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  • 简介:摘要单细胞蛋白组学分析能够对细胞异质性进行深层次研究,进一步推动精准医疗和肿瘤研究等领域发展。近年来,基于质谱的蛋白组学取得重大进展,然而在单细胞水平进行蛋白组学分析仍然面临着灵敏度挑战。目前液相色谱-串联质谱已成为蛋白组学主要分析方法,由于其具有高灵敏度,高通量,高稳定性等特点,在单细胞领域得以广泛推广。近几年具有代表性的单细胞蛋白组学方法,根据样品处理方式的不同,可以分为单管技术、微流控平台、集合处理平台三类。不同的数据采集和分析方法各有优劣。单细胞蛋白组学目前还停留在实验室研究,若能早日在临床应用,必将推动精准医疗和肿瘤学研究进步发展。

  • 标签: 液相色谱-串联质谱 单细胞 蛋白质组学 样品制备 微流控
  • 简介:摘要目的建立丹参作用后人肾小管上皮细胞蛋白组双向电泳分离体系,提高其分辨率和重复性。方法丹参作用于人肾小管上皮细胞,提取全蛋白,按标准条件对蛋白进行双向电泳分离,并对各个关键因素进行了优化。结果最终选择的裂解液配方是1%TBP,4%CHAPS,0.2%Bio-Lyte,40mmol/LTris,8mol/L尿素,2mol/L硫脲;使用pH4~7的IPG胶条,电泳参数根据Bio-Rad公司的预设方案进行调整;改良硝酸银法进行蛋白斑点染色。从而获得了满意的蛋白组双向电泳图谱。结论成功建立了丹参作用后人肾小管上皮细胞蛋白组双向电泳分离体系,具有较高的分辨率和重复性,为进一步较为系统、全面、准确的评价丹参及其复方制剂的作用机制和药效提供方法学基础。

  • 标签: 双向电泳 蛋白质组 丹参 人肾小管上皮细胞
  • 简介:目的:比较不同产地及生炒酸枣仁的蛋白电泳结果,分析它们之间的共性和差异。方法:本实验采用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)的技术对40个不同酸枣仁样品进行分析评价。结果:根据电泳指纹图谱整理分析的数据得到对酸枣仁的初步聚类分析结果。结论:聚丙烯酰胺凝胶电泳可以大致定性区别不同产地的酸枣仁样品。

  • 标签: 酸枣仁 蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳 聚类分析
  • 简介:摘要体外受精(IVF)是不孕不育疾病的常规治疗方法,但存在着妊娠成功率低以及相应不良妊娠结局问题。在后基因时代,基于蛋白组学的人类卵泡液研究可提供有关IVF过程各个步骤的实质性信息,并有助于预测或改善IVF妊娠结局。通过检索PubMed、Scopus、Web of Science数据库,本文回顾了基于人类卵泡液蛋白组学的IVF妊娠结局相关研究的最新进展,旨在总结可用于优化IVF结局的潜在标志物的同时提供IVF失败机制见解,以促进生殖医学的基础研究,进而加速临床转化。

  • 标签: 受精,体外 卵泡液 蛋白质组学 不良妊娠结局
  • 简介:胶质瘤是成人颅内最常见的恶性肿瘤。本研究探讨人胶质瘤细胞SWO-38两亚株(SWOZ1和SWOZ2)异质性的蛋白分子机制。方法:采用Westernblot法检测SWO-38及其两亚株中鼠双微粒体基因-2(Murinedoubleminute-2,MDM2)的表达情况;应用免疫共沉淀技术检测两亚株中MDM2相关蛋白的表达情况。结果:在SWO-38及其两亚株中均能检测到MDM2的表达,在其免疫共沉淀物中,Mr37000处有一蛋白条带在SWOZ2中比在SWOZ1中明显深染。结论:人胶质瘤细胞SWO-38的两亚株,在MDM2传导通路中于Mr约37000处的某蛋白表达量不同,而此差异蛋白可能与胶质瘤异质性的产生密切相关。

