20a-5p＋空载体组、miR-20a-5p＋KDM6B组小鼠第21天肿瘤体积分别为(1 667.50±250.40)mm3、(129.20±21.00)mm3、(775.41±77.51)mm3，差异具有统计学意义(F＝77.651，P<0.001)；3组小鼠肿瘤重量分别为(1.35±0.18)g、(0.12±0.01)g、(0.61±0.03)g，差异具有统计学意义(F＝104.191，P<0.001)。结论miR-20a-5p在骨肉瘤组织中表达显著下降，KDM6B在骨肉瘤组织中表达显著升高，过表达miR-20a-5p可能通过靶向降低KDM6B的表达来抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移、侵袭及肿瘤生长能力。

简介：魔法记忆“魔力音标”进入辅音音标的学习啦！本期给大家介绍一对爆破辅音——/p/＆/b/。发这两个音时，先将双唇轻轻闭合，再将气流由口腔突破双唇而出。