  • 标签: 胶质瘤 异质性 MDM2
  • 简介:本研究通过对急性髓系白血病(AML)与急性淋巴系白血病(ALL)细胞比较蛋白组分析,寻找亚型特异性的蛋白表达谱。应用双向电泳分别分离AML不同亚型(M1、M2、M3)、ALL患者骨髓白血病细胞蛋白,利用PDQuest7.4软件分析双向电泳图谱差异蛋白点,基质辅助的激光解析飞行时间质谱和生物信息学鉴定差异蛋白。结果显示:经过电泳图谱分析得到21个差异蛋白点,质谱鉴定提示15种蛋白有统计学意义。在AML中高表达的蛋白包括髓过氧化物酶(MPO)、硫氧还蛋白依赖的过氧化物还原酶(PRDX3),钙网蛋白(CALR)、烯酰辅酶A水合酶ECH1等7种,在ALL中高表达的蛋白包括ARHGDIB、肌动蛋白抑制蛋白1(PFN1)、肌动蛋白(ACTG1)等8种。结论:AML与ALL细胞存在差异蛋白表达谱,这将有助于发现早期诊断的分子标志物及特异性治疗靶标。

  • 标签: 急性髓系白血病 急性淋巴系白血病 蛋白质组
  • 简介:建立了^18O稳定同位素标记方法,用于复杂体系蛋白相对定量分析。对影响蛋白标记稳定性的实验条件进行了比较和优化。结果表明,采用酶切后标记的方法,酶切肽段在胰酶催化下,在pH5.0的kHPO4/KH2PO4缓冲体系中,37℃^18O标记反应16h,绝大部分肽段即可达到100%的标记效率。对多个^16O/^18O成对肽段蜂强度的动态范围及定量准确度进行了考察。

  • 标签: 蛋白质组 同位素标记 优化 相对定量分析 KH2PO4 稳定同位素
  • 简介:摘要高场液相核磁共振技术发展迅猛,已经成为了解析高分辨率蛋白结构的主要手段之一。高场液相核磁共振技术的发展与蛋白标记技术、核磁脉冲技术及谱仪硬件技术等密切相关,而液相核磁共振技术已经突破了蛋白分子量的限制,甚至可以对几万或几十万分子量的蛋白进行结构和动力学分析。近年来,关于蛋白动力学研究一直是蛋白研究领域的热点话题,各项关于动力学研究的技术和理念也在不断地创新和发展中,液相核磁共振技术是目前唯一能够应用于蛋白多个位点,并同时进行动力学研究的手段。本文主要阐述顺磁弛豫增强核磁新技术对蛋白溶液动力学的研究进展,报道如下。

  • 标签: 顺磁弛豫增强 核磁共振 蛋白质动态 蛋白质结构
  • 简介:摘要结核病的蛋白组学研究是当前的热点,蛋白组学分析在寻找新的结核病诊断标志物、筛选药物靶点、评估新疫苗及了解疾病发生机制方面具有广阔的前景。本文旨在综述蛋白组学在结核病诊断标志物筛选中的研究进展,重点介绍蛋白组学策略及蛋白组学技术在活动性结核病、结核分枝杆菌潜伏感染、耐药结核病和儿童结核病诊断标志物筛选中的作用,探讨生物标志物转化在临床应用方面的潜力和挑战。

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  • 简介:【摘要】目的:考察不同厂家麦芽糖对静注人免疫球蛋白(pH4)产品质量的影响。方法:使用两个厂家麦芽糖生产静注人免疫球蛋白(pH4)分别在25±2℃和5±3℃保存0个月、1个月、2个月、3个月、6个月取样检测,进行质量可比性研究,研究的质量指标主要包括外观、可见异物检查、渗透压摩尔浓度、pH值、蛋白含量、纯度、麦芽糖含量、激肽释放酶原激活剂(PKA)、无菌检查、热原检查等。结果:两个厂家麦芽糖生产的静注人免疫球蛋白(pH4)各项指标均合格,A、B厂家麦芽糖生产静注人免疫球蛋白(pH4)产品在25±2℃和5±3℃放置6个月后各项指标均符合要求,质量指标无显著性差异。结论:A、B厂家生产的麦芽糖均可用于静注人免疫球蛋白(pH4)生产。

  • 标签: 麦芽糖 静注人免疫球蛋白(pH4) 质量可比性研究
  • 简介:摘要目的分析早产和足月儿母乳来源外泌体(breast milk extracellular vesicles,BM-EV)的蛋白组学差异。方法收集2019年在南京医科大学附属妇产医院出生的早产儿和足月儿母乳各3例,采用超速离心法提取外泌体。初步鉴定外泌体特征后,采用液相色谱-串联质谱法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)定量分析,筛选出早产儿BM-EV中显著上调的差异蛋白(差异倍数≥1.5且P<0.05),并进行GO和KEGG功能预测及相关信号通路分析。采用Mann-Whitney U检验或Fisher精确概率法进行组间比较。以Pearson相关分析描述样品间蛋白定量值的相关性。使用t检验比较2组样本间蛋白丰度的差异,并对结果进行多重校正。应用超几何分布检验,筛选出差异蛋白中显著富集的GO和KEGG通路条目。结果(1)早产和足月组初产母亲分别为3例和1例。足月儿和早产儿BM-EV存在标记性蛋白分子分化簇9、分化簇81和热休克蛋白70。(2)6个样本组间可比性较好,组内重复性较高,样品间蛋白定量值的相关性最高达0.99。早产和足月儿样本的变异系数分别为11.21%和19.72%,且早产样本的变异系数比较集中。(3)鉴定得到945种蛋白。早产与足月儿BM-EV之间存在156种差异蛋白,其中在早产儿BM-EV中有83种上调。早产儿BM-EV中丰度值前3位的蛋白分别为补体C4a、脂肪酸合成酶和硬化蛋白结构域蛋白-1。(4)GO功能预测中富集度最高的生物过程或细胞成分主要集中在血红蛋白和糖原的合成,参与免疫突触的构成,Fc γ受体信号通路介导的吞噬作用等。KEGG信号通路相关性最高的通路为核糖体相关通路、补体和凝血级联、中性粒细胞胞外陷阱形成和Fc γ受体介导的吞噬作用等。结论早产儿BM-EV中显著上调的差异蛋白可能通过参与调节早产儿的免疫、胃肠道功能和能量代谢过程,从而发挥保护作用。

  • 标签: 乳,人 外泌体 细胞外囊泡 蛋白质组学 婴儿,早产
  • 简介:摘要目的观察氯沙坦钾联合贝前列素钠治疗对减少腹透液蛋白丢失的作用。方法选择2019年1月至2020年1月在本院行连续性非卧床腹膜透析(CAPD)的92例终末期肾脏病(ESRD)患者为研究对象,随机分为对照组和观察组,每组各46例。对照组行CAPD治疗及ESRD常规治疗;观察组在对照组治疗的基础上,给予患者口服氯沙坦钾药物以及贝前列素钠治疗。比较两组治疗前、治疗6个月后的24 h腹透液蛋白总量、血清白蛋白量、血尿素氮、血肌酐水平。结果治疗6个月后,观察组的24 h腹透液蛋白量、血尿素氮、血肌酐较治疗前下降,血清白蛋白量较治疗前增加,差异均有统计学意义(均P<0.05)。对照组的24 h腹透液蛋白量、血尿素氮、血肌酐较治疗前下降,血清白蛋白量较治疗前增加,但差异均无统计学意义(均P>0.05)。观察组的24 h腹透液蛋白量、血尿素氮、血肌酐较对照组下降,血清白蛋白量较对照组增加,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论氯沙坦钾联合贝前列素钠治疗能减少腹透液蛋白的丢失,改善患者的营养状况及腹膜功能,减少腹透相关并发症,值得临床推广。

  • 标签: 腹膜透析 氯沙坦 贝前列素钠 透析液 蛋白质类
  • 简介:目的:研究食管癌癌变过程中血清低分子量蛋白的细微变化,探索食管癌发生的机制、寻找食管癌早期诊断的生物标志物和方法。方法:应用表面激光解析电离飞行时间质谱技术对食管癌患者和健康对照血清进行蛋白谱指纹图谱检测,通过BiomarkerWizard软件筛选差异蛋白,使用人工神经网络软件建立食管癌早期诊断模型并用盲法验证其诊断效果;将食管癌早期和中晚期食管癌患者血清质谱图进行比对分析,寻找各期差异蛋白,并建立分期诊断模型。结果:发现食管癌和正常人差异蛋白5种,早期食管癌和中晚期食管癌差异蛋白3种。通过早期食管癌组和健康对照组建立早期诊断模型的灵敏度87.88%,特异度91.43%,准确度89.71%,经过盲法验证结果为灵敏度95.83%,特异度89.13%,准确度91.43%。建立的分期诊断模型中,早期食管癌和中晚期筛选的差异蛋白建立的分期诊断模型灵敏度75.76%,特异度79.17%,准确度77.19%。结论:表面增强激光解析离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)联合人工神经网络技术操作较为简便,在食管癌的诊断和分期上具有可行性。

  • 标签: 食管癌 蛋白组学 分期 诊断模型 SELDI-TOF-MS
  • 简介:目的研究电磁辐射对家兔小脑谷氨酸受体2(glutamatereceptor2,GluR2)蛋白表达和磷酸化水平的影响,探讨电磁辐射对小脑运动性学习记忆的神经信号传导通路的损伤特点。方法30只二级日本大耳自家兔随机分为对照组和电磁辐射组(包括辐射后0、3、24和72h等4个时相组)。辐射组给予平均功率密度为65mW/cm^2S波段电磁波持续辐射30min,测定辐射前和辐射后即刻家兔的肛温并计算比吸收率值;采用Westernblot方法检测小脑GluR2蛋白表达及其磷酸化水平。结果电磁辐射后0h家兔肛温升高2.35℃,SAR值为19.00J/(kg·s);小脑GluR2蛋白表达水平无显著变化,但GluR2蛋白磷酸化水平在电磁辐射后0h显著降低。结论65mW/cm^2电磁辐射30min可使家兔机体产生明显热效应,并导致小脑GluR2的磷酸化水平下降,将最终影响运动性学习记忆功能。

  • 标签: 电磁辐射 小脑 谷氨酸受体2 蛋白质磷酸化 家兔
  • 简介:摘要目的观察延续护理对慢性肾脏病3~5期患者蛋白能量和脂质代谢的影响。方法选择2015年5月至2016年5月就诊于深圳市第六人民医院肾内科的3~5期慢性肾脏病患者200例为研究样本,以随机数字表法分为对照组和实验组,各100例。对照组施以一般护理与出院时健康指导干预,实验组在此基础上加用为时一年的延续护理干预,对两组干预后的各观察指标进行比较。结果实验组3~5期慢性肾脏病患者干预后健康管理行为依从率和护理供给满意率显著高于对照组,蛋白能量和脂质代谢紊乱发生率显著低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论将延续护理应用于慢性肾脏病3~5期患者蛋白能量和脂质代谢管理之中,可显著提升该类患者健康管理行为依从率,降低其蛋白能量和脂质代谢紊乱发生率。

  • 标签: 延续护理 慢性肾脏病 蛋白质能量 脂质代谢
  • 简介:目的研究个体化饮食营养干预对维持性血液透析患者蛋白热能耗损(PEW)状态的影响。方法选取2014年2月~2016年3月我院进行维持性血液透析的73例患者,全部患者均通过体质量指数(BMI)、血清蛋白检测及饮食情况分析,对其PEW情况进行评估,并依据评估结果实施对应的个体化饮食营养干预。观察干预后PEW情况及单项异常发生的情况。结果干预后PEW发生率及BMI、血清蛋白、饮食情况异常较干预前均明显降低(P〈0.05),干预结束时与干预2个月后各单项指标异常情况比较差异无统计学意义(P〉0.05),干预结束时营养状况明显优于干预前(P〈0.05)。结论在维持性血液透析患者的治疗期间实施个体化饮食营养干预,具有良好的临床效果,能明显减少患者PEW的发生,使患者的治疗预后效果提高。

  • 标签: 饮食营养干预 血液透析 蛋白质消耗
  • 简介:摘要目的探索胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP2)对胰腺癌进展及其免疫微环境的影响。方法胰腺癌及癌旁正常胰腺组织取自2009年1月至2015年12月天津医科大学总医院的50例胰腺癌手术患者,利用免疫组化和qRT-PCR法检测组织中IGFBP2的表达,并分析其表达水平与临床肿瘤分期及预后的关系。以体重20~25 g健康雄性C57BL/6小鼠建立IGFBP2过表达组和对照组原位胰腺癌小鼠模型各23只,建模后不同时间测量小鼠胰腺癌生长及肝转移情况,并通过流式细胞术检测肿瘤浸润性免疫细胞亚群变化。结果免疫组化结果显示IGFBP2在人癌旁正常胰腺组织中表达阴性,在胰腺癌组织中表达阳性,其中高表达28例,低表达22例。qRT-PCR结果显示IGFBP2在人胰腺癌组织中的表达水平(11.01±5.07)较对应的癌旁正常胰腺组织(1.26±0.55)升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。IGFBP2低表达和高表达患者中TNM分期为T1-2期的比例分别为68.1%(15/22)和46.4%(13/28),且IGFBP2低表达患者总生存期显著好于高表达患者(中位生存期20.5个月比8.0个月),差异均具有统计学意义(P<0.05)。IGFBP2过表达组荷瘤小鼠胰腺癌组织的最大截面积(181.10±18.86)mm2、肿瘤重量(0.64±0.15)g和肝脏转移灶数量(2.75±1.39)个均大于对照组(150.30±18.01)mm2、(0.41±0.11)g、(0.63±0.74)个,但生存期短于对照组(中位生存期38.0 d比36.0 d),差异均具有统计学意义(均P<0.05)。IGFBP2过表达组荷瘤小鼠胰腺癌组织较对照组胰腺癌组织中的M2/M1巨噬细胞比例、调节性T细胞比例上升,CD8+ T细胞比例下降,CD8+ T细胞中凋亡细胞比例上升,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。结论IGFBP2通过诱导免疫抑制性肿瘤微环境促进胰腺癌进展。

  • 标签: 胰岛素样生长因子结合蛋白质2 胰腺癌 免疫抑制性肿瘤微环境
  • 简介:目的应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI—TOF—MS)蛋白芯片技术探讨联合前列腺特异抗原(PSA)早期诊断前列腺癌的方法。方法以病理确诊的45例前列腺癌和45例良性前列腺增生患者血清为研究对象,采用SELDI蛋白芯片技术检测血清的蛋白表达图谱.分析差异蛋白。用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清PSA,对所得差异蛋白联合PSA进行分析。结果在前列腺癌和良性前列腺增生患者血清中检测到9个差异蛋白(P〈0.01),前列腺癌患者差异蛋白7个高表达,2个低表达。联合相对分子质量3771.14和4481.59两个差异蛋白诊断前列腺癌,其敏感性为86.67%,特异性为88.89%。3771.14蛋白与血清PSA诊断前列腺癌具有很强的互补性。结论通过SELDI蛋白芯片技术可以筛选出前列腺癌的潜在标志蛋白。多个差异蛋白联合检测可以提高前列腺癌诊断的敏感性和特异性;联合3771.14蛋白与血清PSA可以更好地早期诊断前列腺癌。

  • 标签: 前列腺肿瘤 早期诊断 蛋白质阵列分析 前列腺特异抗原